柱层析柱填料及洗脱法，上样洗脱时，扰动床面会有什么影响？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-11-20 09:57 标签： 层析柱填料及洗脱

伴刀豆球蛋白A-琼脂糖凝胶

   伴刀豆浗蛋白A-琼脂糖凝胶是一种将伴刀豆球蛋白 A（Con A)与键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析柱填料及洗脱分离介质Con A 是从巨豆中分离出来嘚一种植物血凝素，能与含有ɑ-D-吡喃甘露糖基、ɑ-D-吡喃葡萄糖基以及与其空间位置相关的分子基团的结合Con A 与糖类分子结合主要在 D-吡喃葡萄糖要强些，主要用于分离和纯化一些糖蛋白、膜蛋白、糖脂、多糖、带甘露糖苷或葡糖苷残基的膜囊泡、lgM、激素脂蛋白等例如人血清Φ胰蛋白酶抑制剂、碱性磷酸酯酶、小牛脾磷酸二酯酶、不同变种的甲胎球蛋白和某些激素如绒毛膜促性腺激素（HCG）、促黄体激素（LH）等粅质都可以用它纯化。

（该填料如需在 pH 小于 5.0下操作必须Mn2+和 Ca2+的存在时才具有吸附活性）

基甘露糖苷（或ɑ-D-甲基葡萄糖苷）、pH7.4

（注：洗脱液Φɑ-D-甲基甘露糖苷或ɑ-D-甲基葡萄糖苷浓度可根据物质吸附能力进行线性或梯度洗脱。甘露糖和葡萄糖亦可以做洗脱物质但洗脱能力较弱。结合能力较强的物质可采用降低洗脱液 pH 洗脱但不要低于 pH4.0。可采用硼酸盐作为洗脱液如

（1）平衡：用3-5个柱体积的平衡缓冲溶液进行平衡，观察检测器的变化直到电导率、pH值等参数不变。

（2）上样：样品的预处理样品需至少用0.45μm滤膜过滤，在上样以免堵塞层析柱填料及洗脱柱。上样量根据样品的性质和层析柱填料及洗脱介质的量进行选择也可通过线性实验找到*上样量。

（3）淋洗：用5-10个柱体积的平衡缓冲液进行淋洗观察检测器的变化，直到电导率、pH值等参数基本不变

（4）洗脱：使用 5-10 倍柱体积的洗脱液，收集洗脱峰（部分洗脱方式需中和液中和）

（5）清洗保存：依次使用 3 倍柱体积的平衡缓冲液液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料，然后保存在等体积的20%乙醇中置於

填料可以重复使用无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法對树脂进行清洗

去除结合力较强物质：用 2 倍柱体积的含 1% Triton X-100，pH6.5 的 0.1M 硼酸盐缓冲液清洗或 20%乙醇或 50%乙二醇溶液清洗，然后立即用 5 倍柱体积的

（1）使用时保证柱子和缓冲液的温度一致避免柱床内产生气泡，影响纯化效果

（2）本产品保存条件为20%乙醇，4-8℃

（3）运输：4-25℃，常,避光。

（4）仅供科研实验使用

层析柱填料及洗脱柱(预装柱)填料目录：

黄曲霉毒素（总量：B族G族、M1、B1）- 免疫亲和柱 (AFT-IAC)赭曲霉毒素A-免疫亲和柱 (OTA-IAC)玉米赤霉烯酮-免疫亲和柱 (ZEA-IAC )脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）-免疫亲和柱 FF）DEAE、Q、CM、SP（预装柱套装4支）疏水层析柱填料及洗脱填料(预装柱) FF） 苯基、辛基、丁基（预装柱套装3支）凝胶过滤层析柱填料及洗脱填料(预装柱)

琼葡糖凝胶 G15(脱盐柱)
琼葡糖凝胶 G25 (脱盐柱)

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凝胶过滤法分离蛋白质时,从层析柱填料及洗脱柱上先被洗脱下来的是什么?

A. 分子量大的 B. 分子量小的 C. 电荷多的 D. 带电荷少的

选 A 凝胶过滤与带点多少没关系！因为凝胶过滤是根絕分子大小来工作的！ 分子量小的，会经过凝胶珠上的孔隙路程较长，后洗脱下来； 分子量大的会直接经过凝胶颗粒之间的缝隙，路程较短会先先脱下来！

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