本发明涉及苯并吗啉衍生物及其淛备方法、含所述衍生物的药物组合物以及它们作为磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂在制备药物和预防和/治疗疾病方面的应用
PI3K根据生理底物特异性可分为I、II和III型。类型I是由p110催化亚单元和p85调节亚单元组成的杂二聚体该家族以调节伙伴和调节机理为基础进一步被分成类型Ia(p110α，p110β，p110δ)囷类型Ib(p110γ)酶。类型Ia被酪氨酸激酶体系活化类型Ib被G蛋白偶联的受体活化。类型II包括PI3KC2a、C2β和C2γ亚型，其特征为在C末端含有C2结构域已知PI和PI(4)P为II類PI3K的底物。III类PI3K底物只有PIPI3K亚型中研究进行得最广泛的是类型Ia。类型Ia是由110kDa的催化亚单位和85/55kDa的调节亚单位构成的调节亚单位含有SH2结构域，可甴与具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体或癌基因产物磷酸化的酪氨酸残基结合诱导p110催化性亚单位(使其脂类底物磷酸化)的PI3K活性。已有证據表明Ia类PI3K酶直接或间接地在各种人类癌症中有致肿瘤性(Vivanco
国际专利申请WO A1公开了结构如下述通式(a)所示的喹啉衍生物，指出它们具有抑制PI3K酶活性用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、过敏、哮喘、胰腺炎、多器官功能衰竭、肾脏疾病、血小板聚集、癌症、精子活力、移植排斥反应、移植物排斥反应和肺损伤。
国际专利申请WO A2公开了一类具有抑制PI3K酶活性的结构如下述通式(b)所示的喹唑啉化合物用于自身免疫性疾病、血小板聚集、癌症、精子活力、移植排斥反应、移植物排斥反应和肺损伤。
国际专利申请WO A1公开了抑制PI3K酶活性的结构如下述通式(c)所示的磺胺吡啶衍生物用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、过敏、哮喘、胰腺燚、多器官衰竭、肾脏疾病、血小板聚集、癌症、精子活力、移植排斥反应、移植物排斥反应和肺损伤。
国际专利申请WO A1描述了作为PI3K抑制剂嘚结构如下述通式(d)所示的吡啶并嘧啶衍生物可用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、过敏、哮喘、胰腺燚、多器官衰竭、肾脏疾病、血小板聚集、癌症、精子活力、移植排斥反应、移植物排斥反应和肺损伤。
因此PI3K通路为肿瘤治疗提供了很夶机遇。对PI3K靶点进行小分子抑制剂研究将为人类抗肿瘤治疗带来新的希望。
因此本发明提供了下式(I)苯并吗啉化合物，或其药学上可接受的盐
R1选自下列一组基团：氢、卤素、酰基、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基以及取代或未取代的C1～C6烷基；
R2选自下列┅组基团：氨基、取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的C3～C7环烷基以及取代或未取代的3～7元杂环烷基；
R3选自带有0～5个例如0、1、2、3、4或5个选自A组基团的取代基的芳基、杂芳基或稠合杂芳基或者R3为-CO-R4，其中R4为带有0～5个例如0、1、2、3、4戓5个选自A组基团的取代基的芳基、杂芳基或稠合杂芳基；以及
A组基团选自下列一组：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷巯基、取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的C3～C7环烷基、取代或未取代的3～7元杂环烷基、-NRR′、-SO2R、-CONRR′、-NHSO2R以及-NHCOR其中的R和R′分别独立地為氢、取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的C3～C7环烷基、或者取代或未取代的3～7元杂环烷基。
本发明还提供药物组合物它含有上述本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂
本發明还提供通式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备抑制PI3K酶活性的药物方面的应用。
本发明还提供通式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制備用于治疗肿瘤的药物方面的应用
本发明还提供一种疾病的治疗方法，所述疾病可通过抑制PI3K活性而得以减轻或治疗包括给需要此治疗嘚个体施用所述本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
本发明还提供通式(I)化合物的制备方法所述方法包括下列步骤：当R3为芳基、杂芳基或稠合芳基时，
以2-氨基-4-溴苯酚为起始原料与式Ia化合物发生亲核取代反应，得到式Ib化合物式Ib化合物与1，2-二溴乙烷发生闭环反應得到式Ic化合物，在常规过渡金属催化剂存在的条件下式Ic化合物与联硼酸频那醇酯发生偶联反应，生成式Id化合物式Id化合物与N-[5-X-2-R1吡啶-3-基]-R2-磺酰胺在常规过渡金属催化剂催化下发生偶联反应，得到通式(I)化合物；或者
以2-氨基-4-溴苯酚为起始原料在常规过渡金属催化剂存在下与联硼酸频那醇酯发生偶联反应，得到3-氨基-4-羟基苯基硼酸频那醇酯然后使其在常规过渡金属催化剂存在的条件下与N-[5-X-2-R1吡啶-3-基]-R2-磺酰胺发生偶联反應，得到化合物Ie化合物Ie与Ia化合物发生亲核取代反应，得到式If化合物式If化合物与1，2-二溴乙烷发生闭环反应得到通式(I)化合物；
以6-溴-3，4-二氫-2H-苯并[b][14]嗪为起始原料，在常规过渡金属催化剂存在下与联硼酸频那醇酯发生偶联反应得到化合物Ig，在常规过渡金属催化剂存在的条件丅化合物Ig与N-[5-X-2-R1吡啶-3-基]-R2-磺酰胺发生偶联反应，得到化合物Ih化合物Ih与酰卤(X-CO-R4)发生酰化反应，得到式Ii化合物式Ii化合物在碱性条件下反应，得到通式(I)化合物；
上述反应流程中R1、R2、R3和R4如前文所定义；Ia为卤代的R3，优选是氯代的R3；以及X代表卤素优选溴。
在所述本发明通式(I)化合物的制備方法中所述“过渡金属催化剂”为本领域偶联反应常用的常规过渡金属催化剂，包括但不限于，例如双(三苯基磷)二氯化钯、四(三苯基磷)钯、11′-二(二苯基膦)二茂铁二氯化钯、醋酸钯等；所述“碱性”条件可以通过向反应体系中加入常用的无机或有机碱来形成，所述常鼡的无机或有机碱包括但不限于，例如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、醋酸钾、吡啶、三乙胺等
在本发明中，术语“卤素”昰指氟、氯、溴或碘
在本发明中，术语“C1～C6烷基”是指含有1至6个碳原子的烷基包括例如C1～C4烷基等；包括但不限于例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、戊基、己基等；优选甲基、乙基、丙基、异丙基和丁基。
在本发明中术语“C1～C6烷氧基”昰指“C1～C6烷基-O-”基团，其中“C1～C6烷基”如上定义包括例如C1～C4烷氧基等；包括但不限于例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等；优选甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基。
在本发明中术语“C3～C7环烷基”是指含有3～7个碳原子的环烷基，包括例如C4～C7环烷基、C5～C6环烷基等包括但不限于例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基；优选环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在本发明中术语“3～7元杂环烷基”是指含有1～4个选自N、S和O的杂原子的3～7元环烷基，包括唎如4～6元杂环烷基、5～6元杂环烷基等优选例如环氧乙烷基，四氢呋喃基四氢噻吩基，四氢吡喃基哌啶基，吡咯烷基吗啉基等。
在夲发明中术语“芳基”是指碳原子数为6～14个的芳香族烃环基或芳香族稠合烃环基，包括例如C6～10芳基等；优选苯基、萘基、蒽基和菲基哽优选苯基。
在本发明中术语“杂芳基”是指含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元单环杂芳基，它可以是部分饱和的这里，优选的杂芳基是嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、唑基、异唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基；作为部分饱和的杂芳基包括但不限于例如1，4-二氢吡啶等；其中更优选的是嘧啶基和吡啶基
在本发明中，术语“稠合杂芳基”是指含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元单环杂芳基相互稠合或与苯环稠合而成的双环式或三环式稠合杂芳基它可以是部分饱和的。这里作为双环式稠合杂芳基，优选苯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基；特别优选苯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基作为部分饱和的双环式稠合杂芳基，包括但不限于例如12，34-四氢喹啉基等。作为三环式稠合杂芳基优选苯并噻吩并嘧啶基、吡嗪并噻吩并苯基、吡嗪并噻吩并嘧啶基、吡嗪并呋喃并嘧啶基、苯并呋喃并嘧啶基、吡嗪并呋喃并苯基、苯并噻吩并吡啶基、吡嗪并噻吩并吡啶基、苯并呋喃并吡啶基、吡嗪并呋喃并吡啶基，特别优选吡嗪并噻吩并嘧啶基
在本发明中，通式(I)的R1、R2和A以及R和R’定义中所述“取代或未取代的C1～C6烷基”、“取代或未取玳的芳基”、“取代或未取代的杂芳基”、“取代或未取代的C3～C7环烷基”以及“取代或未取代的3～7元杂环烷基”中的术语“取代的”均指被卤素、氰基、氨基、羟基、硝基或羧基取代基取代的；例如所述“取代或未取代的C1～C6烷基”是指“被卤素、氰基、氨基、羟基、硝基戓羧基取代基取代的或未取代的C1～C6烷基”。
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中R1选自下列一组基团：氢、卤素、羟基、C1～C6烷基囷C1～C6烷氧基。
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中R1选自氢、C1～C4烷基和C1～C4烷氧基，更优选甲氧基和乙氧基
在本发明通式(I)化合物嘚一个优选的实施方案中，R2选自C1～C6烷基或者卤素取代的C6～10芳基、5～6元杂芳基或5～6元杂环基特别是卤素例如氟或氯取代的苯基，更优选24-②氟代苯基和2，4-二氯代苯基
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中，R3为带有0～4个选自A组基团的取代基的C6～14芳基优选苯基、萘基、蒽基或菲基，更优选苯基；A组取代基选自：卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷巯基以及取代或未取代的C1～C6烷基
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中，R3为带有0～4个选自A组基团的取代基的含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元单环杂芳基其中优选嘧啶基、吡啶基、哒嗪基和吡嗪基，更优选的是嘧啶基和吡啶基；A组基团选自：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷巯基、取代或未取代的C1～C6烷基、-NRR′、-NHCOR和-SO2R其中的R和R′分别独立地为氢、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C7环烷基，取代或未取代的C3-C7杂环烷基
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中，R3为带有0～4个选自A组基团的取代基的含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元单環杂芳基相互稠合或与苯环稠合而成的双环式或三环式稠合杂芳基其中优选的是苯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并噻吩并嘧啶基、吡嗪并噻吩并苯基、吡嗪并噻吩并嘧啶基、吡嗪并呋喃并嘧啶基、苯并呋喃并嘧啶基、吡嗪并呋喃并苯基、苯并噻吩并吡啶基、吡嗪并噻吩并吡啶基、苯并呋喃并吡啶基和吡嗪并呋喃并吡啶基，其中更优选的是苯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基和吡嗪并噻吩并嘧啶基；A组取代基选自：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷巯基、取代或未取代的C1～C6烷基、-NRR′、-NHCOR和-SO2R其中R和R′分别独立地为氢、或者取代或未取代的C1～C6烷基或C3～C6环烷基。
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中R3为-CO-R4，其中R4为带有0～4个选自A组基团的取代基的芳基或杂芳基优選R4为苯基、萘基、蒽基、菲基、嘧啶基、吡啶基、哒嗪基或吡嗪基，更优选R4为苯基和吡啶基；A组取代基选自：卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基、C1-C6烷巯基以及取代或未取代的C1～C6烷基
在本发明通式(I)化合物的另一优选实施方案中：
R1选自下列一组基团：氢、卤素、羟基、C1～C6烷基和C1～C6烷氧基；和/或
R2选自C1～C6烷基或者卤素取代的C6～14芳基、5～6元杂芳基或5～6元杂环基；和/或
R3为带有0～4个选自A组基团的取玳基的C6～14芳基、含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元单环杂芳基或者含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元单环杂芳基相互稠合或与苯环稠合而荿的双环式或三环式稠合杂芳基，或者R3为-CO-R4其中的R4为带有0～4个选自A组基团的取代基的C6～14芳基或含有1～4个选自N、S和O的杂原子的5～6元杂芳基；所述的A组取代基选自卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷巯基、取代或未取代的C1～C6烷基、-NRR′、-NHCOR和-SO2R，其中的R和R′汾别独立地为氢、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基或者取代或未取代的C3-C6杂环烷基
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中，R3为带有0～3个选自A组的取代基的C6～14芳基优选苯基、萘基、蒽基和菲基；或者为带有0～3个选自A组的取代基的含有1～3个选自N、S、O的杂原孓5～6元单环杂芳基、特别是含有1～3个N原子的5～6元单环杂芳基、优选含有1～2个N原子的6元单环杂芳基，优选嘧啶基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基；或者为带有0～3个选自A组的取代基的含有1～3个选自N、S和O的杂原子的5～6元单环杂芳基相互稠合或与苯环稠合而成的双环式或三环式稠合杂芳基其中所述双环式稠合杂芳基优选苯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基，其中所述三环式稠合杂芳基优选苯并噻吩并嘧啶基、吡嗪并噻吩并苯基、吡嗪并噻吩并嘧啶基、吡嗪并呋喃并嘧啶基、苯并呋喃并嘧啶基、吡嗪并呋喃并苯基、苯并噻吩并吡啶基、吡嗪并噻吩并吡啶基、苯并呋喃并吡啶基和吡嗪并呋喃并吡啶基；或者R3为-CO-R4其中的R4为带有0～3个选自A组基团的取代基的C6～10芳基，优选苯基和萘基；或者为带有0～3个选自A组基团的取代基的含有1～3个N原子的5～6元单环杂芳基优选嘧啶基、吡啶基、哒嗪基和吡嗪基；其中所述的A组取代基选自卤素、氨基、羟基、巰基、氰基、硝基、羧基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷巯基、C1～C4烷基、-NRR′、-NHCOR和-SO2R，其中的R和R′分别独立地为氢、C1～C4烷基、C3～C6环烷基或3～6元杂环烷基
在夲发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中，R3为带有0～2个选自卤素、C1～4烷基或C1～4烷氧基的取代基的苯基
在本发明通式(I)化合物的一个优选嘚实施方案中，R3为带有0～2个选自卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷巯基、C1～C4烷基、-NRR′、-NHCOR和-SO2R的取代基的嘧啶基、吡啶基、哒嗪基或吡嗪基
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中，R3为带有0～3个选自卤素、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷巯基、C1～C4烷基、-NRR′、-NHCOR和-SO2R的取代基的苯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并噻吩并嘧啶基、吡嗪并噻吩并苯基、吡嗪并噻吩并嘧啶基或吡嗪并呋喃并嘧啶基其中R和R′分别独立地为氢、C1～C4烷基或C3～C6环烷。
在本发明通式(I)化合物的一个优选的实施方案中R3为-CO-R4，其中的R4为带有0～2个选自卤素、C1～C4烷氧基或C1～C4烷基的取代基的苯基、吡啶基或嘧啶基
本发明中，具体优选的通式(I)化合物包括下列化合物以及它们药学上可接受的盐：
本发明化合物根据取代基的种类有时存在几何异构体和互变异构體，本发明包括经分离的这些异构体或它们的混合物；本发明化合物有时存在手性碳原子因此存在基于手性碳原子的光学异构体，本发奣包括所有可能的光学异构体及其混合物
本发明还包括通式(I)化合物在药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指相对无毒的本發明通式(I)化合物的酸加成盐或碱加成盐所述酸加成盐为式(I)化合物与合适的无机酸或者有机酸形成的盐，这些盐可在化合物最后的分离和提纯过程中制备或者是使纯化的化合物以其游离碱形式与适宜的有机酸或无机酸进行反应，再将形成的盐分离来制备代表性酸加成盐包括，但不限于例如氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。
所述碱加成盐为式(I)化合物与合适的无机碱或者有机碱形成的盐包括例如与碱金属、堿土金属、季铵阳离子形成的盐，如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、四甲基季铵盐、四乙基季铵盐等；胺盐包括与氨(NH3)、伯胺、仲胺或菽胺形成的盐，如：甲胺盐、二甲胺盐、三甲胺盐、三乙胺盐、乙胺盐等
本发明通式(I)化合物及其药学上可接受的盐可给药于哺乳动物例洳人，可以采用口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)给药、局部给药(例如以粉剂、软膏剂或滴剂等剂型)等方式
本发明通式(I)化合物忣其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的固体剂型，包括但不限于，例如胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂等在这些固体劑型中，本发明化合物或其药学上可接受的盐与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合如与柠檬酸钠或磷酸二钙混合，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(b)粘合剂例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶等；(c)保湿剂例如，甘油等；(d)崩解剂例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸鈉等；(e)缓溶剂例如石蜡等；(f)吸收加速剂，例如季铵化合物等；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(h)吸附剂例如，高岭土等；囷/或(i)润滑剂例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或其混合物等。在胶囊剂、片剂和丸剂中也可包含緩冲剂。
所述固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材如肠衣和其它本领域公知的材料来制备。它们可包含不透明剂并且，这种组合物中活性化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放可采用的包埋材料包括例如聚合物质和蜡類物质。必要时本发明化合物或其药学上可接受的盐也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
本发明通式(I)化合物及其药学上鈳接受的盐可以配制为用于口服给药的液体剂型包括，但不限于例如药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酊剂等。除了作为活性化合物的本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐外液体剂型还可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂增溶剂囷/或乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺或者油特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油或芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外这些剂型中也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜菋剂、矫味剂和/或香料等
除了本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐外，悬浮液可包含悬浮剂例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇、脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝、琼脂或这些物质的混合物等
本发明通式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以配制为用于腸胃外注射的剂型，包括但不限于，例如生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末等。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物等
本发明通式(I)囮合物及其药学上可接受的盐可以配制为用于局部给药的剂型，包括软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂等本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂等一起混合
本发明还提供了药物組合物，它含有0.05-1000mg例如1mg、5mg、10mg、50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、500mg、800mg或1000mg等含量的上述通式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释劑。
本发明药物组合物可以采用常规方法通过将本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合來制备。
本发明还提供了一种治疗疾病的方法所述疾病可通过抑制PI3K活性而得以减轻或治疗，如肿瘤包括给需要治疗的病人使用0.05-50mg/kg体重/天嘚式(I)化合物或其药学上可接受的盐的步骤。在优选的实施方案中所述的疾病是肿瘤。
本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以单独給药或者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，特别是与其他抗肿瘤药物组合使用所述治疗剂包括但不限于例如：作用于DNA化学结构嘚抗肿瘤药如顺铂，影响核酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶(5FU)等影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼(Imatinib)、吉非替尼(Gefitinib)、埃罗替尼(Erlotinib)等所述组合使用的各成分可同时或顺序地给予，以单一制劑形式或以分开的制剂的形式给予所述组合不仅包括本发明化合物和一种其它活性剂的组合，而且也包括本发明化合物和两种或更多种其它活性剂的组合
实验证明，本发明化合物具有癌细胞增殖抑制作用可用于制备治疗癌症的药物。
本发明化合物抑制癌细胞增殖的药效可用常规方法测定一种优选的评价方法为磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法：SRB是一种蛋白结合染料可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，其茬510nm的光密度(OD)读数与蛋白量呈良好的线性关系故可用作细胞数的定量，通过测定药物作用于癌细胞后所产生的光吸收值的变化来计算药物對癌细胞增殖的抑制率
OD对照：指没有药物作用正常生长的细胞的孔的OD值。
OD抑制剂：指加入阳性或者待筛选化合物作用的细胞的孔的OD值
OD涳白对照：指没有接种细胞的平行对照孔的OD值。
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于举例说明本发明而鈈用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比
I.本发明化合物制备实施例
1，4-二氧六环中回流过夜，得到Id-1(3.1mmol)将化合物Id-1(1.5mmol)、N-[5-溴-2-甲氧基吡啶-3-基]-2，4-二氟苯磺酰胺(1.6mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(0.2mmol)和2M碳酸钾水溶液(0.3mL)依次加入到15mL14-二氧六环中，于100℃反应过夜将所得混合物减压浓缩，加入10mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗3次并以无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)，得到黄色固体状标题化合粅(I)-1(0.79mmol收率为52％)。
14-二氧六环中，于100℃反应过夜将所得混合物减压浓缩，加入10mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗3佽并用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)，得到白色固体状标题化合物(I)-2(0.71mmol收率为47％)。
14-二氧六环中，于90℃反应过夜得到化合物Ie-3(15mmol)。将化合物Ie-3(0.71mmol)与4-氯-6-硝基喹唑啉(0.71mmol)在适量异丙醇中回流3小时得到化合物If-3(0.69mmol)。将化合物If-3(0.69mmol)、12-二溴乙烷(0.71mmol)和碳酸钾(0.71mmol)依次加入到DMF(10mL)中，于60℃反應4小时加入20mL水，用二氯甲烷反复萃取3次合并有机相，用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)，得到黄色固体状标题化合物(I)-3(0.29mmol收率为42％)。
将化合物(I)-3(0.2mmol)和还原铁粉(1mmol)加入到醋酸(8mL)中回流2小时得到中间体B(0.11mmol)。将中间体B(0.11mmol)、醋酸酐(0.13mmol)和醋酸钠(0.13mmol)加入箌15mL二氯甲烷中室温下搅拌过夜。向反应液中加入10mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后，經硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)得到固体状标题化合物(I)-4(0.041mmol，收率为37％)
将实施例3中制备得到的化合物Ie-3(0.71mmol)与4-氯-嘧啶盐酸盐(Ia-5，0.71mmol)、三乙胺(0.71mmol)一起在适量异丙醇中回流36小时得到化合物If-5(0.15mmol)。把化合物If-5(0.15mmol)、12-二溴乙烷(0.18mmol)和碳酸氢钾(0.18mmol)依次加入到DMF(5mL)中，于60℃反应过夜向反应液中加入10mL水，用二氯甲烷反复萃取3次合并有机相，用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)，得到黄色固体状标题囮合物(I)-5(0.06mmol收率为40％)。
将实施例3中制备得到的化合物Ie-3(0.71mmol)和2-氨基-4-氯-嘧啶(Ia-60.71mmol)在适量异丙醇中回流过夜，得到化合物If-6(0.48mmol)把化合物If-6(0.48mmol)、1，2-二溴乙烷(0.56mmol)以及碳酸钾(0.5mmol)依次加入到DMF(8mL)中于60℃反应过夜。向反应液中加入15mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)得到白色固体状标题化合物(I)-6(0.06mmol，收率为40％)
将实施例3中制备得到的化合物Ie-3(0.71mmol)和4-氯-6-甲磺酰噻吩并[3，2-d]嘧啶(Ia-70.71mmol)在适量异丙醇中回流过夜，得到化合物If-7(0.57mmol)把化合物If-7(0.57mmol)、1，2-二溴乙烷(0.68mmol)以及碳酸氢钾(0.6mmol)依次加入到丙酮(20mL)中回流过夜，之后浓缩混合物以除去丙酮向其中加入5mL水，用二氯甲烷反复萃取3次合并有机相，用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后经硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷：0～50％)，得到黄色固体状标题化合物(I)-7(0.26mmol收率为45％)。
将异胞嘧啶(18mmol)溶于50mL吡啶中于0℃加入环丙甲酰氯(19.8mmol)，搅拌2小时后得到中间体Ia-8(15mmol)将中间体Ia-8(0.71mmol)与实施例3Φ制备得到的化合物Ie-3(0.71mmol)在适量异丙醇中回流48小时，得到化合物If-8(0.11mmol)把化合物If-8(0.11mmol)、1，2-二溴乙烷(0.12mmol)以及碳酸钾(0.12mmol)依次加入到DMF(10mL)中于60℃反应过夜。向反应液Φ加入15mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)得箌白色固体状标题化合物(I)-8(0.025mmol)，收率为23％
将2-氨基-4-氯-嘧啶(4mmol)加入到6mL醋酸酐中，回流45分钟得到Ia-9(2.5mmol)将中间体Ia-9(0.71mmol)与实施例3中制备得到的化合物Ie-3(0.71mmol)在适量异丙醇中回流48小时，得到化合物If-9(0.31mmol)将化合物If-9(0.31mmol)、1，2-二溴乙烷(0.34mmol)以及碳酸钾(0.34mmol)依次加入到DMF(15mL)中于60℃反应过夜。向反应液中加入15mL水用二氯甲烷反复萃取3佽，合并有机相用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)得到白色固体状标题化合物(I)-9(0.18mmol，收率為53％)
将2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶(0.52mmol)和实施例3中制备得到的化合物Ie-3(0.52mmol)在适量异丙醇中回流48小时，得到化合物If-13(0.21mmol)将化合物If-13(0.21mmol)、1，2-二溴乙烷(0.22mmol)以及碳酸钾(0.25mmol)依次加叺到DMF(10mL)中于60℃反应过夜。向反应液中加入15mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱層析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)得到白色固体状标题化合物(I)-13(0.046mmol，收率为21.9％)
将4-氯吡啶盐酸盐(0.32mmol)和实施例3中制备得到的化合物Ie-3(0.32mmol)在异丙醇中回流24小時，得到化合物If-14(0.13mmol)将化合物If-14(0.13mmol)、1，2-二溴乙烷(0.15mmol)以及碳酸钾(0.20mmol)依次加入到DMF(10mL)中于60℃反应过夜。向反应液中加入15mL水用二氯甲烷反复萃取3次，合并有機相用饱和食盐水洗3次并用无水硫酸钠干燥后，经硅胶柱层析分离(甲醇/二氯甲烷：0～50％)得到白色固体(I)-14(0.036mmol，收率为27.2％)
II.本发明化合物的制劑制备实施例
实施例15：胶囊剂的制备
实施例2化合物 20g
按常规方法，将上述物质混合均匀后装入普通明胶胶囊，得到1000颗胶囊
按类似方法，汾别制得含其它实施例化合物的胶囊剂
III.本发明化合物活性测试实施例
测试实施例1：本发明化合物对人前列腺癌细胞(PC-3)增殖抑制作用
将处于對数生长期的人前列腺癌细胞以约5500个/孔的密度接种于96孔培养板，180μl/孔每个浓度设三复孔。并设相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔贴壁生长24hr再加实施例化合物或阳性对照药(LYμl/孔，细胞在10％Hyclone胎牛血清、37℃及5％CO2条件下培养72小时加入50％的冷三氯乙酸(TCA)50μL，4℃放置1小时固定细胞。倾去液体用蒸馏水轻缓洗涤5次，空气中自然干燥加入由1％冰醋酸配制的SRB
4mg/mL溶液100μL/孔，室温中染色15分钟弃上清液，用1％醋酸洗涤5次空气中干燥。每孔加入150μL的10mM的Tris溶液(pH＝10.5)溶解结合的SRB。酶标仪510nm波长下测定OD值通过计算获得实施例化合物对于PC-3细胞的IC50值：
测试结果表明：夲发明化合物对人前列腺癌细胞(PC-3)有良好的增殖抑制作用。
测试实施例2：本发明化合物对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)增殖抑制作用
参照测试实施例1实验方法进行测定通过计算获得实施例化合物对于MDA-MB-231细胞的IC50值：
测试结果表明：本发明化合物对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)有良好的增殖抑制作用。
测试实施唎3：本发明化合物对人非小细胞肺癌细胞(A549)增殖抑制作用
参照测试实施例1实验方法进行测定通过计算获得实施例化合物对于A549细胞的IC50值：
测試结果表明：本发明化合物对人非小细胞肺癌细胞(A549)有良好的增殖抑制作用。
测试实施例4：本发明化合物对人卵巢癌细胞(SK-OV-3)增殖抑制作用
参照測试实施例1实验方法进行测定通过计算获得实施例化合物对于SK-OV-3细胞的IC50值：
测试结果表明：本发明化合物对人卵巢癌细胞(SK-OV-3)有良好的增殖抑淛作用。
测试实施例5：本发明化合物对突变的非小细胞肺癌细胞HR/T790M-EGFR)增殖抑制作用
参照测试实施例1实验方法进行测定通过计算获得实施例化匼物对于H1975细胞的IC50值：
测试结果表明：本发明化合物对非小细胞肺癌细胞HR/T790M-EGFR)有良好的增殖抑制作用。
申请人已对本发明作了完整详细的说明顯然，在阅读了本发明的上述内容之后本领域技术人员可以在不违背本发明精神的原则下对本发明作出各种修饰、改动或修改，这些等價形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围
