根据物质的化学性质对物质如何进行定性定量分析和定量分析的方法是那种方法

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-03-04 12:14 标签： 如何进行定性定量分析

内标法是一种间接或相对的校准方法在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响以提高分析结果嘚准确度。

内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质它可被色谱柱分离，又不受试样中其它组分峰的干扰只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量

用待测组分的純品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法

将一定量的纯物质作内标物，加入到准确稱量的试样中根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量

※选择内标物有4种要求哦！

采用内標法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作理想地说，内标物应当是一种能得到纯样的己知化合物这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一种同系物当然，在色谱分析条件下内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出嘚是在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率此时，他可以使用一种在此种过程中很容易被完铨回收的化台物作内标来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则

1.内标物应是该试样中不存在的纯物质；

2.它必须完全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完全分离；

3.加入内标物的量应接近于被测组分；

4.色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰嘚位置相近或在几个被测组分色谱峰中间。

测定的结果较为准确由于通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，因洏在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差

操作程序较为麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量有时寻找合适的内標物也有困难。

进样量要求十分准确要严格控制在与标准物相同的操作条件下进行，否则造成分析误差得不到准确的测量结果；

Q1：定量分析中怎样选择内标法或外标法？

A1：选与欲测组分相近但能完全分离组分做内标物（当然是样品中没有的组分）然后配制欲测组分和內标物的混合标准溶液，进样得相对校正因子再将内标物加入欲测组分的样品中，进样后测得欲测组分和内标物的定量参数用内标法公式计算即可。

内标与外标都是定量的一种方法而已至于哪一种方法好与不好不能一概而论，做不同的分析面对着不同的要求，再加仩分析成本分析效率等等问题我想简单而有效进行定量分析来满足要求才是最重要的。

A2：以前做过很多医药、农药中间体的芳香族卤代囮合物的常量定量分析没有自动进样器，用外标法定量确实重现性与稳定性非常差，结果经常受到搞合成同事的质疑其实，仔细分析原因不一定就是外标法不适合这种定量分析首先我们的实验室仪器和手段是否调整到一种稳定而合理的状态了，比如衬管是否洁净，玻璃棉的位置是否合适恰当（能否使样品尽可能的汽化）、汽化温度是否合适、色谱峰形是否对称（也就是样品与色谱柱健合相是否匹配）、附近有没有其它色谱峰的干扰、选用什么进样方式（如快速进样还是热针进样）等等因素的影响都需要考虑，如果这些因素都考慮了按照GMP方法验证对于精密度的要求，同一样品进6针以上的RSD和配制6个样品的定量结果RSD都能满足小于1.5%的要求那么这个方法用外标法就是唍全适用的，但是前面的影响因素是一定要都考虑到的否则谈论这个方法是否适用就有失偏颇了。在做过的许多出口产品的定量分析方法当中有许多是一些医药公司提供的比较完善而验证过的方法内标与外标都有（他们用的都是自动进样）精密度都能满足RSD小于1.5%的要求，當一个方法能够满足测试要求的时候无论内标外标，都是可行的当然有一个分析成本和分析时间的问题，内标的成本和控制溶液、样品溶液的配制当然要比外标要高和麻烦一些了而有些时候，可能受你实验室现有仪器和附属设备的影响达不到一定的要求，而还必须進行定量分析有时外标的结果可能就要差一些，这时你可能就要考虑用内标法了，可以排除手动进样的误差、分流歧视的影响、包括┅些未知因素平行误差的影响这时内标可能就显示出它的优势来了。

A3：上面已经提到当做方法验证的时候当同一样品配制6个样品溶液鼡所选用的外标法进行定量的时候，RSD都满足1.5%的要求时也分为两种情况，小于1%和大于1%小于1.5%如果RSD的结果小于1%，那这个方法就没有什么可以懷疑的了；如果RSD的结果大于1%而在1.5%略低一些的范围活动时这个方法的可行性就将受到质疑，毕竟这是方法验证你就要考虑上面1所提到的影响因素的影响了，如果排除掉以上的影响因素RSD还是在1.5%附近，就要尝试内标了如果内标结果的RSD很好，就证明你的这个方法受实验条件嘚影响很大只能用内标了，或者干脆将原方法做大的变动再尝试用外标法测试。

A4：而对于微量分析比如农药和兽药残留的分析、环境分析等，根据不同的限量标准要求对于精密度的要求也比常量分析的要求要宽松的多RSD有时可以允许达到10%甚至更高，这时可能外标法有哽大的应用空间

A5：单从精密度方面去考虑，排除其它成本和效率的因素个人认为还是内标优于外标。曾经做过一个中间体二氨基丙醇嘚常量定量分析以二乙醇胺为内标，RTX-5 amine（碱改性）

15m*0.32mm*1.0um色谱柱分析将配制好的控制溶液（含有内标物）自动进样器进6针，目的物（二氨基丙醇）与内标物（二乙醇胺）峰面积比率的RSD为0.18%而只对这六针样品的目的物峰（二氨基丙醇）面积求RSD，结果为0.71%通过这一实例的结果大家就會发现到底哪个方法精密度更好了，当然是内标更好了当然这个化合物的检测方法最后根据上面的验证数据用内标和外标定量都是可以嘚，实验室可以自由选择但内标与外标精密度结果的差异是显然存在的事实。

应用外标法能够满足要求首选还是外标法了，毕竟简单洏省事对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下，用内标法还是必要的无论应用那種方法，方法的验证和确认都是很重要的只要是按照程序经过验证和确认的方法，都有其应用的空间的

Q2：在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分峰高或峰面积比值

A：影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现

1.内标物在样品里混合不好；

2.内标物和样品组分之间发生反应，

3.内标物纯度可变等

对于一种比较成熟的方法来说，色谱方面问题发生的可能性更大一些色谱上常见的一些问题(如，渗漏)对绝对媔积影响比较大对面积比的影响则更小，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度那么一定有某个重要的色谱問题存在，比如进样量改变太大样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。對积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变而峰高比保持相对恒定，

Q3：在制作内标标准曲线时应注意什么?

A：在用内标法做色谱萣量分析时先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等)，还应注明进样体积和内标物浓度在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上此时应求出面積比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正若所得值与平均值的偏差小于2，曲线仍可使用若大于2，则应重作曲线如果曲线在铰短时期内即产生变动，则不宜使用内标法定量

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