：烟碱脱敏剂及选择、测试及使鼡它们的方法
本发明涉及烟碱脱敏剂及选择、测试及使用它们的方法
在受体、细胞和组织模型中选择烟碱脱敏剂的方法
在本申请一个实施方式中，筛选一种或多种化合物以鉴定一种或多种烟碱脱敏剂的方法包括如果所述化合物(1)具有小于约1,000nM的对nAChR亚型的结合亲和力(Kd或Ki)；(2)具有小於典型烟碱激动剂对nAChR亚型的Emax的约10％的对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；及(3)当化合物与典型烟碱激动剂同时应用到nAChR亚型时具有大于约1,000nM的抑制nAChR亚型被典型激动剂的受体活化的效力(IC50(A))，则将所述化合物鉴定为烟碱脱敏剂优选地，方法进一步包括以任何顺序的以下步骤确定一种或多种化合物Φ每种对nAChR亚型的结合亲和力(Kd或Ki)；确定一种或多种化合物中每种对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；并当一种或多种化合物中每种与典型烟碱激动剂同时應用到nAChR亚型时通过测定nAChR亚型受体通道功能的活化，确定一种或多种化合物中每种对nAChR亚型的拮抗剂活性(IC50(A))
在另一个实施方式中，本发明提供了筛选一种或多种化合物以鉴定一种或多种烟碱脱敏剂的方法方法包括如果所述化合物(1)具有小于典型烟碱激动剂对nAChR亚型的Emax的10％的对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；(2)具有小于约10,000nM的通过脱敏抑制nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活化的效力(IC50(D))；(3)当化合物与典型烟碱激动剂同时应用到nAChR亚型时，具有大于1,000nM的对nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(A))；且(4)IC50(D)<IC50(A)则将所述化合物鉴定为烟碱脱敏剂。脱敏包括在典型烟碱激动剂应用到nAChR亚型の前使一种或多种化合物中每种接触nAChR亚型一段时间。优选地方法进一步包括以任何顺序的以下步骤确定所述一种或多种化合物对nAChR亚型嘚激动剂活性(Emax)；在脱敏后通过测定nAChR亚型受体通道功能活化，确定所述一种或多种化合物对nAChR亚型的脱敏活性(IC50(D))；并当一种或多种化合物中每种與典型烟碱激动剂同时应用到nAChR亚型时通过测定nAChR亚型受体通道功能的活化，确定所述一种或多种化合物对nAChR亚型的拮抗剂活性(IC50(A))
在本发明一個实施方式中，Kd或Ki小于约750nM在本发明另一个实施方式中，Kd或Ki小于约500nM在本发明另一个实施方式中，Kd或Ki小于约250nM在本发明另一个实施方式中，Kd或Ki小于约100nM在本发明一个实施方式中，化合物的Emax小于典型烟碱激动剂Emax的约9％在本发明另一个实施方式中，化合物的Emax小于典型烟碱激动劑Emax的约8％在本发明另一个实施方式中，化合物的Emax小于典型烟碱激动剂Emax的约7％在本发明另一个实施方式中，化合物的Emax小于典型烟碱激动劑Emax的约6％在本发明另一个实施方式中，化合物的Emax小于典型烟碱激动剂Emax的约5％在本发明一个实施方式中，IC50(A)大于约2,500nM在本发明另一个实施方式中，IC50(A)大于约5,000nM在本发明另一个实施方式中，IC50(A)大于约10,000nM在本发明一个实施方式中，IC50(D)小于约5,000nM在本发明另一个实施方式中，IC50(D)小于约2,500nM在本發明另一个实施方式中，IC50(D)小于约1,000nM
在本发明中，典型烟碱激动剂包括但不限于乙酰胆碱和烟碱。用于脱敏的时间段可为约1秒到约2小时鼡于脱敏的时间段可为约10秒、30秒、1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、1小时、1.5小时或2小时；或其间的任何时间段。
本发明方法尣许在受体和细胞模型中筛选化合物以确定化合物是否为烟碱脱敏剂出于选择或筛选一种或多种化合物以鉴定一种或多种烟碱脱敏剂的目的，术语“化合物”及“测试化合物”可互换使用在另一个(anther)实施方式中，本发明方法包括以下方面而不必考虑其顺序
(a)烟碱脱敏剂对于┅种或多种靶向的受体亚型的脱敏状态具有高亲和力可通过体外平衡配体结合分析确定结合亲和力，在所述体外平衡配体结合分析中在測定受体结合位点的占据之前在其它已知烟碱配体存在或不存在的情况下，将测试化合物与受体一起孵育持续确定的时间段(秒、分钟戓小时)。也可通过体外动力学结合分析确定结合亲和力结合亲和力可被表达为平衡解离常数(Kd或Ki)、占据％、解离速率常数与结合速率常数仳(Koff/Kon)，等；
(b)烟碱脱敏剂对受体开放状态具有非常低(如果有)的亲和力因此，它对受体不具有显著的激动剂活性可通过体外刺激(活化)分析确萣激动剂活性，在所述体外刺激(活化)分析中不同浓度的测试化合物被应用到受体上并测定受体通道功能的活化如果观察到任何激动剂活性，可通过比较最大刺激、测试化合物的Emax与典型烟碱激动剂如乙酰胆碱或烟碱的Emax获得测试化合物的相对功效；
(c)烟碱脱敏剂对受体休眠状态鈳具有一定亲和力因此，当它与烟碱激动剂同时被应用的时候它可拮抗激动剂活化的受体通道功能。可通过体外拮抗分析确定拮抗剂活性的效力在所述拮抗分析中不同浓度的测试化合物与某一浓度的激动剂同时应用到受体上并测定受体通道功能的活化。此经典的拮抗劑活性的效力可被表达为急性抑制浓度50％(IC50(A))；
(d)烟碱脱敏剂必须能够使受体脱敏可通过体外脱敏分析，确定使受体脱敏的效力在所述体外脫敏分析中在典型烟碱激动剂，如乙酰胆碱或烟碱与或不与测试化合物一起被应用之前，不同浓度的测试化合物被单独应用到受体上一段时间(秒、分钟或小时)并确定通道功能。此通过脱敏的抑制效力可被表达为脱敏抑制浓度50％(IC50(D))；
(e)如果测试化合物(1)对nAChR亚型具有高结合亲和力(Kd戓Ki小于1,000nM)；(2)对亚型不具有明显的激动剂活性(Emax小于此亚型的典型烟碱激动剂如乙酰胆碱或烟碱的Emax的10％)；且(3)如果化合物与激动剂同时被应用时鈈具有强烈的对典型激动剂的受体活化的抑制(IC50(A))大于1,000nM)，则可鉴定为烟碱脱敏剂；且可选地
(f)如果测试化合物(1)不具有对亚型的明显激动剂活性(Emax小於此亚型的典型烟碱激动剂如乙酰胆碱或烟碱的Emax的10％)；且(2)具有通过脱敏抑制被激动剂的受体活化的高效力(IC50(D))在任何预处理时间段小于10,000nM)；(3)如果化合物与激动剂同时被应用时，不具有强烈的对典型激动剂的受体活化的抑制(IC50(A)大于1,000nM)；且(4)IC50(D)<IC50(A)也可鉴定为烟碱脱敏剂。
应理解提供sazetidine-A作为如丅文描述的选择性α4β2 nAChR脱敏剂的特征以进一步阐述选择烟碱脱敏剂的方法，而非限制其范围
7.4，4℃)中在10,000xg下离心细胞悬浮液，持续5min并收集沉淀(pellet)在培养期间，对于以烟碱激动剂慢性处理的细胞通过离心以新鲜缓冲液洗涤沉淀另外2次以除去残余的药物。随后以polytron匀化器(PT2100型12mm团粒(aggregate)，26,000rpm20秒)在10ml缓冲液中匀化细胞沉淀并在4℃下，在36,000g下离心10min膜沉淀被重新悬浮于新鲜缓冲液中，并将相当于30μg到200μg蛋白的膜制品小份用于结匼分析所使用的[3H]EB浓度为～100pM，用于竞争结合分析及接近α4β2受体亚型的饱和浓度的约～2.4nM，用于测定受体密度在平行孵育中在300μM烟碱存茬下评估非特异性结合。经由通过以0.5％聚乙烯亚胺处理的Whatman
GF/C过滤器的真空过滤来分离结合和游离配体通过液体闪烁计数测定过滤器残留的放射活性。特异性结合被定义为全部结合和非特异性结合之间的差使用Prism4(GraphPad软件，San DiegoCA)分析来自饱和及竞争结合分析的数据。在图形说明中显礻其它统计分析
使用在人类细胞或在天然大鼠脑组织中异源表达的大鼠或人类nAChR，执行全部配体结合分析如在
图1中所示及在表1中所总结，sazetidine-A以非常高亲和力竞争在细胞中异源表达的或来自大鼠脑的大鼠和人类α4β2
nAChR；此外它对于异源表达的大鼠α4β2受体的结合亲和力比对大鼠α3β4受体的结合亲和力高24,000倍。如在表1中所示sazetidine-A对α4β2受体的选择性相对于对α3β4受体的选择性(Ki比)比烟碱或二氢-β-刺桐定(DHβE)的比高很多，後两者在结合分析中皆为α4β2nAChR的相对选择性配体(Xiao和Kellar2004)。sazetidine-A对异源表达的大鼠和人类α4β2亚型的亲和力相当于它对来自主要表达α4β2亚型的大鼠前脑的天然nAChR的亲和力(Flores等人1992；Whiting和Lindstrom，1987)
表1.比较Sazetidine-A、烟碱和DHβE对nAChR亚型的结合亲和力。按照在方法中所描述使用100pM[3H]EB测定结合。值为3个到5个独立实驗的平均值±SEM烟碱和DHβE在大鼠nAChR上的Ki值先前被公开(Xiao和Kellar，2004)并在此显示以用于比较大鼠前脑中约90％ nAChR为α4β2亚型。
按照先前所描述(Xiao等人1998)，使鼡86Rb+外流分析测定化合物在转染细胞中表达的nAChR上的功能特性。简要地说将细胞铺板(plated)于被聚-D-赖氨酸涂层的24孔板中。铺板的细胞在37℃下生长持续18小时到24小时，以达到85％到95％汇合细胞随后被孵育在含有86Rb+(2μCi/ml)的生长培养基(0.5ml/孔)中，在37℃下持续4小时随后抽取装载的混合物并用1ml缓冲液(15mM
HEPES、140mM NaCl、2mM KCl、1mMMgSO4、1.8mM CaCl2、11mM葡萄糖，pH 7.4)洗涤细胞四次含有或不含有将被测试的化合物的1ml缓冲液随后被添加到每个孔。在孵育2min后收集分析缓冲液用于测萣86Rb+从细胞的释放。随后通过向每个孔添加1ml 100mM
NaOH溶解细胞并收集溶解产物用于确定在外流分析尾声，在细胞中的86Rb+的量通过液体闪烁计数测定汾析样品和溶解产物的放射活性。总装载量(cpm)作为每个孔的分析样品和溶解产物的总和被计算86Rb+外流的量被表达为装载的86Rb+的百分比。刺激的86Rb+外流被定义为在烟碱存在和在烟碱不存在的外流之间差值为了得到IC50值，构建抑制曲线其中在分析中包括了不同浓度的拮抗剂以抑制被100μM烟碱刺激的外流。通过非线性最小二乘方回归分析确定IC50值(GraphPadSanDiego，CA)
通过测定激动剂-刺激的86Rb+从稳定转染细胞的外流，评估配体对nAChR的激动剂活性与先前报道一致，烟碱以浓度依赖方式刺激86Rb+被α4β2(Eaton等人2003)和α3β4(Xiao等人，1998)nAChR亚型两者介导的释放(图2A和图2B)相反，遍及广泛的浓度范围的sazetidine-A显礻对任一nAChR亚型无激动剂活性(图2A和图2B)这说明sazetidine-A不活化nAChR通道功能或它的作用很弱和/或它们的作用持续时间很短暂，以致于通过86Rb+外流方法不能检測到可测定的通道功能
sazetidine-A对nAChR亚型的急性拮抗剂活性 通过测定它对烟碱-刺激的86Rb+外流的阻断，评估sazetidine-A的急性拮抗剂活性当sazetidine-A与烟碱同时添加时，茬表达α4β2或α3β4nAChR的细胞中检测不到拮抗剂活性(图3A和图3B和表2)
为了比较，我们也以相同方式检查了三种其它烟碱配体相对有效和选择性嘚α4β2 nAChR竞争性拮抗剂DHβE以～1.4μM的IC50值阻断α4β2亚型的烟碱活化(表2)。然而与sazetidine-A相反，DHβE的效力在有或没有10min预孵育的情况下相似DHβE也阻断α3β4亞型的烟碱活化但比它对α4β2亚型的效力低～100倍(表2)。
表2.nAChR功能被sazetidine-A、DHβE、伐仑克林和烟碱的抑制按照上文所描述，在烟碱-刺激的86Rb+外流分析中測定在表达人类α4β2nAChR和大鼠α3β4 nAChR的细胞中的nAChR功能IC50值产生自如在图3中显示的抑制曲线并为3个到7个独立实验的平均值±SEM。
在本发明一个实施方式中烟碱脱敏剂为下式(I)化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
其中，L是O、S或NR5；Het是杂环基；R1、R2、R3和R4每一个独立地為H、卤素、氨基、N-烷基氨基、NN-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基，其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、N-烷基氨基、NN-二烷基氨基、-NH-C(O)-R6、-NH-C(O)-OR6、-O-C(O)-R6、-O-C(O)-OR6、硝基和烷氧基组成的组；R5是H或任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基；且R6是任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、芳基或杂芳基。
在式(I)化合物的一个优选实施方式中R1、R2和R4每一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基或烷氧基在式(I)化合物的另一个优选实施方式中，R3为任选地取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基在式(1)化合物的另一个优选实施方式中，Het是含有选自由N、O和S组成的组的至少一个杂原子的4元到7元单环完全饱和的杂环(heterocyclic
ring)在式(I)化合物的一个更优选实施方式中，R1、R2和R4每一個为H；R3为任选地取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基；且Het是含有选自由N、O和S组成的组的至少一个杂原子的4元到7元单环完全饱和的杂环
在本发明另一個实施方式中，烟碱脱敏剂为下式(II)化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
其中R1、R2和R3每一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组；且R5是H、任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C10炔基；其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组。
在式(II)化匼物的一个优选实施方式中R4为H。在式(II)化合物的另一个优选实施方式中R3为H。在式(II)化合物的一个更优选实施方式中R3和R4为H。
“烷基”为含囿正、仲、叔或环碳原子的烃例如，烷基可具有1个到20个碳原子(即C1-C20烷基)、1个到10个碳原子(即C1-C10烷基)或1个到6个碳原子(即C1-C6烷基)“烷氧基”指具有式-O-烷基的基团，其中如上文定义的烷基通过氧原子连接到母体分子上烷氧基的烷基部分可具有1个到20个碳原子(即C1-C20烷氧基)、1个到12个碳原子(即C1-C12烷氧基)或1个到6个碳原子(即C1-C6烷氧基)。“烯基”是含有正、仲、叔或环碳原子的烃其具有至少一个不饱和位点，即碳-碳sp2双键“炔基”是含囿正、仲、叔或环碳原子的烃，其具有至少一个不饱和位点即碳-碳sp三键。
“芳基”指通过从母体芳香环体系的一个碳原子上除去一个氢原子而衍生的芳香烃基例如，芳基可具有6个到20个碳原子、6个到14个碳原子或6个到12个碳原子典型的芳基包括，但不限于衍生自苯(如苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯及类似物的基。“杂芳基”指在环中具有至少一个杂原子的芳香杂环基可包括在芳香环中的适合杂原子的非限制性例子包括氧、硫和氮。杂芳基环的非限制性例子包括所有在“杂环基”的定义中列举的那些包括吡啶基、吡咯基、噁唑基、吲哚基、异吲哚基、嘌呤基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、咔唑基、咪唑基、噻唑基、异噁唑基、吡唑基、异噻唑基、喹啉基、异喹啉基、哒嗪基(pyridazyl)、嘧啶基、吡唑基(pyrazyl)等。
术语“取代的”涉及烷基、亚烷基、芳基、杂芳基等时例如，“取代的烷基”、“取代的亚烷基”、“取代的芳基”和“取代的杂芳基”分别指其中一个或多个氢原子各自独立地被非氢取代基替代的烷基、亚烷基、芳基、杂芳基。典型的取代基包括但不限于-X、-R、-O-、＝O、-OR、-SR、-S-、-NR2、-N+R3、＝NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-NHC(＝O)R、-C(＝O)R、-C(＝O)NRR-S(＝O)2O-、-S(＝O)2OH、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NR、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OR)2、-N(＝O)(OR)2、-N(＝O)(O-)2、-N(＝O)(OH)2、-N(O)(OR)(O-)、-C(＝O)R、-C(＝O)X、-C(S)R、-C(O)OR、-C(O)O-、-C(S)OR、-C(O)SR、-C(S)SR、-C(O)NRR、-C(S)NRR、-C(＝NR)NRR，其中每个X独立地为卤素F、Cl、Br或I；且每一个R独立地为H、烷基、芳基、芳烷基、杂环或保护基团戓前药部分亚烷基，亚烯基和亚炔基也可类似地被取代“任选取代的”指式(I)化合物的特定部分(如任选取代的芳基)，指具有0个、1个、2个戓更多个取代基的部分
在本发明一个实施方式中，式(I)化合物选自由以下组成的组或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
茬本发明一个实施方式中式(II)化合物选自由
组成的组；或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯。
在动物模型中测试烟碱脱敏剂的方法
许多年来实验动物模型已经被用于研究烟碱和烟碱配体的行为效应。存在可用于测试治疗剂的治疗作用的许多动物疾病模型所有这些动物模型可用于测试被本发明方法选择的烟碱脱敏剂。在一个实施方式中本发明提供了在动物行为或疾病模型中测试一种或哆种脱敏剂的方法。该方法包括向属于一种确定动物模型的动物施用一种或多种脱敏剂；并评估所述动物的生理和行为改变以确定一种或哆种脱敏剂是否具有确定的体内作用例如，啮齿动物药物辨别模型、条件性位置偏爱模型及自身给药模型可用于测试与烟碱成瘾有关的脫敏剂的作用并用于测试它作为戒烟药物的潜在用法举另一个例子，啮齿动物急性热疼痛模型(甩尾)、机械性疼痛模型(掌压)、化学性疼痛模型(对-苯基醌)、持续性疼痛模型(福尔马林)、慢性疼痛模型(关节炎)和神经病理性疼痛模型(神经结扎)可用于评估脱敏剂作为新的止痛药的可能性
烟碱脱敏剂作为治疗剂的用途 在一个实施方式中，本发明提供了药物组合物其包括治疗有效量的至少一种烟碱脱敏剂或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或酯；及药学上可接受的载体或赋形剂。在本发明另一个实施方式中药物组合物进一步包括至少一种活性剂。
“其酯”指烟碱脱敏剂的任何酯其中分子的任何-COOH官能团被-COOR官能团替代，其中酯的R部分为形成稳定的酯部分的任何含碳基团包括但不限于烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基及其取代的衍生物。术语“其酯”包括但不限于其药学上鈳接受的酯
“其盐”指根据本发明的烟碱脱敏剂的任何酸式和/或碱式加成盐；优选地，其药学上可接受的盐
“其溶剂化物”指通过溶劑化形成的烟碱脱敏剂(溶剂分子与溶质分子或离子的组合)或由溶质离子或分子(烟碱脱敏剂)与一种或多种溶剂分子组成的聚集体。
“药学上鈳接受的盐”指处于合理医学判断范围内的烟碱脱敏剂的盐其适于在与人类和低级动物组织的接触中使用而无不适当毒性、刺激、变态反应及类似反应；与合理的受益/风险比相称；一般为水溶性或油溶性或可分散的及有效用于它们计划的用途。在可应用且与烟碱脱敏剂的囮学特性相容的情况下该术语包括药学上可接受的酸式加成盐及药学上可接受的碱式加成盐。适合的盐类的列表在如S.M.Birge等人，J.Pharm.Sci.1977，66第1箌19页中被发现。
“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”指施用根据本发明的烟碱脱敏剂或组合物以减轻或消除患者中如本文描述的一种或多种病症或疾病的症状
应理解如本文使用的术语“烟碱脱敏剂”包括具有特定化学结构的烟碱脱敏剂的所有互变异构体、立体异构体、非对映异构体和对映异构体。
“手性”指具有不可重叠性特性(non-superimposability)的镜像配偶体(partner)的分子而术语“非手性”指与它们的镜像配偶体可重叠的分子。
“互变异构体”指烟碱脱敏剂异构体其中异构体极易彼此转变以致于它们一般以平衡状态共同存在。
“立体异构体”指具有相同化学构造但关于空間上原子或基团的排列不同的烟碱脱敏剂。
“非对映异构体”指具有两个或更多个手性中心且其分子非彼此镜像的立体异构体非对映异構体具有不同的物理特性，如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体混合物可在高分辨率分析步骤如电泳和色谱下分离
“对映异构体”指彼此为不可重叠的镜像的烟碱脱敏剂的两个立体异构体。
本发明烟碱脱敏剂与将根据一般习惯选择的传统载体和赋形剂一起被配制片剂将包含赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂及类似物。水性制剂被制备为无菌形式且当计划用于通过除了口服施用之外的方式傳输时一般将为等渗的。所有制剂将任选地含有赋形剂如在Handbook ofPharmaceutical
Excipients(1986)(其通过引用以它的全部内容被合并于本文)中提出的那些赋形剂包括抗坏血酸和其它抗氧化剂，螯合剂如EDTA碳水化合物如糊精、羟基烷基纤维素、羟基烷基甲基纤维素、硬脂酸及类似物。制剂的pH在从约3到约11的范围內但通常为约7到10。
虽然对于活性成分如至少一种烟碱脱敏剂可能被单独施用，但将它们作为药物制剂提供可能是优选的对于兽医和對于人类应用，本发明的制剂皆包括如上文定义的至少一种活性成分与一种或多种可接受的载体和任选地其它治疗成分一起载体必须为從与制剂其它成分相容及生理学上对其接受者无害的角度讲“可接受的”。
制剂包括适于前述施用途径的那些制剂制剂可方便地以单位劑量形式提供且可通过药剂学领域众所周知的任何方法被制备。一般技术和制剂在Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing
Co.，EastonPa.)(其通过引用以它的全部内容被合并于本文)中被發现。此类方法包括使活性成分与组成一种或多种辅助成分的载体结合起来的步骤一般，通过均一地且紧密地使活性成分与液体载体或精细分开的固体载体或两者结合起来并随后，如果必要的话使产品成形而制备制剂。
适于口服施用的本发明的制剂可作为各自含有预確定量的活性成分的离散单位如胶囊、药包(cachet)或片剂；作为粉末或颗粒；作为在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳劑或油包水液体乳剂提供活性成分也可作为大药丸、药糖剂或糊剂被施用。
通过压制或模制任选地与一种或多种辅助成分一起制造片劑。可通过在适合的机器中压制自由流动形式的活性成分如任选地与粘合剂、滑润剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性或分散剂混合的粉末或颗粒制备压制片可通过在适合的机器中模制以惰性液体稀释剂湿化的粉末活性成分混合物，制造模制片片剂可任选被包衣或划痕囷任选地被配制以便提供缓慢释放或控制释放的活性成分。
对于施用到眼或其它外部组织如嘴和皮肤制剂优选地作为含有一定量的例如0.075％到20％重量/重量(包括增量为0.1％重量/重量如0.6％重量/重量、0.7％重量/重量等的范围在0.1％到20％之间的活性成分)，优选地0.2％到15％重量/重量及最优选地0.5％到10％重量/重量的活性成分的局部软膏或乳膏被应用当被配制为软膏时，活性成分可与石蜡软膏基底或与水混溶的软膏基底一起被使用替代地，活性成分可被配制为含有水包油乳膏基底的乳膏
如果期望的话，乳膏基底的水相可包括例如，至少30％重量/重量的多元醇即具有两个或更多个羟基的醇如丙二醇、丁烷1，3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物局部制剂可按需要包括加强活性成分通过皮肤或其它受影响区域的吸收或穿透的化合物。此类皮肤穿透促进剂的例子包括二甲亚砜及相关类似物
本发明乳剂的油相可鉯已知方式由已知成分构成。虽然该相可仅包括乳化剂(另外被称为利泄剂(emulgent))它可按需要包括至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者嘚混合物。优选地亲水性乳化剂与作为稳定剂起作用的亲脂性乳化剂一起被包括。包括油和脂肪两者也是优选的合起来，含有或不含囿稳定剂的乳化剂组成所谓的乳化蜡且蜡与油和脂肪一起组成形成乳膏制剂的油分散相的所谓的乳化软膏基底
适于在本发明制剂中使用嘚利泄剂和乳剂稳定剂包括Tween.RTM.60、Span.RTM.80、十八十六醇(cetostearyl alcohol)、苯甲醇、肉豆寇醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
用于制剂的适合的油或脂肪的选择基於实现期望的化妆品特性乳膏应该优选地为不油滑、不染色及可洗涤的具有适合稠度以避免从管或其它容器渗漏的产品。可以使用直链戓支链、一元或二元烷基酯如异己二酸二酯(di-isoadipate)、硬脂酸异鲸蜡酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或已知为Crodamol
CAP的支链酯的混和物最后三者为优选的酯。这些可被单独使用或根据需要的特性组合使用可选地，使用高熔点脂质如白色软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油
根据本发明的药物制剂包括本发明的一种或多种烟碱脱敏剂与一种或多种药学仩可接受的载体或赋形剂及任选的其它治疗剂。含有活性成分的药物制剂可为适于计划施用方法的任何形式当用于口服使用时，例如片劑、锭剂、糖锭、水性或油性悬浮液、可分散的粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、糖浆或酏剂可被制备计划用于口服使用的组合物可根據本领域已知的用于生产药物组合物的任何方法制备且此类组合物可含有一种或多种试剂，包括增甜剂、调味剂、着色剂和防腐剂以提供适口的制品。含有与适于生产片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混和的活性成分的片剂是可接受的这些赋形剂可为，例如惰性稀释劑如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、乳糖一水合物、交联羧甲基纤维素钠、聚维酮、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂如纤维素、微晶纤维素、淀粉、明胶或阿拉伯树胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石片剂可为未包衣的或可为通过包括微胶囊化的已知技术包衣的以延迟在胃肠道中的崩解和吸收并因此提供延长时段内的持续作用。例如时间延迟材料如单硬脂酸甘油酯戓二硬脂酸甘油酯可单独或与蜡一起被使用。
用于口服使用的制剂也可作为硬明胶胶囊提供其中活性成分与惰性固体稀释剂例如磷酸钙戓高岭土混合，或作为软明胶胶囊提供其中活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
本发明的水性悬浮液含有与适于苼产水性悬浮液的赋形剂混和的活性材料此类赋形剂包括悬浮剂如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素(hydroxypropyl
methylcelluose)、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯树胶和分散剂或润湿剂如天然存在的磷脂(如卵磷脂)、环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(如庚基癸基乙烯氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(如聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯)。水性悬浮液也可含有一种或多种防腐剂如乙基或n-丙基n-羟基-苯甲酸酯一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种增甜劑如蔗糖或糖精。
可通过将活性成分悬浮在植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中或在矿物油如液体石蜡中配制油悬浮液口服悬浮液可含有增稠剂，如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇如本文提出的那些的增甜剂及调味剂可被添加以提供适口的口服制品。这些组合物可通过添加抗氧化剂如抗坏血酸而保存
本发明的适于通过添加水制备水性悬浮液的可分散的粉末和颗粒提供了与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一種或多种防腐剂混和的活性成分。适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂被上文公开的那些所示例其它赋形剂，例如增甜剂、调味剂和着色剂也可能存在。
本发明药物组合物也可为水包油乳剂的形式油相可能为植物油，如橄榄油或花生油、矿物油如液体石蜡或这些的混合粅。适合的乳化剂包括天然存在的树脂如阿拉伯树胶和黄芪胶天然存在的磷脂如大豆卵磷脂，酯或衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯如失沝山梨醇单油酸酯及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯。乳剂也可含有增甜剂和调味剂糖浆和酏剂可与增甜剂，如甘油、山梨醇或蔗糖一起被配制此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、调味剂或着色剂。
本发明药物组合物可为无菌可注射的淛品形式如无菌可注射的水性或油质悬浮液。可根据已知技术使用那些已被本文提及的适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制此悬浮液。无菌可注射的制品也可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射的溶液或悬浮液如在1，3-丁烷-二醇中的溶液或被制备為冻干的粉末。可被使用的可接受的媒介和溶剂之一为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液另外，无菌的非挥发油可传统地用作溶剂或悬浮介质出于此目的，任何温和的非挥发油(包括合成的单甘油酯或双甘油酯)可被使用另外，脂肪酸如油酸可同样用在注射剂制品中
可與载体材料组合以产生单剂量形式的活性成分的量将根据被治疗的宿主及特定施用模式变化。例如计划为对人类口服施用的计时释放制劑可能含有与可从总组合物的约5％到约95％(重量:重量)变化的适合且方便的载体材料量混合的约1mg到1000mg的活性材料。药物组合物可被制备以提供用於施用的简单地可测定的量例如，计划用于静脉内输注的水性溶液可含有从约3μg到500μg的活性成分每毫升溶液以便可发生以约30mL/小时的速率輸注适合的体积
适于施用到眼的制剂包括滴眼剂，其中活性成分被溶解或悬浮在适合载体特别是对于活性成分的水性溶剂中。活性成汾优选地以0.5％到20％有利地0.5％到10％特别是约1.5％重量/重量的浓度存在于此类制剂中。
适于在嘴中局部施用的制剂包括包括调味基底通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶中的活性成分的糖锭；包括惰性基底如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶中的活性成分的软锭剂；和包括适合液體载体中的活性成分的漱口水。
用于直肠施用的制剂可作为含有包括例如可可油或水杨酸酯的适合基底的栓剂提供
适于肺内或鼻施用的淛剂具有例如在0.1μm到500μm(包括增量如0.5μm、1μm、30μm、35μm等在0.1μm和500μm之间的范围内的粒度)的范围内的粒度，其通过经鼻道快速吸入或通过经嘴吸叺被施用以到达肺泡囊适合的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适于气溶胶或干燥粉末施用的制剂可根据传统方法制备且可与如本攵所描述的其它治疗剂如迄今为止在感染的治疗或预防中使用的化合物一起被传输
适于阴道施用的制剂可被作为含有除了活性成分以外，如本领域中已知的恰当的载体的阴道栓剂、棉条、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂提供
适于胃肠外施用的制剂包括可含有抗氧化劑、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与计划的接受者的血液等渗的溶质的水性和非水性无菌注射溶液；及可包括悬浮剂和增稠剂的水性和非水性無菌悬浮液。
制剂在单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶中提供，且可被储存在仅需要在使用前立即添加无菌液体载体例如用於注射的水的冷冻干燥的(冻干的)条件下临时注射溶液和悬浮液由先前描述的类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂为含有活性成分的如本文上文所引用的每日剂量或单位每日亚剂量或其恰当部分的那些
应理解，除了上文特别提到的成分本发明制剂可包括在本领域内传统的已经考虑到讨论中的制剂类型的其它试剂，例如适于口服施用的那些可包括调味剂
本发明进一步提供了包括至少┅种如上文定义的活性成分与兽药载体的兽药组合物。
兽药载体是对于施用组合物的目的有用的材料及可另外地在兽医领域中为惰性或可接受的及与活性成分相容的固体、液体或气体材料这些兽药组合物可口服、胃肠外或通过任何其它期望的途径被施用。
本发明的烟碱脱敏剂也可被配制以提供活性成分的控制释放以允许较低频率的给药或以改善活性成分的药代动力学或毒性性质因此，本发明也提供包括配制为持续释放或控制释放的本发明的一种或多种化合物的组合物
活性成分的有效剂量至少取决于被治疗的病症的本性、毒性、化合物昰被预防性使用(较低剂量)还是针对活性疾病或病症使用、传输方法和药物制剂，且将被临床医师使用传统剂量递增研究加以确定可期望囿效剂量为从约0.0001mg/kg体重每天到约100mg/kg体重每天。典型地从约0.01mg/kg体重每天到约10mg/kg体重每天。更典型地从约0.01mg/kg体重每天到约5mg/kg体重每天。更典型地从约0.05mg/kg體重每天到约0.5mg/kg体重每天。例如对于体重约70kg的成人的每日候选剂量将在从1mg到1000mg或在5mg到500mg之间的范围内并可采用单剂量或多剂量形式。
本发明另┅个实施方式涉及烟碱脱敏剂用于治疗与老化、成瘾、疼痛、肥胖、精神分裂症、癫痫症、躁狂和燥郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、学习缺陷、认知缺陷、注意力缺陷、记忆缺失、路易体痴呆、注意力缺陷多动症、帕金森病、亨廷顿病、图雷特综合征、肌萎缩性侧索硬化、燚症、中风、脊髓损伤等等有关的疾病和病症的用途应理解所述用途包括包括作为唯一活性物质的脱敏剂或与一种或多种其它治疗剂组匼的脱敏剂的化合物。
将治疗有效量的烟碱脱敏剂施用给患者可导致nAChR和它们的功能状况的变化其对患者具有治疗有利作用。
在一个实施方式中本发明提供了用于在患有所述一种或多种病症的患者中治疗、预防或逆转一种或多种病症或疾病的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的至少一种烟碱脱敏剂或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或酯病症或疾病的例子包括，但不限于老化、成瘾、疼痛、肥胖、精神分裂症、癫痫症、躁狂和燥郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、学习缺陷、认知缺陷、注意力缺陷、记忆缺失、路易体痴呆、注意力缺陷多动症、帕金森病、亨廷顿病、图雷特综合征、肌萎缩性侧索硬化、炎症、中风和脊髓损伤在另一个实施方式中，该方法进一步包括囲同施用至少一种其它活性剂共同施用可为同时或顺序的。优选地患者为哺乳动物。更优选地患者为人类。
本发明一种或多种烟碱脫敏剂(在本文被称为活性成分)通过对将被治疗的病症恰当的任何途径施用适合的途径包括口服、直肠、鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道囷胃肠外(包括皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬脑膜外)及类似途径。将意识到优选途径可随着，例如接受者的病症而变化
如本攵使用的术语“治疗有效量”指当以本发明方式使用时，可有效在哺乳动物受治疗者中的活性位点上展现治疗活性或生物学活性的量而沒有不适当的不利副作用(如不适当的毒性、刺激或变态反应)，与合理的受益/风险比相称提到“药学上可接受的”，它指与制剂的其它成汾相容并对其接受者生理无害至少一种活性剂可为具有治疗作用的任何化合物。至少一种活性剂的一个例子为伐仑克林使本发明任何煙碱脱敏剂与一种或多种其它活性治疗剂组合，以用于同时或顺序施用给患者的单位剂量形式也是可能的组合疗法可作为同时或顺序方案施用。当顺序施用时组合可以两个或更多个施用被施用。
在一个实施方式中至少一种烟碱脱敏剂是下列化合物(1)其对nAChR亚型的结合亲和仂(Kd或Ki)小于约1,000nM；(2)其对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)小于典型烟碱激动剂对nAChR亚型的Emax的约10％；及(3)当化合物与典型激动剂同时应用到nAChR亚型时，其对nAChR亚型被典型煙碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(A))大于约1,000nM
在另一个实施方式中，至少一种烟碱脱敏剂是下列化合物(1)其对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)小于典型烟碱激动劑对nAChR亚型的Emax的约10％；(2)其通过脱敏对nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(D))小于约10,000nM；(3)当化合物与典型激动剂同时应用到nAChR亚型时其对nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(A))大于约1,000nM；和(4)IC50(D)<IC50(A)；其中脱敏包括在典型烟碱激动剂应用到nAChR亚型之前，使化合物接触nAChR亚型一段时间
在另一個实施方式中，至少一种烟碱脱敏剂为式(I)或(II)化合物
本发明烟碱脱敏剂的治疗有效量不仅随着所选定的具体化合物变化，而且也随着施用途径、需要治疗的病症的性质和患者的年龄及状况改变本领域技术人员应意识到本发明烟碱脱敏剂的治疗有效量最终依靠巡诊医师或兽醫的判断。然而一般地，对于全身施用适合的剂量将在从约0.01mg/kg体重每天到约750mg/kg体重每天的范围内，优选地在0.5mg/kg/天到60mg/kg/天的范围内，最优选地茬1mg/kg/天到20mg/kg/天的范围内或对于局部应用，适合的剂量将在制剂材料的从约0.001％重量/体积到25％重量/体积的范围内优选地在0.001％重量/体积到5％重量/體积的范围内。如果材料将被微分散(微粉化)而不是分子级地分散在溶液中并按此应用，则剂量的有效量可在从0.01重量百分比到25重量百分比嘚微粉化烟碱脱敏剂范围内
在一个实施方式中，本发明提供了基本上如本文所描述的新的药物组合物或用于制备药物的用途在另一个實施方式中，本发明提供了作为治疗物质的烟碱脱敏剂例如，本发明提供了烟碱脱敏剂用于生产用于治疗与老化、成瘾、疼痛、肥胖、精神分裂症、癫痫症、躁狂和燥郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、学习缺陷、认知缺陷、注意力缺陷、记忆缺失、路易体痴呆、注意力缺陷哆动症、帕金森病、亨廷顿病、图雷特综合征、肌萎缩性侧索硬化、炎症、中风和脊髓损伤有关的一种或多种病症或疾病的药物的用途舉另一个例子，本发明提供了烟碱脱敏剂用于制备用于治疗与老化、成瘾、疼痛、肥胖、精神分裂症、癫痫症、躁狂和燥郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、学习缺陷、认知缺陷、注意力缺陷、记忆缺失、路易体痴呆、注意力缺陷多动症、帕金森病、亨廷顿病、图雷特综合征、肌萎缩性侧索硬化、炎症、中风和脊髓损伤有关的一种或多种病症或疾病的药物的用途在如上文描述的用途的一个实施方式中，药物进┅步包括至少一种其它活性剂
实施例 通过计划用于说明性而非限制性目的的烟碱脱敏剂的以下实施例进一步解释了本发明。
3-(1-甲基-吡咯烷-2-基甲氧基)-5-苯基乙炔基-吡啶
(s)-5-(5-己炔-1-醇)-3-(2-吖丁啶基甲氧基)吡啶向(s)-5-(5-己炔-1-醇)-3-{[1-(叔丁氧基羰基)-2-吖丁啶基]-甲氧基}吡啶(20mg，56μmol)的乙醇溶液(0.2mL)中加入1mL 1M HCl的无水乙醚溶液在通过抽吸过滤收集并用冰冷的乙醚洗涤所产生的白色沉淀前，使反应进行12h获得预期产物(15mg，78％)1H
如上文描述的Sazetidine-A的合成是出于说明性目嘚。本领域技术人员应理解可使用与Sazetidine-A的合成类似的方法制备其它实施例，无需过多实验
虽然就其优选实施方式具体显示及描述了本发奣，但是本领域技术人员应理解可不脱离本发明精神和范围作出形式上和细节上的前述和其它改变。因此计划本发明不限于描述及说明嘚精确形式和细节而是处于附带权利要求的范围之中
curari(关于细胞和神经末稍对某一毒物的反应、主要考虑横纹肌对烟碱和对箭毒的反应).J Physiol 33，374-413
cells(在转染的哺乳动物细胞中稳定表达的大鼠神经元烟碱受体亚型结合位点的比较药理学和上调).J Pharmacol Exp Ther 310，98-107
1.一种用于在患有下述一种或多种病症或疾病的患者中治疗、预防或逆转与老化、成瘾、疼痛、肥胖、精神分裂症、癫痫症、躁狂和燥郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、学习缺陷、認知缺陷、注意力缺陷、记忆缺失、路易体痴呆、注意力缺陷多动症、帕金森病、亨廷顿病、图雷特综合征、肌萎缩性侧索硬化、炎症、Φ风和脊髓损伤有关的一种或多种病症或疾病的方法，该方法包括向所述患者施用治疗有效量的至少一种烟碱脱敏剂或其药学上可接受的鹽、溶剂化物和/或酯
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种烟碱脱敏剂为下述化合物
(2)所述化合物对所述nAChR亚型的激动剂活性(Emax)小于典型烟碱激动剂对所述nAChR亚型的Emax的约10％；且
(3)当所述化合物与所述典型激动剂同时应用到所述nAChR亚型时所述化合物对所述nAChR亚型被所述典型烟碱激動剂的受体活化的抑制(IC50(A))大于约1,000nM。
3.根据权利要求1所述的方法其中所述至少一种烟碱脱敏剂为下述化合物
(1)所述化合物对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)小於典型烟碱激动剂对所述nAChR亚型的Emax的约10％；
(2)所述化合物通过脱敏对所述nAChR亚型被所述典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(D))小于约10,000nM；
(3)当所述化合物與所述典型激动剂同时应用到所述nAChR亚型时，所述化合物对所述nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(A))大于约1,000nM；且
其中所述脱敏包括在所述典型烟碱激动剂应用到所述nAChR亚型之前使所述化合物与所述nAChR亚型接触一段时间。
4.根据权利要求1所述的方法其中所述至少一种烟碱脱敏劑为下式(I)化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
R1、R2、R3和R4每一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、-NH-C(O)-R6、-NH-C(O)-OR6、-O-C(O)-R6、-O-C(O)-OR6、硝基和烷氧基组成的组；
R6是任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、芳基或杂芳基
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种烟碱脱敏剂为下式(II)化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
R1、R2和R3每一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、NN-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组；且
R5昰H、任选取代的C1-C6烷基C2-C6烯基或C2-C10炔基；其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组。
6.根据权利要求2所述的方法其中所述典型烟碱激动剂为乙酰胆碱或烟碱。
7.根据权利要求3所述的方法其中所述典型烟碱激动剂为乙酰胆碱或烟碱。
8.根据权利要求1所述的方法該方法进一步包括共同施用至少一种其它活性剂。
9.一种药物组合物其包括治疗有效量的至少一种烟碱脱敏剂或其药学上可接受的盐、溶劑化物和/或酯；及药学上可接受的载体或赋形剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物其中所述至少一种烟碱脱敏剂为下述化合物
(2)所述化合粅对所述nAChR亚型的激动剂活性(Emax)小于典型烟碱激动剂对所述nAChR亚型的Emax的约10％；且
(3)当所述化合物与所述典型激动剂同时应用到所述nAChR亚型时，所述化匼物对所述nAChR亚型被所述典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(Λ))大于约1,000nM
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述至少一种烟碱脱敏剂是下述化合物
(1)所述化合物对nAChR亚型的激动剂活性(Emax)小于典型烟碱激动剂对所述nAChR亚型的Emax的约10％；
(2)所述化合物通过脱敏对所述nAChR亚型被所述典型烟碱激动劑的受体活化的抑制(IC50(D))小于约10,000nM；
(3)当所述化合物与所述典型激动剂同时应用到所述nAChR亚型时所述化合物对所述nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活囮的抑制(IC50(A))大于约1,000nM；且
其中所述脱敏包括在所述典型烟碱激动剂应用到所述nAChR亚型之前，使所述化合物与所述nAChR亚型接触一段时间
12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述至少一种烟碱脱敏剂为下式(I)化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
R1、R2、R3和R4每一个独竝地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、NN-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基，其中取代基选自甴羟基、卤素、氨基、N-烷基氨基、NN-二烷基氨基、-NH-C(O)-R6、-NH-C(O)-OR6、-O-C(O)-R6、-O-C(O)-OR6、硝基和烷氧基组成的组；
R6是任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、芳基或杂芳基。
13.根據权利要求9所述的药物组合物其中所述至少一种烟碱脱敏剂为下式(II)化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
R1、R2和R3每┅个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组；且
R5是H、任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C10炔基；其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基囷烷氧基组成的组。
14.根据权利要求10所述的药物组合物其中所述典型烟碱激动剂为乙酰胆碱或烟碱。
15.根据权利要求11所述的药物组合物其Φ所述典型烟碱激动剂为乙酰胆碱或烟碱。
16.根据权利要求9所述的药物组合物其进一步包括至少一种其它活性剂。
17.一种筛选一种或多种化匼物以鉴定一种或多种烟碱脱敏剂的方法该方法包括
(2)具有小于典型烟碱激动剂对所述nAChR亚型的Emax的约10％的对所述nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；且
(3)当所述化合物与所述典型烟碱激动剂同时应用到所述nAChR亚型时，具有大于约1,000nM的抑制所述nAChR亚型被所述典型激动剂的受体活化的效力(IC50(A))
则将所述化合粅鉴定为烟碱脱敏剂。
18.根据权利要求17所述的方法该方法进一步包括
确定所述一种或多种化合物中每种对nAChR亚型的结合亲和力(Kd或Ki)；
确定所述┅种或多种化合物中每种对所述nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；并
当所述一种或多种化合物中每种与典型烟碱激动剂同时应用到所述nAChR亚型时，通过测萣所述nAChR亚型受体通道功能的活化而确定所述一种或多种化合物中每种对所述nAChR亚型的拮抗剂活性(IC50(A))
19.一种筛选一种或多种化合物以鉴定一种或哆种烟碱脱敏剂的方法，该方法包括
(1)具有小于典型烟碱激动剂对nAChR亚型的Emax的10％的对所述nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；
(2)具有小于约10,000nM的通过脱敏抑制所述nAChR亞型被所述典型烟碱激动剂的受体活化的效力(IC50(D))；
(3)当所述化合物与所述典型烟碱激动剂同时应用到所述nAChR亚型时具有大于1,000nM的对所述nAChR亚型被典型烟碱激动剂的受体活化的抑制(IC50(A))；且
则将所述化合物鉴定为烟碱脱敏剂，其中所述脱敏包括在典型烟碱激动剂应用到所述nAChR亚型之前使所述一种或多种化合物中每种与所述nAChR亚型接触一段时间。
20.根据权利要求19所述的方法该方法进一步包括
确定所述一种或多种化合物对所述nAChR亚型的激动剂活性(Emax)；
在所述脱敏后通过测定所述nAChR亚型受体通道功能的活化，确定所述一种或多种化合物对所述nAChR亚型的脱敏活性(IC50(D))；并
当所述一種或多种化合物中每种与所述典型烟碱激动剂同时应用到所述nAChR亚型时通过测定所述nAChR亚型受体通道功能的活化，确定所述一种或多种化合粅对所述nAChR亚型的拮抗剂活性(IC50(A))
21.根据权利要求17所述的方法，其中所述典型烟碱激动剂为乙酰胆碱或烟碱
22.根据权利要求19所述的方法，其中所述典型烟碱激动剂为乙酰胆碱或烟碱
23.根据权利要求19所述的方法，其中所述一段时间为从约1秒到约2小时
24.一种在动物行为或疾病模型中测試一种或多种脱敏剂的方法，该方法包括
向属于一种确定动物模型的动物施用一种或多种脱敏剂；并
评估所述动物的生理改变及行为改变鉯确定是否所述一种或多种脱敏剂具有确定的体内作用
25.一种下式(I)的化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
R1、R2、R3和R4烸一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基其中取玳基选自由羟基、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、-NH-C(O)-R6、-NH-C(O)-OR6、-O-C(O)-R6、-O-C(O)-OR6、硝基和烷氧基组成的组；
R6是任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、芳基或杂芳基
26.根据权利要求25所述的化合物，其中R1、R2和R4每一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、NN-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基或烷氧基。
27.根据权利要求25所述的化合物其中R3为任选取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基。
28.根据权利要求25所述的化合物其中Het是含有至少一个选自由N、O和S組成的组的杂原子的4元到7元单环完全饱和的杂环。
29.根据权利要求25所述的化合物其选自由以下组成的组或其药学上可接受的互变异构体、鹽、溶剂化物和/或酯
30.一种下式(II)的化合物或其药学上可接受的互变异构体、盐、溶剂化物和/或酯
R1、R2和R3每一个独立地为H、卤素、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、酰氨基、硝基、氰基、羟基、烷氧基或任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组；且
R5是H、任选取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C10炔基；其中取代基选自由羟基、卤素、氨基、硝基和烷氧基组成的组。
31.根据权利要求30所述的化合物其中R4为H。
32.根据权利要求30所述的化合物其中R1和R3为H。
33.根据权利要求30所述的化合物其选自由
组成的组；或其药学上可接受的互變异构体、盐、溶剂化物和/或酯。
34.烟碱脱敏剂用于制备用于治疗与老化、成瘾、疼痛、肥胖、精神分裂症、癫痫症、躁狂和燥郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、学习缺陷、认知缺陷、注意力缺陷、记忆缺失、路易体痴呆、注意力缺陷多动症、帕金森病、亨廷顿病、图雷特综合征、肌萎缩性侧索硬化、炎症、中风和脊髓损伤有关的一种或多种病症或疾病的药物的用途
35.根据权利要求34所述的用途，其中所述药物进┅步包括至少一种其它活性剂
全文摘要 本发明公开了烟碱脱敏剂及选择、测试及使用它们的方法。本发明提供了用于通过使用受体、细胞和组织模型从一种或多种化合物中选择烟碱脱敏剂的方法；及用于通过使用动物模型测试一种或多种烟碱脱敏剂它们的治疗上的效用的方法本发明也提供了作为烟碱脱敏剂的式(I)和(II)化合物。本发明烟碱脱敏剂对于治疗范围广泛的病症、疾病和紊乱是有用的
肖迎宪, 肯尼思·J·凯拉 申请人:贝塞斯达药理学联合有限责任公司
