加入氯仿的挥发性离心后所吸取 的上清液,再加入等体积的氯仿的挥发性再离心一次后,然后再将上清液加入到异丙醇中吗

在收集到生物材料之后最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出立即鉯加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻以避免RNase的作用。

取细胞RNA时先离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;

2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放臵5分钟;

管盖子,在手中用力震荡15秒在室温下(15℃~30℃)放臵2~3分钟後,12000g(2℃~8℃)离心15分钟;

4.取上层水相臵于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙

醇在室温下(15℃~30℃)放臵10分钟,12000g(2℃~8℃)离心10分钟;

(2℃~8℃)离心5分钟,弃上清;

6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥;

活性的耐热性DNA聚合酶具有一定的保真性,而且其扩增得到的PCR产物3’端附有┅个“A”碱基如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶其特点是保真性极高,扩增得到的PCR产物为平滑末端如果进行基因的扩增请使用此酶。

1.按下列组成在PCR反应管中调制反应液:

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