限制性内切酶 -
限制性内切酶(restrictive&enzyme)是20世纪60年代末在中发现的，能水解DNA分子骨架的磷酸二酯键，使一个完整的DNA分子切成若干段，每一种限制酶，都有自己特定的作用位点，而且切口或切下来的序列，往往是回文结构（palindromes）。例如Eco&RI把GAATTC在GA之间切开，形成粘性末端。也有一些限制酶作用的结果产生不含粘性末端的平整末端，如HapI。多在原核生物中存在，能识别4～6个特苷酸特定的碱基序列。限制酶对细菌有保护作用，某些入侵的噬菌体可因DNA链被限制性酶切断而不能在细菌中繁殖，“限制”因此而得名。限制酶不能切开细菌本身的DNA，这是因为细菌DNA的腺嘌呤和胞嘧啶甲基化（-CH3）而受到保护之故。 这样就可以用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段，对于原核生物比较小的基因组来说，可以直接用标记地探针来获取在通过特定的方法，对于比较大的基因组，可以先制作基因文库，然后钓取所需要的带有目的基因的片段。
限制性内切酶 -
限制性内切酶【别名】 Endodeoxyribonuclease【酶反应】 限制性内切酶能分裂DNA分子在一限定数目的专一部位上。它能识别外源DNA并将其。【单位定义】 在指明pH与37℃，在0.05mL反应混合物中，1小时消化1μg的λDNA的酶量为1单位。【性状】 制品不含非专一的水解酶(由10单位内切酶与1μg λDNA，保温16小时所得的凝胶电泳图谱的稳定性表示)。限制性核酸内切酶的命名；一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株(品系)。例如，从Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindII、HindIII，HpaI、HpaII，MboI、MboI等。在生物体内有一类酶，它们能将外来的，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA内部进行的，故名限制性内切酶(简称限制酶)。限制酶是基因工程中所用的重要切割工具。科学家已从中分离出了许多种限制酶，并且已经商品化，在基因工程中广泛使用。根据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无的；另一类是可特异性地识别核苷酸序列，即只能在一定的DNA序列上进行切割。这种能被特异性识别的切割部位都具有，也就是在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。在中使用的多数是后一类酶。限制酶在特定切割部位进行切割时，按照切割的方式，又可以分为错位切和平切两种。错位切一般是在两条链的不同部位切割，中间相隔几个，切下后的两端形成一种回文式的单链末端，这个末端能与具有的目的基因的DNA片段连结，故称为黏性末端。这种酶在基因工程中应用最多。另一种是在两条链的特定序列的相同部位切割，形成一个无黏性末端的平口。在基因操作过程中，除了限制酶以外，还要用一系列的酶类，才能完成全过程。例如，碱性磷酸酯酶、、末端转移酶、、等。这些酶都有各自特殊的催化功能，现在都有商品出售，可以根据不同的需要选用。
限制性内切酶 -
简短定义：DNA限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶(简称限制)。限 制 性 内 切 酶 综 述(Restriction Endonucleases: An Overview) 30多年前，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接的基因片段。研究者很快发现内切酶是研究基因组成、功能及表达非常有用的工具。当限制性内切酶的应用在上世纪七十年代流传开来的时候，以NEB为代表的许多公司开始寻找更多的限制性内切酶。除了某些病毒以外，限制性内切酶只在原核生物中被发现。人们正在从数以千计的细菌及古细菌中寻找新的限制性内切酶。而对已测序的数据分析表明，限制性内切酶在原核生物中普遍存在--所有自由生存的细菌和古细菌似乎都能编码限制性内切酶。限制性内切酶的形式多样，从大小上来说，它们可以小到如Pvu II（157个），也可以比1250个氨基酸的Cje I更大。在已纯化分类的3000种限制性内切酶中，已发现了超过250种的特异识别序列。其中有30%是在NEB发现的。对具有未知特异识别序列的限制性内切酶的研究发现工作仍在继续。人们从分析细胞提取物的生化角度研究的同时，也采用计算机分析已知的基因组数据，以期有更多的发现。尽管很多新发现的酶的识别序列与已有的重复--即，仍然有识别新位点的酶不断被发现。上世纪80年代，NEB开始克隆并表达限制性内切酶。克隆技术由于将限制性内切酶的表达与原有细胞环境分离开来，避免了原细胞中其它内切酶的污染，从而提高了酶的纯度。此外，克隆技术提高了限制性内切酶的产量，简化了纯化过程，使得生产成本显著降低；克隆的基因很容易进行测序分析，表达出的蛋白也能进行X射线结晶分析，这使得我们对于克隆产物更加确定。
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限制酶识别的序列
限制酶识别序列的长度　　限制酶识别序列的长度一般为&4-8&个碱基，最常见的为&6&个碱基（表2-3）。当识别序列为&4&个和&6&个碱基时，它们可识别的序列在完全随机的情况下，平均每&256&个和&4096&个碱基中会出现一个识别位点（4^4=256，4^6=4096）。以下是几个有代表性的种类，箭头指切割位置。&　　4&个碱基识别位点：Sau3AⅠ&↓GATC&　　5&个碱基识别位点：EcoRⅡ&↓CCWGG&　　NciⅠ&CC↓SGG&　　6&个碱基识别位点：EcoRⅠ&G↓AATTC&　　HindⅢ&A↓AGCTT&　　7&个碱基识别位点：BbvCⅠ&CC↓TCAGC&　　PpuMⅠ&RG↓GWCCY&　　8&个碱基识别位点：NotⅠ&GC↓GGCCGC&　　SfiⅠ&GGCCNNNN↓NGGCC&　　以上序列中部分字母代表的碱基如下。&　　R=A&或&G&Y=C&或&T&M=A&或&C&　　K=G&或&T&S=C&或&G&W=A&或&T&　　H=A&或&C&或&T&B=C&或&G&或&T&V=A&或&C&或&G&　　D=A&或&G&或&T&N=A&或&C&或&G&或&T限制酶识别序列的结构　　限制酶识别的序列大多数为称结构，切割位点在&DNA&两条链相对称的位置。&EcoRⅠ&和&HindⅢ&的识别序列和切割位置如下。&　　EcoRⅠ&G↓AATTC&HindⅢ&A↓AGCTT&　　CTTAA↑G&TTCGA↑A&　　有一些限制酶的识别序列不是对称的，如&AccBSⅠ[CCGCTC（-3/-3）]&和&BssSⅠ[CTCGTG（-5/-1）]。识别序列后面括号内的数字表示在两条链上的切割位置。&　　AccBSⅠ&CCG↓CTC&BssSⅠ&C↓TCGTG&　　GGC↑GAG&GAGCA↑C&　　有一些限制酶可识别多种序列，如&AccⅠ&识别的序列是&GT↓MKAC&，也就是说可识别&4&种序列，其中两种是对称的，另两种是非对称的。&HindⅡ&识别的序列是&GTY↓RAC&。&　　有一些限制酶识别的序列呈间断对称，对称序列之间含有若干个任意碱基。如&AlwNⅠ&和&DdeⅠ&，它们的识别序列如下。&　　AlwNⅠ&CANC↓TG&DdeⅠ&C↓TNAG&　　GT↑CNNNGAC&GANT↑C限制酶切割的位置　　限制酶对&DNA&的切割位置大多数在内部，但也有在外部的。在外部的，又有两端、两侧和单侧之别。切点在两端的有&Sau3AⅠ（↓GATC）、NlaⅢ（CATG↓）和&EcoRⅡ（↓CCWGG）&等；在两侧的有&BcgⅠ[（10/12）CGA（N）6TGC（12/10）]和&TspRⅠ（CASTGNN↓），&BcgⅠ&酶的切割特性与其它酶不同，它们在识别位点的两端各切开一个断点，而不是只产生一个断点。切点在识别位点外侧的还有&BbvⅠ[GCAGC（8/12）]&和&BspMⅠ[ACCTGC（4/8）]&等。&　　BcgⅠ&↓10（N）CGA（N）6TGC（N）12↓&TspRⅠ&NNCAC（G）TGNN↓&　　↑12（N）CGA（N）6ACG（N）10↑&↑NNGTG（C）ACNN
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限制酶产生的末端
限制酶产生匹配粘端　　（matched&ends）&　　识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后，产生的末端为匹配粘端，亦即粘性末端（cohesive&end），这样形成的两个末端是相同的，也是互补的。若在对称轴&5'&侧切割底物，&DNA&双链交错断开产生&5'&突出粘性末端，如&EcoRⅠ&；若在&3'-侧切割，则产生&3'&突出粘性末端，如&KpnⅠ&。&　　NNG↓AATTCNN&EcoRⅠ&NNG&AATTCNN&　　NNCTTAA↑GNN&NNCTTAA&GNN限制酶产生平末端　　（Blunt&end）&　　在回文对称轴上同时切割&DNA&的两条链，则产生平末端，如&HaeⅢ（GG↓CC）和&EcoRV（GAT↓ATC）。产生平末端的&DNA&可任意连接，但连接效率较粘性末端低。产生非对称突出端　　许多限制酶切割&DNA&产生非对称突出端。当识别序列为非对称序列时，切割的&DNA&产物的末端是不同的，如&BbvCⅠ&，它的识别切割位点如下。&　　CC↓TCAGC&　　GGAGT↑CG&　　有些限制酶识别，其识别的序列中有几种是非对称的。如&AccⅠ&，它的识别切割位点如下，其中&GTAGAC&和&GTCTAC&为非对称。&　　GT↓AT/CGAC&　　CATA/GC↑TG&　　有些限制酶识别间隔序列，间隔区域的序列是任意的，如&DraⅢ&和&EarⅠ
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诺贝尔奖创立于1901年，是根据瑞典化学家诺贝尔的遗嘱及其部分遗产作为基金创立的。金质奖章、证书和奖金支票授予世界各国在经济、文学等领域对人类做出重大贡献的人士。
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2.限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切,不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切.现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线性DNA进行剪切后,用凝胶电泳分离各核酸片段,实验结果如图所示.请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是（& ）&&
答案是D.分别只看答案中的A,B,C将线段切成的几段大小与题目中给出的对应几段序列的大小相等即可. 很高兴为你解答,希望能够帮助到你.基础教育团队祝你学习进步!不理解就追问,理解了请采纳!
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