avidin带多少带正电荷的是

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Study on Process of Synthesis of N-Hydroxysuccinimide A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for Professional Degree By GuoHua
Supervised by Prof. Tan Shi-Yu
Specialty: ME Chemistry Engineering Field College of Chemical Science and Engineering University, Chongqing, China November 2013
重庆大学硕士学位论文 中文摘要 摘
要 N-羟基丁二酰亚胺具有难以替代的药物合成中间体的作用，在精细化学品、
医药、及生物科研领域有很大的应用价值。然而国内现有的生产N-羟基丁二酰亚
胺的工艺不够理想，存在很大的优化空间。 本文在分析总结之前文献的基础上，选出了一条合理、经济、易于工业化的
合成路线，并对其工艺条件进行了优化。该方法以丁二酸酐和盐酸羟胺为原料，
处理盐酸羟胺，使其释放出游离羟胺，再与丁二酸酐进行酸酐取代反
应，之后通过分段加热引导其进行脱水缩合反应，最后通过对生成物中的目标产
物进行提取、分离、纯化，以总体85% 以上的收率合成了N-羟基丁二酰亚胺。并
通过实验，对合成路线中各步骤的关键工艺参数进行了优化，得出了最佳工艺条
件。 第一步为制备游离羟基，反复改变 NaOH 的用量及滴加速率，得到了最优的
反应条件为：8.75g 盐酸羟胺需加入 10ml 质量分数40% 的NaOH 水溶液，滴加速
度每5 秒滴一滴，反应温度 15℃以下。 第二步为酸酐取代反应，用物质的量为羟胺的1.2 倍的丁二酸酐与游离羟胺反
应，事先将块状丁二酸酐研磨成粉末，最佳反应温度在40-50℃之间。 第三步为脱水缩合反应，通过单因素实验及正交试验确定了最佳反应条件：
在真空度 90kPa，60℃的条件下反应 1h，之后升温至97℃反应 30min，然后升温
至150℃反应1h。产品熔点标准，
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3秒自动关闭窗口用于生物素标记抗体检测的HRP&Streptavidin&Conjugate
辣根过氧化物酶链酶亲和素结合物可以用于生物素标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。具体用途包括Western&blot、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、斑点杂交、化学发光检测等。
&&&&&&HRP&StreptavidinConjugate用高纯度的链酶亲和素和超纯的辣根过氧化物酶交联而成，确保产生最低的本底和最高的灵敏度。
&&&&&&链酶亲和素的分子量为60kD，可以高度特异性地和生物素结合。链酶亲和素是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。链霉亲和素，从Streptomyces&adidinii中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI=～10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
&&&&&辣根过氧化物酶即horseradish&peroxidase(HRP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western&blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。
&&&&&1mg/ml的辣根过氧化物酶标记链酶亲和素用于各种常规用途的推荐稀释比例参考下表，实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节辣根过氧化物酶标记链酶亲和素的稀释比例。
免疫组织化学
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Streptavidin-HRP
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1mg/ml储存条件：
-20℃保存，可保存一年有效。保存缓冲液： 0.01M PBS, pH 7.4, 0.1%(w/v) Procilin300, 50%Glycerol稳 定 剂：
15mg/ml BSA应用范围：
WB、IHC/IC/ISH/、ELISA 、EMSA、 Southern/Northern 相关介绍本产品用进口高质量、高纯度的链酶亲和素（Streptavidin）和辣根过氧化物酶交联而成，确保最低的本底和最高的检测灵敏度。 辣根过氧化物酶链酶亲和素结合物可以用于生物素标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。 Streptavidin的分子量为66kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数Kd=10-15M。Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidinii中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI= ~10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。
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