抗菌肽OncorhyncinⅡ的克隆及其在毕赤酵母中的表达、纯化及抗菌机制研究--《山东大学》2011年硕士论文
抗菌肽OncorhyncinⅡ的克隆及其在毕赤酵母中的表达、纯化及抗菌机制研究
【摘要】：抗菌肽(Antimicrobial peptide,AMPs)是一类广泛存在于生物体内、在生物遭受外界异物或病原微生物刺激时能快速产生的小分子多肽。研究发现,抗菌肽具有多种生物学活性,它不仅对病原微生物如细菌、真菌、病毒和原虫等具有广谱的杀灭作用,还能抑杀癌变细胞、调节机体免疫等。抗菌肽以其广谱、安全且无耐药等生物学特点,有可能被开发成为一种新型的抗生素来替代传统抗生素在医药、农业和食品等领域应用。本课题的研究对象抗菌肽OncorhyncinⅡ分离自虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)的表皮分泌物中,它是由69个氨基酸残基组成,分子量约为7.2kDa,等电点为12.96,具有较强的稳定性,在微摩尔浓度下便能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长,而且在发挥抗菌活性的同时并未出现溶血作用。本课题研究借助基因工程技术构建生产来源于虹鳟鱼表皮分泌物中的抗菌肽OncorhyncinⅡ的毕赤酵母生产菌株,并将其发酵后进行分离纯化以获得高纯度的目的多肽,最后初步探究抗菌肽OncorhyncinⅡ的抗菌机制。
1毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体及工程菌株的构建
采用RT-PCR的方法从虹鳟鱼的表皮中获得抗菌肽OncorhyncinⅡ的cDNA序列,并将其克隆至载体pGEM(?)-T Easy上,然后测序验证序列的正确性。根据抗菌肽OncorhyncinⅡ的基因序列设计上下游引物,以OncorhyncinⅡ/pGEM(?)-T Easy为模板,进行PCR扩增,以获得目的片段。将获得的目的片段和载体分别用限制性内切酶EcoRⅠ和Kpn1进行双酶切,然后用T4DNA连接酶进行连接,最后成功构建出毕赤酵母表达质粒pGAOnⅡ。将重组表达质粒pGAOnⅡ和质粒pGAPZαA经Bln I线性化处理后电击转化入毕赤酵母GS115中,在含有ZeocinTM的YPDS培养基上筛选获得抗性转化子。在含有1000μg/mL ZeocinTM的YPDS培养基上得到高拷贝转化子,经过PCR验证,获得了高拷贝的阳性转化子。将高拷贝的阳性转化子培养后用Tricine-SDS-PAGE检测目的多肽的表达,目的条带与预期的分子量一致,结果表明重组表达的抗菌肽OncorhyncinⅡ成功被分泌至胞外。发酵液上清中的抑菌活性分析表明,重组抗菌肽OncorhyncinⅡ具有一定的抗菌活性,它对革兰氏阳性菌的抑制作用明显强于对革兰氏阴性菌及真菌的抑菌作用。对发酵液上清中抗菌肽OncorhyncinⅡ的稳定性研究表明,抗菌肽OncorhyncinⅡ具有较强的热稳定性,且能耐受反复冻融的处理。
2抗菌肽OncorhyncinⅡ的分离纯化及性质研究
首先采用阳离子交换树脂SP Sepharose Fast Flow对发酵液中的抗菌肽进行分离纯化,用Tricine-SDS-PAGE检测,结果发现2号洗脱峰存在目的多肽OncorhyncinⅡ,且杂蛋白的分子量在1.5kDa以上。第二步选择10kDa的超滤膜分离系统,将分子量较大的杂蛋白截留,而小于10kDa的目的多肽和大部分盐分被滤出。将截留液和滤出液进行Tricine-SDS-PAGE检测,结果与预期相同,目的多肽被保留于滤出液中。最后用1kDa的透析袋透析脱盐,冻干后得到抗菌肽OncorhyncinⅡ纯品。高纯度的抗菌肽OncorhyncinⅡ仍然具有明显的抑菌作用,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.54μg/L。
3抗菌肽OncorhyncinⅡ的抗菌机制研究
选用金黄色葡萄球菌最为受试菌株,首先研究抗菌肽OncorhyncinⅡ的抑菌动力学。观察抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响,结果发现OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌的抑制作用迅速、高效,且与作用时间呈正相关。观察抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌细胞通透性的影响,结果表明抗菌肽可导致细菌细胞的通透性增强,可能以菌体内容物泄露的方式导致细菌的死亡。其次采用活细胞工作站和透射电镜技术观察抗菌肽OncorhyncinⅡ作用于金黄色葡萄球菌的形态变化。
本研究取得的主要研究成果有：
1.成功构建了抗菌肽OncorhyncinⅡ毕赤酵母分泌表达质粒pGAOnⅡ并采用毕赤酵母表达系统对OncorhyncinⅡ进行分泌表达,获得了具有抗菌活性强、稳定性好的重组表达产物。
2.成功建立重组抗菌肽OncorhyncinⅡ的分离纯化工艺,最终获得了纯度较高、活性和稳定性较好的抗菌肽OncorhyncinⅡ。
3.初步探究了抗菌肽OncorhyncinⅡ的抗菌肽机制。
本研究为抗菌肽OncorhyncinⅡ在医药、农业及食品等领域的研究和开发奠定了一定的基础。
【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2011【分类号】：Q78【目录】：
中文摘要12-15ABSTRACT15-18符号说明18-20第一章 前言20-33 1 抗菌肽的来源20-21 2 抗菌肽的结构21-22
2.1 一级结构21-22
2.2 二级结构22 3 抗菌肽的分类22 4 抗菌肽的生物学活性及作用机制22-26
4.1 抗菌作用22-24
4.2 抗肿瘤作用24-25
4.3 抗真菌作用25
4.4 抗病毒作用25
4.5 抗寄生虫作用25
4.6 抗氧化作用25-26 5 抗菌肽的应用26-29
5.1 在医药行业的应用26-27
5.2 在饲料添加剂行业的应用27-28
5.3 在食品和化妆品行业的应用28
5.4 在转基因领域的研究28-29 6 抗菌肽重组表达系统29-31
6.1 大肠杆菌表达系统30
6.2 酵母表达系统30-31 7 本课题拟解决的问题31-33第二章 抗菌肽OncorhyncinⅡ基因的克隆及毕赤酵母表达载体的构建33-57 1 材料33-35
1.1 菌株及载体33
1.2 培养基33-34
1.3 分子生物学试剂34
1.4 常用试剂配制方法34-35
1.5 常用的仪器设备35 2 实验步骤与方法35-47
2.1 目的基因的获得35-37
2.2 目的基因的克隆37-38
2.3 毕赤酵母表达载体pGAOnⅡ的构建38-43
2.4 表达OncorhyncinⅡ毕赤酵母工程菌株的构建43-47 4 实验结果47-54
4.1 目的基因的获得47-48
4.2 毕赤酵母表达载体pGAOnⅡ的构建48-52
4.3 表达OncorhyncinⅡ的毕赤酵母工程菌株的构建52-54 5 讨论54-57第三章 抗菌肽OncorhyncinⅡ在毕赤酵母中表达生物学活性及发酵液稳定性研究57-77 1 材料57-58
1.1 菌株57
1.2 试剂57
1.3 培养基的配制57-58
1.4 常用试剂配制方法58
1.5 主要仪器设备58 2 实验步骤与方法58-64
2.1 重组抗菌肽的表达及鉴定58-60
2.2 重组抗菌肽抗菌活性的初步研究60-62
2.3 抗菌肽稳定性研究62-63
2.4 重组毕赤酵母摇瓶发酵条件优化63-64 3 实验结果64-75
3.1 重组抗菌肽OncorhyncinⅡ在酿酒酵母工程菌中的表达64
3.2 重组抗菌肽抗菌活性研究64-69
3.3 对发酵液中抗菌肽的稳定性研究69-75 4. 讨论75-77第四章 抗菌肽OncorhyncinⅡ的分离纯化及性质研究77-87 1 实验材料77
1.1 试剂材料77
1.2 仪器设备77 2 实验方法77-79
2.1 抗菌肽OncorhyncinⅡ的纯化77-78
2.2 Bradford法测定纯化后目的多肽OncorhyncinⅡ含量78-79
2.3 抗菌肽OncorhyncinⅡ的稳定性试验79
2.4 抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)测定79 3 实验结果79-85
3.1 抗菌肽OncorhyncinⅡ的纯化79-81
3.2 抗菌肽OncorhyncinⅡ的活性81-83
3.3 抗菌肽OncorhyncinⅡ的浓度测定83
3.4 抗菌肽OncorhyncinⅡ的稳定性试验83-84
3.5 抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)测定84-85 4 讨论85-87第五章 抗菌肽OncorhyncinⅡ的抗菌机制研究87-97 1 实验材料87
1.1 试剂材料87
1.2 常用试剂配制87
1.3 仪器与设备87 2 实验步骤与方法87-90
2.1 抗菌肽的抑菌动力学研究87-89
2.2 观察抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌细胞形态的影响89-90 3 实验结果90-95
3.1 抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响90-91
3.2 抗菌肽OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌细胞通透性的影响91-92
3.3 活细胞成像系统观察OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌细胞形态的影响92-94
3.4 透射显微镜观察OncorhyncinⅡ对金黄色葡萄球菌细胞形态的影响94-95 4 讨论95-97总结97-98参考文献98-103致谢103-104攻读学位期间发表的学术论文104-105学位论文评阅及答辩情况表105
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【参考文献】
中国期刊全文数据库
王涛;常维山;;[J];兽医导刊;2010年01期
王云起;蔡继业;马淑媛;张欣;;[J];电子显微学报;2006年01期
杨宇虹;梁东春;郭刚;张镜宇;;[J];医学分子生物学杂志;2006年02期
吕中原;钱江潮;储炬;郭美锦;王永红;庄英萍;张嗣良;;[J];工业微生物;2008年04期
陈田新;谢亮;牛琪;刘卓;;[J];中国计量;2010年01期
张永莲;[J];中国科学院院刊;2002年01期
罗芳;[J];黔南民族师范学院学报;2005年03期
王烈喜;王尔茂;;[J];食品工程;2008年02期
杨桂兰,郭学平;[J];中国生化药物杂志;2003年03期
李娜;王凤山;厉保秋;;[J];中国生化药物杂志;2007年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
李兰芳;佟继明;解丽君;李国风;郝娜;张勤增;王薇;;[J];癌变.畸变.突变;2010年01期
金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;[J];山东农业科学;2007年01期
陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;[J];山东农业科学;2008年05期
陈长宝;朱树华;周杰;;[J];山东农业科学;2009年05期
葛宏华,肖亚中,姚建平;[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期
韦传宝;贾玉成;杜宇;;[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年04期
中国重要会议论文全文数据库
徐义流;张绍铃;;[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
姚亚丽;薛志慧;曾婷玉;傅冬和;;[A];科技创新 转型升级 做大做强湖南特色茶叶——湖南省茶叶学会2011年学术年会论文集[C];2011年
姚亚丽;薛志慧;曾婷玉;傅冬和;;[A];科技创新 转型升级 做大做强湖南特色茶叶——湖南省茶叶学会2011年学术年会论文集[C];2011年
丁丽仙;刘海红;翟婷婷;孟昱琼;;[A];第十一次全国中医妇科学术大会论文集[C];2011年
李艳凤;王秋红;姜海;刘筱清;;[A];中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集[C];2011年
徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;[A];中国奶业协会年会论文集2008（下册）[C];2008年
刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍;;[A];中国奶业协会年会论文集2009（上册）[C];2009年
何凤艳;高林;白子金;白鹏;王国华;宋良敏;;[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
王沛珍;顾金保;彭鸿娟;;[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库
张青婵;[D];山东农业大学;2010年
徐荣燕;[D];山东农业大学;2010年
张升祥;[D];山东农业大学;2009年
殷慧群;[D];安徽农业大学;2010年
李振东;[D];甘肃农业大学;2010年
杨瑞梅;[D];甘肃农业大学;2010年
姜建萍;[D];湖南中医药大学;2010年
姚小磊;[D];湖南中医药大学;2010年
宋翠平;[D];中国海洋大学;2010年
郭新军;[D];陕西师范大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库
丁丹华;[D];华中农业大学;2010年
万荣娥;[D];华中农业大学;2010年
高红梅;[D];华中农业大学;2010年
王树云;[D];华中农业大学;2010年
汪艳杰;[D];华中农业大学;2010年
郑瑜;[D];华中农业大学;2010年
王伟;[D];华中农业大学;2010年
黄辉;[D];华中农业大学;2010年
段龙川;[D];华中农业大学;2010年
龚瑞;[D];华中农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
黄现青;高晓平;赵改名;李苗云;柳艳霞;杨淑晶;;[J];安徽农业科学;2007年12期
;[J];氨基酸和生物资源;2001年04期
闫亚军,陈劲春;[J];北京化工大学学报(自然科学版);2002年04期
饶贤才,金晓琳,胡晓梅,朱军民,陈自瑾,胡福泉;[J];第三军医大学学报;2002年04期
贾红武,张双全,戴祝英;[J];动物学研究;1997年03期
方羽生,杨卫华,张洪玲,刘琼光,黄华林,赵军,卓侃,丘麒;[J];广东农业科学;2001年05期
林璧润,杨丽梅,江学斌,周小毛,冼海辉,谢双大;[J];广东农业科学;1998年02期
武庆平;[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2002年05期
蔡荣新;[J];广州化工;2005年02期
赵晓燕,马越,宋曙辉,徐峰;[J];华北农学报;2005年03期
中国硕士学位论文全文数据库
王昊;[D];东北农业大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库
张素芳,曹瑞兵,贾赟,周斌,陈溥言;[J];微生物学报;2005年02期
董雪吟,邱奇峰,周爱武,徐贤秀;[J];南京铁道医学院学报;1996年03期
韩润林,孙庆林,额尔敦夫,李立民;[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);1998年03期
王芳,张双全;[J];自然科学进展;1999年02期
叶星,白俊杰;[J];大连水产学院学报;2000年04期
房师松,刘涛,邓平建,赵树进;[J];卫生研究;2004年01期
高建,戴祝英,陈溥言;[J];南京师大学报(自然科学版);1996年02期
许玉澄,张双全,戴祝英;[J];动物学研究;1998年04期
宋春满,雷朝亮;[J];湖北植保;1999年05期
曾辉明,黄俊生,程立生;[J];热带农业科学;2002年06期
中国重要会议论文全文数据库
王静;祝平;;[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
梁延彬;;[A];2011猪免疫抑制病防控与营养保健技术专题论坛会刊[C];2011年
明双喜;王沂蒙;刘艳;江国托;;[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
张东玲;黄文树;粱英;关瑞章;宋凯;;[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
陆婕;钟雅;柳林;付康;陈正望;;[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
马清泉;单安山;董娜;曹艳萍;;[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
彭兵;张树斌;王立安;;[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
袁天虎;张欣;胡泽汗;王芳;雷鸣;;[A];中国化学会第28届学术年会第13分会场摘要集[C];2012年
陈轶群;李志民;曹云鹤;;[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）[C];2009年
赵瑞君;刘颜岗;程璟侠;樊宏英;冀霞;;[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库
赵永伟;[N];亚洲中心时报(汉);2009年
暨南大学医药生物技术研究开发中心
黄亚东博士;[N];医药经济报;2001年
郑青;[N];医药经济报;2001年
江南大学食品学院动物营养研究室
宫霞?乐国伟;[N];中国畜牧兽医报;2008年
暨南大学医药生物技术研究开发中心
郑青博士后;[N];医药经济报;2001年
宏宇;[N];中国特产报;2003年
邹忠全;[N];中国医药报;2007年
美国New York Downtown医学中心教授
瑞典斯德哥尔摩医学中心昆虫蛋白抗肿瘤药物专家
范肇宏;[N];广东科技报;2002年
李天舒;[N];健康报;2007年
;[N];广东科技报;2002年
中国博士学位论文全文数据库
张慧（Farzana Rashid）;[D];北京化工大学;2009年
王远强;[D];西南大学;2012年
刘黎;[D];华南理工大学;2012年
刘蕊;[D];南京农业大学;2011年
侯峰;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
鄢然;[D];武汉大学;2010年
周杰;[D];吉林大学;2007年
王宇光;[D];华南热带农业大学;2002年
张卫民;[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
徐国华;[D];华中师范大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库
顾春华;[D];兰州大学;2006年
舒慕娅;[D];华中科技大学;2009年
孟硕;[D];山东大学;2011年
林文学;[D];浙江大学;2003年
邱晓燕;[D];厦门大学;2001年
潘新民;[D];浙江大学;2011年
仲燕;[D];第二军医大学;2004年
曾雪嘉;[D];西南农业大学;2004年
田晓乐;[D];吉林大学;2004年
王红叶;[D];吉林大学;2010年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 知识超市公司
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号中国最具影响力高考资源门户
最近更新: 1981 昨天: 3964 本周: 164062 总量:
今日:696套
总数:5174647套
会员数:131942位
当前位置：全国大联考
上海市金山区2015届高三上学期期末考试生物试题
资料类别: /
所属版本: 通用
所属地区: 上海
上传时间：
下载次数：15次
资料类型：期末考试
文档大小：1.50M
所属点数： 0.1点
【下载此资源需要登录并付出 0.1 点，】
资料概述与简介
金山区2014学年第一学期期末考试
高三生命科学试卷
考生注意：
本测试卷分为第Ⅰ卷和第Ⅱ卷两部分，共计12页。满分为150分，考试时间为120分钟。本卷采用网上阅卷，答案必须全部写在答题纸上，写在试卷上一律不给分。
第Ⅰ卷(共60分)
一、选择题（每小题2分）
1．在用显微镜观察黑藻叶肉细胞细胞质流动的实验中，观察到如图1所示结果，那么在载玻片上的黑藻细胞质的流动方向以及观察到的带有颜色的细胞器是
A.顺时针，叶绿体
B.逆时针，叶绿体
C.顺时针，液泡
D.逆时针，液泡
2．在10倍目镜、10倍物镜下测量钟形虫，测得虫长24格，目镜测微尺每格的长度是0.8微米。若换40倍物镜观察，所测得钟虫长度的格数、目镜测微尺每格长度依次为
A．960格、0.8微米
B．96格、0.2微米
C．6格、3.2微米
D．240格、0.2微米
3．下列化合物中含有氮元素的一组是
A．纤维素和丙酮酸
B．脂肪酸和甘油
C．脱氧核糖和ATP
D．磷脂和腺苷
4．图2中a、b、c为不同浓度的同种溶液，图3是一段时间后装置1与装置2的液面高度变化曲线，a、b起始液面高度均为H。则图2中a、b、c浓度的关系是
A.a > b > c
B.c > b > a
C.b > a > c
D.c > a > b
5．图4为达尔文利用燕麦胚芽鞘所做的实验，其中①示燕麦幼苗植株，②③④示分组实验，该实验研究的目的是探究
|A．胚芽鞘尖端对光线是否敏感，照光后是否会引起胚芽鞘向光弯曲
|B．胚芽鞘背光的一侧促进生长的物质含量是否较多
|C．胚芽鞘是否表现向光性，取决于尖端存在
|D．生长素是否会受到强光的破坏
6．哺乳动物卵原细胞减数分裂形成成熟卵子的过程，只有在促性腺激素和精子的诱导下才能完成。图5为某哺乳动物卵子及早期胚胎的形成过程示意图(N表示染色体组)。据图5分析，下列叙述不合理的是
|A．次级卵母细胞形成的过程需要激素调节
|B．细胞Ⅲ只有在精子的作用下才能形成成熟卵子
|C．Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ细胞分裂后期染色体数目相同
|D．培育转基因动物应选择细胞Ⅳ作为受体细胞
7.某班学生以新鲜菠菜叶为材料，进行叶绿体中色素的提取和分离的实验时，由于各组操作不同，出现了图6所示的四种不同层析结果。下列分析不合理的是
A．甲可能将层析液没及了滤液细线
B.乙可能是因为研磨时未加入SiO2
C．丙是正确操作得到的理想结果
D.丁可能是因为研磨时未加入CaCO3
8．图7为人体的生命活动调节示意图。有关叙述中不能正确描述其调节过程的是
A.该图表示体温调节过程，则体温调节属于神经-体液调节
B.通过C→D→E的过程可以调节血糖平衡，这一过程属于体液调节
C.人的手被针扎时，其调节过程可能通过A→B→E来实现，属于神经调节
D.水和电解质平衡调节的过程可通过A→B→C→D→E来实现，属于神经调节
9．图8所示为叶绿体中色素、蛋白质等成分在膜上的分布。下列对有关图示结构的描述中, 错误的一组是
①该生物膜为叶绿体内膜
②发生的能量转换是：光能→电能→化学能
③可完成光合作用的光反应过程
④产生的ATP可用于植物体的各项生理活动
10．某同学利用性状分离比的模拟实验装置，进行如下实验，从甲、乙两个容器中各随机抽出一个小球，记录组合情况，重复多次实验后，结果发现AB、Ab、aB、ab的比值接近1:1:1:1。以下关于该实验的说法正确的是
A．甲、乙两个容器分别代表某动物的雌、雄生殖器官
B．小球的颜色和字母表示雌、雄配子的种类
C．该实验模拟的是减数分裂过程中非同源染色体上基因的自由组合
D．每个容器中两种的小球数量需相等，但甲乙两个容器中小球的总数可以不同
11．香豌豆的花色有紫花和白花两种，显性基因C和P同时存在时开紫花。两个纯合白花品种杂交，F1开紫色；F1自交，F2的性状分离比为紫花∶白花＝9∶7。下列分析错误的是
A．两个白花亲本的基因型为CCpp与ccPP
B．F1测交结果紫花与白花的比例为1∶1
C．F2紫花中纯合子的比例为1/9
D．F2中开白花的基因型有5种
12．人被犬咬伤后，为防止狂犬病发生，需要注射由灭活狂犬病毒制成的疫苗。疫苗在人体内可引起的免疫反应是
|A．刺激致敏T细胞分化成为记忆细胞
|B．刺激巨噬细胞产生抗狂犬病毒抗体
|C．可促进B淋巴细胞释放淋巴因子
|D．产生与狂犬病毒特异性结合的抗体
13．图10是水生植物黑藻在光照等环境因素影响下
光合速率变化的示意图。下列有关叙述正确的是
|A．t1→t2，叶绿体类囊体膜上的色素吸收光能增加，基质中水光解加快、O2释放增多
|B．t2→t3，暗反应限制光合作用。若在t2时刻增加光照，光合速率将再提高
|C．t3→t4，光照强度不变，光合速率的提高是由于光反应速率不变、暗反应增强的结果|
|D．t4后短暂时间内，叶绿体中ADP和Pi含量升高，C3化合物还原后的直接产物含量降低|
14．图11中，甲、乙表示真核生物遗传信息传递过程中的某两个阶段的示意图，图丙为图乙中部分片段的放大示意图。对此分析合理的是
|A．图甲所示过程主要发生于细胞核内，图乙所示过程主要发生于细胞质内
|B．图中催化图甲、乙所示两过程的酶1、酶2和酶3是相同的
|C．图丙中含有两种单糖、五种碱基、五种核苷酸
|D．图丙中a链为模板链，b链为转录出的子链
15．一个基因型为AaXbY的精原细胞，在减数分裂过程中，由于染色体分配紊乱，产生了一个AAaXb的精子，则另外三个精子的基因型分别是
|A．aXb，Y，Y
|B．Xb，aY，Y
|C．AXb，aY，Y
|D．AAaXb，Y，Y
16．物种丰富度所表示的是
|A．生态系统的类型
|B．一定空间范围内物种的数量
|C．群落中物种个体的大小
|D．群落中某一物种的数量
17.下列关于真核细胞内DNA复制、转录和翻译的相关叙述，正确的是
A.DNA复制和转录的模板相同
B.mRNA与tRNA的碱基种类不同
C.核糖体存在mRNA的结合部位
D.DNA复制时不发生翻译过程
18.图12中a、b、c、d分别表示不同的变异类型，下列有关说法正确的是
①a表示同源段易位，b表示异源段易位
②c属于基因突变
③d属于染色体结构变异的缺失或重复
④a至d中能够遗传的是c
19.有甲乙两组等量的酵母菌，甲组酵母菌进行有氧呼吸，乙组酵母菌进行发酵，若它们消耗了等量的葡萄糖，则它们消耗的氧气总量与释放的二氧化碳总量的比为
20.用微电极适度提高实验狗的脊髓温度，引起狗的气喘、血管舒张和产热抑制等反应；而适度降低脊髓温度，又会引起寒颤、血管收缩等反应。下列解释中正确的是
A.脊髓中存在体内温度感受器
B.脊髓中存在体温调节的内分泌细胞
C.脊髓中存在体温调节的效应器
D.脊髓中存在体温调节的神经中枢
21.图13表示温度对淀粉酶活性的影响；图14是将一定量的淀粉酶和足量的淀粉混合后,麦芽糖的积累量随温度变化的情况。下列有关叙述中正确的是
①图13中T0为淀粉酶的最适温度
②图13中Ta、Tb时淀粉酶催化效率极低的原理不同
③图14中Tb～Tc麦芽糖积累量最多，说明此时酶活性最高
④图14中A点对应的温度为图13中的T0
22.下列有关血压的叙述，正确的是
A.交感神经兴奋，主要降低收缩压
B.心输出量增加，主要升高舒张压
C.血管管腔变小，主要降低收缩压
D.血液粘滞度增加，主要升高舒张压
23.用32P标记玉米体细胞（含20条染色体）的DNA分子双链，再将这些细胞转入不含32P的培养基中培养，在二次细胞分裂后的一个细胞中，被32P标记的染色体条数最可能是
B.20条以下
D.20条以上
24．某课题组研究了生长素类似物对月季侧芽生长的影响，结果见图15，根据实验结果不能得出的结论是
A．Y浓度> Z浓度
B．X浓度>Y浓度
C．X浓度>Z浓度
D．X浓度抑制侧芽生长
25．设处于遗传平衡的某个种群，A基因频率为p，a基因频率为q，且2Pq >p2=q2，若AA基因型个体不断被淘汰，则该种群AA、Aa、aa 3种基因型频率的变化过程为
A．②→③→④
B．③→④→①
C．①→②→④→③
D．②→③→④→①
26．下列数据是人体部分器官中所表达基因的估计数目，有关叙述不正确的是
|器官或细胞
|所表达基因
|的估计数目
A．人体各器官表达的基因数目有差异是细胞内基因选择性表达形成的
B．血细胞所表达的基因数目最多说明其遗传物质相对含量较高
C．人体各器官表达的基因数目有差异说明细胞中所含蛋白质有差异
D．不同功能的细胞表达的基因不相同，这与细胞具有不同功能相适应
27．图17中，①—⑤用某种方法在相差显微镜(不用染色)下拍到的二倍体百合（2n=24）某个细胞的减数分裂不同时期的图像。相关叙述不正确的是
A．图中细胞分裂序为①→③→②→⑤→④
B．图①细胞内DNA和染色体数目加倍
C．图②③细胞中均可能发生基因重组
D．图②⑤每个细胞中均含有两个染色体组
28．一个DNA片段，经过连续两次复制，共需要90个游离的腺嘌呤脱氧核苷酸、240个游离的胞嘧啶脱氧核苷酸。该DNA片段具有的碱基对是
29．用限制酶EcoR1、Kpn1和二者的混合物分别降解一个1000bp（1bp即1个碱基对）的DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如图18所示凝胶电泳结果。该DNA分子的酶切图谱正确的是
30．在试管内离体翻译蛋白质时，若加入碱基序列为（ACACACACACACAC…）的mRNA，合成的蛋白质中有苏氨酸及组氨酸两种氨基酸。若加入碱基序列为（CAACAACAACAACAA…）的mRNA，合成的蛋白质含有苏氨酸、谷氨酰胺或天冬酰胺。则苏氨酸的密码子是
第II卷（共90分）
二、综合分析题（共90分）
(一)细胞结构与功能（10分）
下图19为细胞结构示意图，图20表示图19细胞核中某结构及其成分。①—⑥表示物质，据图回答问题。
31．图19所示结构应在
下能观察。从图19中可看出，通过囊泡形式进行转化的生物膜有
32．若图19表示动物胰脏内的细胞，④可能为
（多选）。
A.胰脂肪酶
C.胰高血糖素
33．组成图20中⑥物质的基本单位是
34．图20中基因1和基因2的差异实质表现在
35．核孔复合体是细胞核与细胞质进行物质交换的通道。下列物质经核孔复合体向细胞核方向运输的是
（多选）。
B．RNA聚合酶
C．DNA聚合酶
（二）人体免疫(8分)
图21为某同学感染细菌后的免疫机制模式，图中大写字母表示细胞，小写字母表示物质，数字表示过程。据图回答。
36．A、B、E细胞名称：A
37．伤口处A细胞数量突增，这一现象的生物学意义是
38．细菌感染引起机体发烧，适度体温升高可以通过
来提高免疫反应速率。
39．图中③、④过程表示的是该同学体内发生的
（体液/细胞）免疫过程。
40．b、c物质分别是
(三)光合作用与呼吸作用(12分)
图22表示某植物细胞中部分结构发生反应的示意图。A-L字母表示物质；x1—x4表示B物质量的变化过程，y1—y4表示L物质量的变化过程；①—④表示生理过程。请分析回答：
41．分别写出图22中物质A、B、L的名称
42．I生成J的过程名称是
；③过程的场所是
；④循环过程的场所是
。过程①、②、③中,F产量最大的过程是
43．若x3=x4，则此时的光合作用速率与呼吸作用速率关系为
若x4=y4，则下列有关等式在数值上成立的是
A. x4=y1-y2
B. x2=x1-y4
C. y2=y3-x1
D. x1=x2+x4
44．在有光条件下，用14C标记小麦吸收的L进入图22的物质代谢过程，则14C在图中的转移途径是____________________________________。（用箭头和字母等表示）。
(四)生物进化与生物多样性（11分）
随着生命科学技术的不断发展，物种形成、生物多样性发展机制的理论探索也在不断的发展与完善。图23是科学家利用果蝇所做的进化实验，两组实验仅喂养食物不同，其他环境条件一致。
45．第一期时前，甲箱和乙箱中的全部果蝇属于一个
46．实验中表示环境选择的因素主要是
47．经过八代更长时间之后，甲箱果蝇体色变浅，乙箱果蝇体色变深。再混养时，果蝇的交配择偶出现具有严重的同体色选择偏好，以此推断，甲、乙品系果蝇之间的差异可能体现的是
多样性，判断的理由是
48．果蝇由原品系向甲、乙两类品系变化的现象，进化学上称为
49．经过八代或更长的时间后，两箱中的果蝇体色发生了很大的变化，请用现代综合进化理论解释这一现象出现的原因：
50．科学家对甲、乙两箱中果蝇部分等位基因[A-a、E-e]的显性基因频率作了统计，在第十代时，甲箱中A、E基因频率分别为61%与65%；乙箱A、E基因频率分别为95%与65%。则甲、乙两箱果蝇中的Ee杂合体出现的频率是
%；[A-a]等位基因纯合体出现的频率较高的是
51．生物多样性包含的三个层次中，
多样性能有效地增大种群基因库，有利于物种适应环境变化而长期生存。生境多样性是
多样性形成的基础，保护生境，减缓荒漠化进程是保护生物多样性的前提。
（五）微生物（10分）
牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒,以杀死有害微生物。
52．巴氏消毒的方法是
为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图24操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10mL生牛奶稀释到10-4浓度后，取0.1mL滴在培养基上。
53．将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是
该涂布工具最合适的灭菌方法是____________。
A．火焰灼烧
B．高温高压灭菌
C．酒精擦拭
D．紫外线照射
54．图13所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为________个。
55．消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释培养法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动？__________________。
56．检测食品中大肠杆菌数量，可评价食品是否受到污染。下表培养基配方中，大肠杆菌能够生长的是______，理由是__________________。
57．从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入
特征可以鉴别大肠杆菌。
（六）内环境与自稳态（10分）
图25表示人体血糖浓度发生变化和人体受寒冷刺激后的部分调节过程的示意图(A、B、C、D表示激素)，据图回答下列问题。
58．人体在寒冷环境下，可通过图中激素[
](填字母)分泌量的增加和细胞内_________的活动增强以增加产热量，同时机体还可以通过皮肤血管收缩减少皮肤的血流量等变化以减少散热。
59．人体体温调节的中枢及产生寒冷感觉的场所分别是_________、_________，体温调节方式是
60．图中垂体可分泌
激素作用于甲状腺，促进甲状腺分泌
61．人在空腹或饥饿时，血糖下降，一方面可以直接刺激__________，引起胰高血糖素分泌增加，胰高血糖素作用的靶细胞是
（七）神经调节（9分）
图26中，甲为人体手背皮肤(A)接受一定刺激后引起肱二头肌(E)发生收缩而产生屈肘动作的神经传导路径示意图。图乙为图甲中某部分结构放大图，据图回答问题：
62．图乙表示图甲中[______]（填字母）处的结构，名称是__________。在该处发生的信号转变为________________ 。
63．用针刺A时，引起E收缩而产生屈肘动作的过程被称为________。吗啡有镇痛作用，原因是吗啡能和图乙中[　] ________上的特异性受体结合使其失去与___________结合的能力。
64．当兴奋在B上传导时，兴奋部位的膜内电位变化为_____________。
65．现切断Ⅰ处，在Ⅱ处施加适宜的电流刺激，则在A、B、C、D、E中能测到电位变化的有_____________。
66．右图是突触后膜接受突触前膜释放神经递质后的膜电位状况以及兴奋的传导方向。其中正确的是_____。
（八）遗传与变异（10分）
图27表示遗传病家系图。请根据具体病例分析回答：
67．设Ⅱ-1、Ⅲ-2为甲病患者，其余均正常。则甲致病基因位于
染色体上，为
性遗传病；Ⅰ-2参与受精并形成Ⅱ-2的正常精子占总精子的概率是
68．设第Ⅱ代中仅Ⅱ-3为红绿色盲（b基因控制）患者。则图中一定患红绿色盲的个体是
；Ⅲ-3的基因型为
69．若上题假设成立，且Ⅲ-2患有甲病，Ⅲ-3不携带甲病基因，则Ⅲ-3生一与Ⅲ-2表现型相同的孩子的概率为
；所生孩子中同时患两种病的概率为
，正常的概率为
70．设Ⅱ-5患抗维生素D佝偻病（X连锁显性遗传病），Ⅱ-4正常，则他们的儿子中该病的发病率为
。若Ⅱ-4患抗维生素D佝偻病，且其双亲中只有一方患有此病，Ⅱ-5正常，则他们的女儿中该病的发病率为
（九）科学探究（10分）
研究背景：青蒿素是目前世界上唯一有特效的抗虐新药，是菊科艾属植物青蒿中提取出来的一种化学物质。我国山西的青蒿资源非常丰富，本研究为开发利用青蒿资源提供实验依据。
【实验一】
研究目的：比较同一植株不同生长期叶片中青蒿素含量的差异
材料准备：5～9月期间，分别采集成苗期、生长盛期、花期和果期的青蒿叶，干燥后粉碎备用。
71. 根据研究目的，下列属于实验时需控制的因素是_____________。（多选）
A．采摘时叶片中含水量
B．采集叶片时的气温
C．叶片的着生位置
D．叶片干燥的程度
72．将实验数据绘制成图28。
该坐标图的横坐标名称是______________，
纵坐标名称是_________________________。
73．根据实验一的研究结果，选择
期的青蒿作为继续研究的实验材料。
【实验二】
材料准备：采集青蒿不同组织如根、茎、老叶（叶龄21d）、新叶（叶龄7d），共采集3次，每次在同一地方随机采样。所有样品均采用烘干和自然干燥2种方式干燥，粉碎后备用。
实验结果：青蒿素含量（mg/g）
第1次采集：
根：1.02（晒干），0.74（烘干）；
茎：0.09（晒干），0.04（烘干）；
老叶：3.91（晒干），2.66（烘干）；
新叶：4.57（晒干），3.49（烘干）。
第2次采集：
根：1.05（晒干），0.72（烘干）；
茎：0.11（晒干），0.09（烘干）；
老叶：4.02（晒干），2.71（烘干）；
新叶：4.65（晒干），3.69（烘干）。
第3次采集：
根：1.14（晒干），0.79（烘干）；
茎：0.10（晒干），0.02（烘干）；
老叶：4.05（晒干），2.95（烘干）；
新叶：4.58（晒干），3.59（烘干）。
74. 本实验的研究目的是_____________________________________________。
75. 根据研究目的，设计一个实验数据记录表，用于记录上述数据。（不用抄录数据）
第Ⅰ卷(共60分)
一、选择题（每小题2分）
-----------------------
色素相对含量
色素相对含量
色素相对含量
色素相对含量
合成蛋白质
有同体色交配偏好
果蝇原品系
喂养麦芽糖食物一组
八代或更长时间后
有同体色交配偏好
喂淀粉类食物一组
该会员上传的其它文档
已有&0&条评论，共有&0&人参与，
网友评论：
合作 / 友情链接