苹果中葡萄糖测定的测定 氧化酶法实验计算公...

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-12 03:50 标签： 葡萄糖测定
生化实验(五)-----(综合性实验一) 血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)_图文_百度文库
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生化实验(五)-----(综合性实验一) 血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
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实验八葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度
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血液葡萄糖的测定（葡萄糖氧化酶——过氧化物酶法）
血液葡萄糖的测定（葡萄糖氧化酶——过氧化物酶法）
来源：互联网
点击次数：779
血液中的糖主要是葡萄糖，它是糖在体内的运输形式。
用波长505nm比色测定红色醌类化合物的吸光值，
与测定葡萄糖标准液吸光值比较，计算标本中葡萄糖含量。
加入物（mL）
血浆（血清）
葡萄糖标准液(5.55mmol/L)
酶酚混合试剂
混匀，置37℃水浴保温15分钟，用分光光度计505nm比色，以空白管调零点，分别读出各管吸光度。
如果使用自动生化分析仪测定，可根据
的程序要求进行编制。
血糖mmol/L = (测定管吸光度/标准管吸光度) ×5.55 或
血糖mg/dl = (测定管吸光度/标准管吸光度) ×100
如血糖高于22mmol/L时，将
（浆）稀释后再进行测定，测定结果乘以稀释倍数。
参考正常值：
（浆）血糖4.5~5.5mmol/L（70~110mg/dl）
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DXY All Rights Reserved.用葡萄糖氧化酶一比色法测定食品中的还原糖
来源/作者：中国标准物质网　　日期： 10:35:07
在有氧条件下葡萄糖氧化酶(GOD)催化β-D-葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D一葡萄糖酸一δ内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4氨基安替吡啉和苯酚生成红色醌亚胺，在波长505nm处测定醌亚胺的吸光值，可计算出食品中葡萄糖的含量。
GOD C6H12O6+O2―――C6H10O6+H2O2POD H2O2+C6H5OH+C11H13N3O----C6H5NO+H2O
1．样品处理
(1)不含蛋白质的样品 1～10g样品(精确至O.001g)置于100mL烧杯中，加少量重蒸馏水，移至250mL。容量瓶中，稀释定容，摇匀后用快速滤纸过滤，弃去最初滤液30mL，收集滤液待测。
(2)含蛋白质的试样 l～10g样品(精确至0.001g)置于100mL烧杯中，加少量重蒸馏水，移至250mL容量瓶中，加入O.085mol／L亚铁氰化钾溶液5mL、O.25mol／L硫酸锌溶液5ml和O．25mol／L氢氧化钠溶液10mL，用重蒸馏水定容，摇匀后用快速滤纸过滤，弃去最初滤液30mL，收集滤液待测。
2．试液吸光度的测定
用微量移液管吸取O.50～5.OOmL试液(依试液中葡萄糖的含量而定)，置于10mL比色管中，加入3mL酶试剂溶液，摇匀，在(36±1)℃的水浴锅中恒温40min，冷却至室温，用重蒸馏水定容至10mL，摇匀，用1cm比色皿，以等量试液调整分光光度计的零点，在波长505nm处，测定溶液的吸光值。
3．标准曲线的绘制
移取0、O.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.OOmL葡萄糖标准溶液，分别置于10mL比色管中，各加入3mL酶试剂溶液，摇匀，在(36±1)℃的水浴锅中恒温40min。冷却至室温，用重蒸馏水定容至10mL，摇匀，用1cm比色皿，以葡萄糖标准溶液含量为0的试剂溶液调零点，在波长505nm处，测定各比色管中溶液的吸光值，然后以葡萄糖含量为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线。
4．结果计算
X=C/m*v2/v1*1/0
式中X――样品中还原糖的含量，g／100g； c----标准曲线上查出的试液中葡萄糖的含量，μg； m――试样的质量，g； Vl――试液的定容体积，mL； V2――测定时吸取试液的体积，mL。
(1)组合试剂盒
①1号瓶：内含0.2 mol／L磷酸盐缓冲溶液(pH=7)100mL，其中4一氨基安替吡啉为 O．00154mol／L。 ②2号瓶：内含O.022mol／L苯酚溶液100ml。 ③3号瓶：内含葡萄糖氧化酶400U(活力单位)、过氧化物酶1000U(活力单位)。
1～3号瓶须在4℃左右保存。
(2)酶试剂溶液 将1号瓶和2号瓶内容物混合均匀，再将3号瓶的物质溶解其中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使葡萄糖氧化酶和过氧化酶完全溶解，此溶液须在4℃左右保存,有效期1个月。
(3)0.085mol／L亚铁氰化钾溶液 称取3.7g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6?3H2O]，溶于100ml重蒸馏水中，摇匀。
(4)0.25mol／L硫酸锌溶液 称取7.7g硫酸锌(ZnSO4?7H2O)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。
(5)氢氧化钠溶液 0.1mol／L。
(6)葡萄糖标准溶液 称取经(100±2)℃烘烤2h的葡萄糖1．0000g，溶于重蒸馏水中，定容至100mL，摇匀，将此溶液2mL用重蒸馏水稀释至lOOmL，即为200μg／mL葡萄糖标准溶液。
①恒温水浴锅。
②可见光分光光度计。
7．注意事项
①本方法为仲裁法，由于本方法中使用的葡萄糖氧化酶(GOD)具有专一性，只能催化葡萄糖水溶液中β-D葡萄糖被氧化，因此测定结果比直接滴定法和高锰酸钾滴定法准确,适用于各类食品中葡萄糖的测定，也适合于食品中其他组分转化为葡萄糖的测定，其最低检测限量为0．01μg／mL。
②本方法对使用的各种酶的活力有严格的技术要求。
葡萄糖氧化酶酶活力(U／mg)≥20g。
过氧化物酶酶活力(U／mg)≥50g。
葡萄糖氧化酶和过氧化物酶中不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷酶、β一果糖苷酶、半乳糖苷酶和过氧化氢酶。
酶活力的检验方法：吸取0.50mL葡萄糖标准溶液，置于10mL比色管中，加入100／μg 可溶性淀粉、100μg纤维二糖(生化试剂)、100μg乳糖和100μg蔗糖，再加入3ml。酶试剂溶液，摇匀，置于在(36±1)℃的水浴锅中恒温40min。冷却至室温，用重蒸馏水定容至40mL摇匀，用1cm比色皿，以葡萄糖标准溶液含量为0的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处，测定比色管中溶液的吸光值。测定吸光值后，在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算葡萄糖的回收率。
F=c/0.5*200*100
式中 F――葡萄糖的回收率，％； c――葡萄糖含量的实测值，μg。
若测得葡萄糖的回收率在95％～105％，则判定葡萄糖氧化酶和过氧化物酶符合要求。
③样品处理中，如果试液中葡萄糖含量大于：300μg／mL时，应适当增加定容体积。&nbsp&&&>苹果中葡萄糖及各项指标的测定
苹果中葡萄糖及各项指标的测定
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