二十滴酪蛋白溶液加五滴溴甲酚绿指示剂会变蓝的原因是什么？_百度知道
二十滴酪蛋白溶液加五滴溴甲酚绿指示剂会变蓝的原因是什么？
慢滴加HCL溶液，形成大量沉淀，沉淀溶解，原因是什么，原因是什么？ 继续滴加CHL溶液，随加随摇
，故溶液变蓝。继续滴加盐酸溶液.8时，到达等电点（PH=4，故溶液呈碱性，使酪蛋白溶液PH低于4，而溴甲酚绿指示剂的碱式为蓝色，酪蛋白溶解度最小，故形成大量沉淀。因为加HCL溶液使酪蛋白溶液的PH降低.8)时酪蛋白易溶于NaOH溶液中，酪蛋白溶解度增加，沉淀溶解
采纳率100%
其他类似问题
为您推荐：
酪蛋白的相关知识
等待您来回答
下载知道APP
随时随地咨询
出门在外也不愁牛乳中β-酪蛋白构象性表位定位研究--《南昌大学》2011年硕士论文
牛乳中β-酪蛋白构象性表位定位研究
【摘要】：牛乳是引起食物过敏的八大类常见食物之一。据报道,牛乳过敏引发的病症在婴幼儿中尤为常见,1岁以下婴幼儿中的发生率约为2-3%。因此,开展牛乳过敏的研究对于提高牛乳过敏人群生活质量具有重要的的现实意义。另外,由于表位是食物过敏反应的物质基础,所以表位定位是牛乳过敏研究的一个核心问题,也是人们认识食物过敏的首要任务。
本文以过敏原蛋白质β-酪蛋白为研究对象,从鲜牛乳中分离纯化β-酪蛋白、制备特异性多克隆抗体、亲和纯化多克隆抗体、建立β-酪蛋白构象模型、最终定位出β-酪蛋白的构象性表位,主要的研究工作和结论如下。
1.采用等电点沉淀法从鲜牛乳中得到酪蛋白,冷冻干燥后的酪蛋白粉末经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱分离后,得到了β-酪蛋白。经过SDS-PAGE电泳和等电聚焦电泳鉴定,结果表明,获得了纯度高于90%的β-酪蛋白。
2.采用分离纯化的β-酪蛋白免疫日本大白耳兔,制备兔抗牛乳β-酪蛋白多克隆抗体,免疫过程中利用间接ELISA方法监测免疫效价的变化,最终得到效价分别为1：240,000和1：150,000的抗血清各一份。
3.利用溴化氰活化的Sepharose4B对抗8-酪蛋白兔血清进行亲和纯化,经SDS-PAGE电泳检测,结果显示纯化后抗体在泳道中基本上只显示出重链(55Kda)和轻链(22Kda)2条带,纯化效果较好；同时对纯化后抗体进行间接ELISA效价测定,A、B两兔的血清效价分别从亲和纯化上样前的100,000和70,000上升到纯化后的120,000和80,000,表明经过亲和纯化,得到了高纯度和高特异性的多克隆抗体。
4.分别利用同源建模、折叠识别法建模、从头预测方法对β-酪蛋白结构模型进行构建,并对所建模型进行逐级开放式优化和Ramanchandran plot、WHAT_CHECK、ERRAT等方法评估,选择最优模型,结果得到经同源建模并经过优化后的模型为最终的β-酪蛋白结构模型；以文献报道的针对β-酪蛋白空间构象的实验数据作为参照,将所建模型与Kumosinski等人的p-酪蛋白典型模型进行比较,评价本研究工作中建模结果的准确性,结果显示,与Kumosinski等人所建模型相比,本实验所建模型更能与β-酪蛋白空间构象的实验数据吻合。
5.通过噬菌体肽库筛选得到了用于β-酪蛋白构象性表位定位的6个模拟肽；同时通过搜索得到晶体结构已解析的抗原抗体的复合物,并提取其中的表位信息,形成数据信息库,然后对该库进行统计分析,得到表位覆盖面积大小、表位氨基酸数目、不同种类表位氨基酸残基的出现频率、表位中起间隔作用的氨基酸残基类型和出现频率以及表位氨基酸残基在不同蛋白质二级结构中出现频率等信息；所得信息结合噬菌体肽库筛选结果,最终定位出β-酪蛋白的4个构象性表位。
【关键词】：
【学位授予单位】：南昌大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2011【分类号】：R392【目录】：
摘要3-5ABSTRACT5-9目录9-14第1章 引言14-26 1.1 牛乳过敏14-17
1.1.1 牛乳过敏机理15-16
1.1.2 牛乳中的主要过敏原16
1.1.3 牛乳过敏的危害16-17 1.2 牛乳过敏原的安全管理17-20
1.2.1 牛乳过敏的检测17-19
1.2.1.1 血液检测17-18
1.2.1.2 血液检测18
1.2.1.3 食物激发试验18-19
1.2.2 牛乳过敏原的管理19-20
1.2.2.1 IgE介导的牛乳过敏的管理19
1.2.2.2 非IgE介导的牛乳过敏的管理19
1.2.2.3 针对不同过敏症状的牛乳过敏的管理19
1.2.2.4 食物避免与营养的管理19-20
1.2.2.5 食物过敏原标签管理20 1.3 牛乳中的酪蛋白20-23
1.3.1 酪蛋白胶束20-21
1.3.2 牛奶酪蛋白的结构与理化性质21-23
1.3.2.1 αs1-酪蛋白21-22
1.3.2.2 α_(s2)-酪蛋白22
1.3.2.3 β-酪蛋白22-23
1.3.2.4 κ-酪蛋白23 1.4 β-酪蛋白的构象性表位23-24 1.5 研究内容及意义24-26第2章 牛乳中β-酪蛋白的分离纯化26-35 2.1 材料与设备26-27
2.1.1 试剂与材料26
2.1.2 设备26-27
2.1.3 溶液配制27 2.2 实验方法27-30
2.2.1 鲜牛奶脱脂27
2.2.2 等电点沉淀酪蛋白27
2.2.3 β-酪蛋白预处理27-28
2.2.4 β-酪蛋白分离纯化28
2.2.5 蛋白质及其纯度鉴定28-29
2.2.5.1 SDS-PAGE鉴定28-29
2.2.5.2 IEF-PAGE鉴定29
2.2.6 蛋白质浓度鉴定29-30 2.3 实验结果30-33
2.3.1 β-酪蛋白的分离纯化30-31
2.3.2 蛋白质及其纯度鉴定31-32
2.3.3 浓度鉴定32-33 2.4 讨论33-34
2.4.1 β-酪蛋白的离子交换层析条件选择33
2.4.2 蛋白质鉴定和浓度鉴定33-34 2.5 小结34-35第3章 抗牛乳β-酪蛋白多克隆抗体的制备及亲和纯化35-48 3.1 材料与设备35-37
3.1.1 试剂35
3.1.2 仪器与耗材35-36
3.1.3 溶液配制36-37 3.2 实验方法37-40
3.2.1 多克隆抗体的制备37
3.2.2 抗体滴度测定的方正滴定37
3.2.3 间接ELISA测定抗体效价37-38
3.2.4 抗血清的制备38
3.2.5 亲和层析纯化特异性兔IgG38-40
3.2.5.1 血清的预处理38
3.2.5.2 亲和层析柱的制备38-39
3.2.5.3 亲和纯化39
3.2.5.4 抗体SDS-PAGE纯度鉴定39
3.2.5.5 间接ELISA测定抗体效价39-40 3.3 实验结果40-44
3.3.1 ELISA方法的条件确立及其对效价变化的监测40-41
3.3.2 亲和层析纯化特异性IgG41-44
3.3.2.1 血清的获取41
3.3.2.2 偶联效果的检测41
3.3.2.3 非特异性洗脱过程中蛋白质含量监测41-42
3.3.2.4 特异性洗脱过程中蛋白质含量监测42-43
3.3.2.5 浓缩除盐43
3.3.2.6 纯化前后抗体效价的比较43
3.3.2.7 纯化后样品的SDS-PAGE电泳图43-44 3.4 讨论44-47
3.4.1 佐剂的选择44-45
3.4.2 试验动物的选择45
3.4.3 多克隆抗体的制备和储存45-46
3.4.4 多克隆抗体的亲和纯化46-47
3.4.4.1 配基及载体的选择46
3.4.4.2 层析条件的选择46-47 3.5 本章小结47-48第4章 β-酪蛋白结构模型的构建48-58 4.1 实验材料48 4.2 实验原理和方法48-52
4.2.1 蛋白质结构建模48-51
4.2.1.1 同源建模48-49
4.2.1.2 折叠识别法49-50
4.2.1.3 从头预测法50-51
4.2.2 模型优化与选择51
4.2.3 模型检验51-52 4.3 结果52-56
4.3.1 同源建模结果52-54
4.3.2 折叠识别法建模结果54
4.3.3 从头预测法建模结果54-55
4.3.4 模型评估及β-酪蛋白最优模型的确立55-56 4.4 讨论56-57 4.5 本章小结57-58第5章 β-酪蛋白构象性表位的定位58-75 5.1 材料与设备58-60
5.1.1 试剂与材料58
5.1.2 仪器58-59
5.1.3 试剂配方59-60 5.2 实验方法60-63
5.2.1 噬菌体展示技术对IgG表位的筛选60-61
5.2.2 构象性表位参数的确立61-62
5.2.2.1 表位数据集的获取61-62
5.2.2.2 表位性质的统计学分析62
5.2.3 构象性表位的定位62-63 5.3 实验结果63-72
5.3.1 噬菌体展示技术筛选表位模拟肽63
5.3.2 表位信息数据库的获取63-65
5.3.3 表位性质的统计学分析结果65-69
5.3.3.1 表位氨基酸数目65-66
5.3.3.2 表位氨基酸类型66-67
5.3.3.3 表位大小67
5.3.3.4 表位间隔氨基酸67-68
5.3.3.5 表位氨基酸所在二级结构68-69
5.3.4 β-酪蛋白IgG表位的定位69-72 5.4 讨论72-73 5.5 本章小结73-75第6章 研究结论与展望75-77 6.1 结论75-76 6.2 展望76-77致谢77-78参考文献78-81
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库
黄宇;[D];东北农业大学;2013年
【参考文献】
中国期刊全文数据库
黄艳新;鲍永利;李玉新;;[J];中国免疫学杂志;2008年09期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
游银伟,汪天虹,岳寿松;[J];山东农业科学;2005年01期
李瑞国;朱秀敏;杨慧;;[J];山东农业科学;2011年01期
葛宏华,孙莉宁,张其瑞;[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
孔小卫,李坤,江洪波;[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年03期
刘晓颖,丁毅;[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年01期
朱华庆,陈飞,谢惠安,张萍;[J];安徽大学学报(自然科学版);1998年04期
叶生梅;[J];安徽机电学院学报;2001年04期
孔小卫;[J];安徽机电学院学报;2002年04期
叶生梅,王岚岚,欧阳明;[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2003年01期
刘辉;张庆庆;危勤涛;舒伟刚;;[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2009年01期
中国重要会议论文全文数据库
周亚军;康建波;刘妍菊;苏丹;马龙彪;;[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
龚加顺;胡小静;彭春秀;周红杰;;[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会（第二卷）[C];2010年
李强;陈明;夏蕊蕊;张玉臻;;[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
付加雷;宋长征;张更林;;[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
任慧霞;赵雪;聂晓燕;;[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
邹莹;;[A];第十二届山东省药剂学术会议论文集[C];2006年
张娟;赵利;魏丽;刘建涛;曾志将;;[A];中国养蜂学会蜜蜂饲养管理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2007年
任慧霞;赵雪;聂晓燕;;[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
曾义勇;陈洪;;[A];2006年中国香料香精学术研讨会论文集[C];2006年
陈智慧;史梅;王秋香;张晓红;;[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库
徐军;[D];华南理工大学;2010年
陈义勇;[D];江南大学;2010年
田壮;[D];江南大学;2010年
邵凌健;[D];山东大学;2010年
迟雷;[D];西北大学;2011年
孙红男;[D];北京林业大学;2011年
冯敏毅;[D];兰州大学;2011年
刘宾;[D];中国农业科学院;2011年
华杰;[D];中南大学;2011年
陶晶;[D];石河子大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库
周艳华;[D];华中农业大学;2010年
冷一非;[D];华中农业大学;2010年
申君;[D];华中农业大学;2010年
杜学敏;[D];河北大学;2007年
刘辉;[D];安徽工程大学;2010年
洪伟;[D];安徽工程大学;2010年
王美花;[D];浙江理工大学;2010年
张袁;[D];安徽农业大学;2010年
刘红霞;[D];甘肃农业大学;2010年
程小丽;[D];河南工业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库
韩婷,蔡东联;[J];肠外与肠内营养;2005年04期
邱行光,张荣莲,郑巧玲;[J];中华儿童保健杂志;1995年01期
郭建军;[J];福建轻纺;2000年06期
刘爱东,翟凤英,赵丽云;[J];国外医学(卫生学分册);2004年04期
马岳,阎哲,黄骏雄;[J];化学进展;2001年01期
刘文丽;唐民民;;[J];中国乳业;2008年05期
李海梅;马莺;崔艳华;汪加琦;李启明;何胜华;;[J];哈尔滨工业大学学报;2012年04期
王世润;;[J];中国乳品工业;1991年06期
王静,王航雁,张成岗;[J];中国乳品工业;2005年09期
张鹏;黄绍海;;[J];中国乳品工业;2008年04期
中国硕士学位论文全文数据库
张忠华;[D];昆明医学院;2009年
【相似文献】
中国期刊全文数据库
陈义锋;金宁一;贾雷立;鲁会军;田明尧;南文龙;马鸣潇;刘成宏;沈国顺;马海利;陈晓月;;[J];中华微生物学和免疫学杂志;2007年12期
张娟;张君;余晓林;吴倩;蒋飞龙;黄长武;李兴禄;黄爱龙;郑建;;[J];第三军医大学学报;2008年15期
N.C.Hughes-Jones
,柳增善;[J];细胞与分子免疫学杂志;1989年01期
侯晓睿;刘北一;田建伟;陈益国;富宁;;[J];中国实验诊断学;2011年05期
王佑春,李河民,胡宗汉;[J];细胞与分子免疫学杂志;1992年01期
黄启华，吴子松，高鹏，张桂威，邱东川，周国兴，山建忠，蔡兴平;[J];中国人兽共患病杂志;1996年05期
马靖;[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1996年06期
闭兰;[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1998年03期
范宝剑;[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1999年03期
黄峙,杨红宇,向军俭;[J];现代免疫学;2004年04期
中国重要会议论文全文数据库
潘志明;张晓明;焦新安;Richard Lo-MClaude L刘秀梵;;[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
吴静波;翁云层;丘金浪;李荣;黎诚耀;王文敬;;[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
胡雪梅;张兆松;吴海玮;李春林;苏川季;王诗宁;王勇;吴观陵;;[A];中国动物学会第八次全国寄生虫学学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年
王书峰;;[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
张小俊;孟颂东;;[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年
余剑琴;郑飞云;徐云升;欧荣英;张乾;;[A];2011年浙江省妇产科学学术年会暨“妇产科常见疾病的临床研究新进展”学习班论文汇编[C];2011年
吴德铭;刘镇明;黄毓茂;罗满林;;[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
杜以军;姜平;杨晓玮;汤景元;李玉峰;李永东;;[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年
杜玲;王惠菊;杨建民;高寒;周永列;陶厚权;;[A];首届浙江省消化病学术大会论文汇编[C];2008年
胡雪梅;张兆松;吴海玮;李春林;苏川;季旻珺;王诗宁;王勇;吴观陵;;[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库
朱娟?何勇;[N];中国电力报;2007年
;[N];中华建筑报;2002年
;[N];西南电力报;2002年
;[N];西藏日报;2000年
曾耀英;[N];中国中医药报;2006年
束洪福;[N];科技日报;2008年
吴新年;[N];电脑报;2004年
牛立新?戴斌;[N];中国电力报;2007年
张中桥;[N];中国医药报;2002年
柯伟;[N];科技日报;2007年
中国博士学位论文全文数据库
王雅英;[D];北京协和医学院;2011年
李光富;[D];南京医科大学;2004年
林治华;[D];第三军医大学;2003年
李长岭;[D];第二军医大学;2010年
杨玲;[D];南方医科大学;2010年
高军;[D];第二军医大学;2004年
殷瑛;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
沈柱;[D];第四军医大学;2005年
陈安;[D];第三军医大学;2004年
潘志明;[D];扬州大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库
赵犇鹏;[D];上海师范大学;2011年
张丽婷;[D];山西医科大学;2010年
刘新生;[D];中国农业科学院;2011年
张伟;[D];西北农林科技大学;2010年
文学方;[D];南昌大学;2010年
张宁;[D];第四军医大学;2010年
王新军;[D];南京医科大学;2004年
杨秋虹;[D];泸州医学院;2010年
刘法辉;[D];南昌大学;2011年
吕虹;[D];郑州大学;2010年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 知识超市公司
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号牛乳制备高产率纯酪蛋白关键_百度知道
牛乳制备高产率纯酪蛋白关键
提问者采纳
不要嫌浪费时间最主要的是，越接近越好，这是最主要的；
2、在以后的溶洗：
1.7，怎么样也烘不干（必须好好搅拌，否则你的产品回合稀泥巴一样、刚开始时对牛奶的ph的调节，把离心的沉淀完全溶入乙醇或乙醚一类的溶剂），最好是调节到4，搅拌过程中必须好好的振荡和搅拌
其他类似问题
为您推荐：
您可能关注的推广
酪蛋白的相关知识
等待您来回答
下载知道APP
随时随地咨询
出门在外也不愁实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
实验三 牛乳中酪蛋白的制备与鉴定
上传于||暂无简介
大小：1.30MB
登录百度文库，专享文档复制特权，财富值每天免费拿！
你可能喜欢《动物生化实验》实验四、牛乳中蛋白质的提取与鉴定(1)_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
《动物生化实验》实验四、牛乳中蛋白质的提取与鉴定(1)
上传于||暂无简介
大小：153.00KB
登录百度文库，专享文档复制特权，财富值每天免费拿！
你可能喜欢