多数微生物碱性蛋白酶不耐热，碱土金属，特别是钙对；碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一，在丝绸、；热稳定性将酶液分别置于不同的温度条件下（30℃，；以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于；缓冲液的PH＝pI值＋1，上阴离子柱，＝pI值－；如果不清楚PI值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液；强离子交换剂:在宽pH范围内载量稳定，所以他的优；弱离子交换
多数微生物碱性蛋白酶不耐热，碱土金属，特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用
碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一，在丝绸、制革工业中也有广泛用途
热稳定性 将酶液分别置于不同的温度条件下（30℃，40℃，50℃，60℃，70℃）保温 10min 后，立即在 0℃冰浴中冷却，然后在 40℃下测碱性蛋白酶活力，以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。测量三个重复求平均值，将最高的酶活力定义为 100%，分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与最高酶活性的比值。
以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液pH大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以
缓冲液的PH＝pI值＋1，上阴离子柱，＝pI值－1，上阳离子柱，一般缓冲液ph范围在6.5～8.5之间，与PI值相差1个PH是比较理想的。
如果不清楚PI值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里，然后分别试阳离子和阴离子填料（50ul左右得体积就够了），看那个PH下挂得好。
强离子交换剂: 在宽pH范围内载量稳定，所以他的优点是不同pH下载量恒定，可控性好，平衡过程快速、简单。
弱离子交换介质的缺点：适用的pH范围比较小，随着pH不同载量发生变化。但是大部分蛋白等电点在
5.5 ~ 7.5 。因此强/弱离子交换介质都可以使用
弱离子交换介质（DEAE、ANX、CM)优点在于：和强离子交换介质的选择性不同，因此我们一般先使用强离子交换，如果优化条件还是达不到理想的分离效果，可以尝试弱离子交换，用选择性不同的介质尝试一下。
因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同，可以说是对不同蛋白的结合力有差异。S
离子交换剂类型
Q Sepharose FF
季氨基，强阴离子
DEAE Sepharose FF
二乙基氨基乙基，弱阴离子
ANX Sepharose 4FF
二乙基氨基丙基，弱阴离子
SP Sepharose FF
磺丙基，强阳离子
CM Sepharose FF
羟甲基，弱阳离子
Q Sepharose FF
0.18-0.25mmol（Cl-）/ml
DEAE Sepharose FF
0.11-0.16mmol（Cl-）/ml
ANX Sepharose 4 FF
0.13-0.18mmol（Cl-）/ml
SP Sepharose FF
0.18-0.25mmol（H+）/ml
CM Sepharose FF
0.09-0.13mmol（H+）/ml
Q Sepharose FF
120mg HSA/ml 填料
DEAE Sepharose FF
110mg HSA/ml 填料
ANX Sepharose 4 FF
5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料
SP Sepharose FF
70mg RNAase/ml 填料
CM Sepharose FF
50mg RNAase/ml 填料
Q Sepharose FF
400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm
DEAE Sepharose FF
300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm
ANX Sepharose 4 FF
至少200cm/h，100kpa，XK50/60层析柱，柱床高25cm
SP Sepharose FF
400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm
CM Sepharose FF
300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm
平均颗粒大小
90um（45-165um）
Sepharose FF
高度交联琼脂糖，6%
Sepharose 4 FF
高度交联琼脂糖，4%
Q Sepharose FF
1-14（短期），2-12（长期）
DEAE Sepharose FF
1-14（短期），2-13（长期）
ANX Sepharose 4 FF
2-14（短期），3-13（长期）
SP Sepharose FF
3-14（短期），4-13（长期）
CM Sepharose FF
2-14（短期），4-13（长期）
化学稳定性
在所有常用的水溶液缓冲液中稳定：8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇、1M NaOH和1M醋酸 20%乙醇（Q , DEAE,ANX,CM ）,含0.2M醋酸钠的20%乙醇（SP）
l 1M NaOH和醋酸仅在清洗时使用
Phenyl-Sepharose HP
产品名称：苯基-琼脂糖凝胶 6FF
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 45-165μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：苯基-琼脂糖凝胶 H.P.
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析填料
径： 24-44μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：苯基-琼脂糖凝胶 CL-4B
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析填料
径： 45-165μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。
产品名称：丁基-琼脂糖凝胶 4FF
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 45-165μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：丁基-琼脂糖凝胶 H.P.
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 24-44μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：丁基-琼脂糖凝胶 4B
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 45-165μm
工作PH值：4-8
用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：辛基-琼脂糖凝胶 4FF
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 45-165μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：辛基-琼脂糖凝胶 H.P.
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 24-44μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
产品名称：辛基-琼脂糖凝胶 CL-4B
状：白色微球
凝胶类型：疏水层析介质
径： 45-165μm
工作PH值：3-13
用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等
HPLC内容：
1、反相柱子：一般适用范围比较大。分离极性比较小的物质。极性强的物质先出柱。
ODS就是C18柱子。
RP-8和RP-18分别是C18柱子和C8柱子。
C18柱子和C8柱子是柱子的碳链的长度不一样的。
碳链增长了,也增加了键合相的非极性作用的面积,对保留值和选择性都有影响,随烷基碳链的增长对溶质分离的选择性也增强了.但是对单一或简单组分确实看不出太大区别。
2、正相柱子：一般分离光学异构体和反相柱子不能分离的极性比较大的物质。
APS为NH2柱子
另外diol 代表的是球形硅胶邻二羟基丙基醇基柱，正相柱，极性强的物质后出。
硅胶柱子的特点是可分离异构体，柱子的载样量大，用于制备分离，不污染收集的流分了，缺点是分析应用不方便，如流动相的含水量应该严格控制，再现性较差，需较长的平衡时间，不适用于梯度洗脱。 碱性化合物在氨基和二醇柱上的保留强，而偶极化合物在腈基柱子上的保留强。
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ODS-A液相色谱柱是国际上是销售最好的一种传统色谱柱，同时也是HPLC中应用最广泛的应用。YMC ODS-A液相色谱采用高度封端的表面结构和具有适当的疏水性，广泛地应用于多种化合物的分离。在严格质量控制体系下，对50个以上的参数进行严格控制， 保证了稳定的质量。其通常作为液相色谱标准柱。
ODS-AM液相色谱柱是一种高碳含量的C18柱，具有和ODS-A液相色谱柱相似的选择性。二者的主要区别是ODS-AM液相色谱柱采用的是专利的封端技术，采用十分严格的生产技术规范，可提供优良的峰对称性和更高分离效果的重现性，从而改善较难分离组分的峰形。
ODS-AQ液相色谱填料具有中等强度的疏水性和氢键键合相色谱填料，由于其具有相对高的疏水性，其与ODS-A相比有不同的保留行为，其主要用于碳水化合物的分离，如寡聚多糖类、葡萄糖苷类、药物和天然化合物的分离。
ODS-AL液相色谱柱不仅具有疏水基团的相互作用，而且还具备由硅醇基产生的第二级相互作用，这使其与传统的ODS不同的选择性。当离子间相互作用被优 化后，特别推荐用于流动相中含有缓冲液的色谱分离，可以获得高重现性的色谱图。YMC-Pack ODS-AL液相色谱柱采用的是没有封端的高碳含量单层C18相，其只能在残存的硅醇基活性有利于色谱分离时使用，由于容易发生拖尾峰，不推荐在分析胺类 或含碱性基团的化合物中使用。
ODS H80, M80, L80
ODS液相色谱填料是一种以硅胶为载体的三种配基覆盖率不同的 ODS填料，不同配基覆盖率将影响馏出物中疏水组分的保留行为，馏出物的官能基团或三级结构将决定分离行为的结果。J'sphere ODS液相色谱
填料几乎不需要考虑疏水性和氢键键合相之间的相互作用，如离子或相互作用，其多用于分离条件的测定。
色谱柱考虑的问题首 先是填料的问题，大多数用于HPLC分离的柱填料使用硅胶填料，基于多孔聚合物担体与键和的有机表层（如C18＆C8），应用范围较广，颗粒的大小（粒 度）在HPLC中极为重要，约5um的微粒直径兼顾了分析柱的柱效，反压和寿命。更小的多孔微粒对快速分离很有用。小至1.5um的薄壳微粒对极快速地分 离蛋白质等大分子较有用。较窄地粒度分布能保证填充床地稳定、高效和压力降最小。总的来说，3或5um全多孔微球填充HPLC色谱柱，能满足大多数分离地 需要。
色谱柱地性能指标主要考虑：理论塔板数，峰不对称因子（AS），两种不同溶质地选择性，色谱柱地反压，保留值地重现性，键和相浓度，色谱柱地稳定性。
有几点看法:
1)本人认为,C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称.ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料,而C18还包括其他基质的填料,比如高聚物小球为基质,氧化铝为基质,氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相,这些可以称为&C18&,但是不是ODS.
2)RP- 18也是C18中的一种,不同的公司对C18填料有不同的商业名称,本质应该都是一样的.Merck公司的填料喜欢叫RP-18. 比如Merck 的LiChrospher RP-18, Superspher RP-18,Purospher RP-18. 因此,我认为说&RP-18&是改进型的不妥当.Merck的改进表现在前边的名字上,比如LiCHrospher, Superspher, Purospher表现的是不同的性能.
3) &普通ODS分析酸性、中性或弱碱性化合物时均可以获得较佳的峰不对称度。但当分析药物化合物中的强极性含氮的碱性样品时，样品峰形就极差，拖尾严重，定 量分析精度下降&,这句话我认为值得商榷.普通的ODS,在分离中性化合物,极弱性的酸或硷化合物的时候可以得到较好的峰形,对于弱至中等极性的酸碱化合 物,多数情况下会出现不同程度的拖尾.对于强极性化合物,不单是药物,其他化合物一样,都会出现严重的拖尾现象
再次修改，除掉了不太相关的BDS，应该说论述比较全面了。
C18(C-18)、RP18(RP-18)、ODS有什么区别？
答：C18(C-18)、ODS、RP18(RP-18)的写法一般人从表面上理解没多大的区别，三者之间常常混用，但在具体的不同场合，从严格意义上讲，还是有一定的区别。
一般认为C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称，除了硅胶基质外，还可以包括其他基质的填料，比如高聚物小球为基质，氧化铝为基质，氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相。
而ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料。因为大部分的C18柱是硅胶基质，因此，在很多场合内二者混为一体。
ODS其后所标的1、2、3、4、5有的是指含碳的不同，有的是不同代的替换产品，如Spherisorb的ODS-1是指未经封尾处理的,含碳量为5.75%，ODS-2是经封尾处理的，含碳量为11.5%。不同厂家的ODS柱性能差异很大。
RP 在不同厂家中使用的含义也不太一致，在waters的色谱柱中，RP18（8）是指经过改进的新型C18
（8）柱，其不同在于在经典直链配体之间内嵌极性 基团，其选择性同C18（8）有了很大的差异，特别是对含酚基官能团的化合物。Agilent的Bonus－RP柱中RP的含义同Waters。但是在 Merck公司的色谱柱中，RP-18同C18意义相同,包括硅胶基质、氧化铝基质、及一体化的Chromolith柱。
因此，光从C18（C-18)、RP18（RP-18)、ODS很难区别不同厂家色谱柱之间结构上的差异，最好从有关厂家的资料中寻找。
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3秒自动关闭窗口请教：尿素缓冲液必须现用现配吗？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 请教：尿素缓冲液必须现用现配吗？
摘要: 请教：尿素缓冲液必须现用现配吗？在在做包含体纯化，用的分子克隆上面的方法，可是很不成功：包含体经2-4M尿素洗涤，用8M尿素溶解后做了SDS-PAGE电泳，结果发现目的条带没有出来，（考马斯染色只有一点痕迹，）而非目的条带却还很多。不知道什么原因，请各位大侠指点一二！多谢！！
另外如果我想再做的话，原来配的那些尿素缓冲液还能继续用吗？（分子克隆说要现用现配） 如果还用那个，真的影响很大甚至不起作用了吗？（上次配了很多， 关键词:[尿素 包含体 分子克隆 缓冲液 目的条带]……
在在做包含体纯化，用的分子克隆上面的方法，可是很不成功：包含体经2-4M尿素洗涤，用8M尿素溶解后做了SDS-PAGE电泳，结果发现目的条带没有出来，（考马斯染色只有一点痕迹，）而非目的条带却还很多。不知道什么原因，请各位大侠指点一二！多谢！！
另外如果我想再做的话，原来配的那些尿素缓冲液还能继续用吗？（分子克隆说要现用现配） 如果还用那个，真的影响很大甚至不起作用了吗？（上次配了很多，不能用就浪费了呀）回复:
尿素的降解物会引起蛋白侧链修饰，影响后面的复性，所以应该新鲜配制。我今天也刚用尿素溶解了包涵体，还没有电泳检测，看了你的帖子，真的感到心惊胆战呀！回复:
另外的一个问题，8M的尿素是否需要灭菌。回复:
我做2D的尿素无需灭菌，只是放在-20℃冰箱，用时拿出。似乎不用临用现配。回复:
多谢大家讨论，可是我提的第一个问题，不知道大家有无宝贵意见？！！
你最终上样量是多少，上样量太少不行，因为考染的检出限好像是2.5微克吧？最好先粗定量，再根据样品含量计算上样量。回复:
既然非目的条带很明显，当然不会是上样量的问题了，我就纳闷为何目的条带占的比例那么小？ 因为按说经过尿素初纯能够得到比较高纯度的蛋白才对！
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