酵母脱氧核糖核酸酶的分离及组分鉴定试验中 为...

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-17 16:54 标签： 脱氧核糖核酸酶
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 - 生化分子 - 生物秀
标题: 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
摘要: 酵母核酸中RNA 含量较多。RNA 可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA 的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。……
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
酵母核酸中RNA 含量较多。RNA 可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA 的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
1、乳钵2、150mol/L 锥形瓶
3、水浴4、量筒
5、布氏漏斗及抽滤瓶6、吸管
7、滴管8、试管及试管架
9、烧杯10、离心机
四、和材料
1、0.04mol/L 氢氧化钠溶液1000 mL
2、酸性乙醇溶液500 mL
将0.3 毫升浓盐酸加入30 毫升乙醇中。
3、95%乙醇1000 mL
4、乙醚500 mL
5、1.5mol/L 硫酸溶液200 mL
6、浓氨水50 mL
7、0.1mol/L 硝酸银溶液50 mL
8、三氯化铁浓盐酸溶液80 mL
将2 mL 10%三氯化铁溶液（用FeCl3&6HO 配制）加入到400 mL 浓盐酸中。
9、苔黑酚乙醇溶液10ML
溶解6g 苔黑酚于100 mL 95%乙醇中（可在冰箱中保存一个月）。
（1）17%硫酸溶液将17 mL 浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 mL 水中
(2)2.5%钼酸铵溶液将2.5g 钼酸铵溶于100 mL 水中.
(3)10%抗坏血酸溶液10g 抗坏血酸溶于100 mL 水中,贮棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用,如呈深黄或棕色则失效,需纯化抗坏血酸。临用时将上述3 种溶液与水按如下比例混合。
17%硫酸溶液:2.5%钼梭铵溶液:10%抗坏血酸溶液:水=1:1:1:2(V/V)。
11、酵母粉
将15g 酵母悬浮于90 mL 0.04mol/L 氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨 均匀。将悬浮液转移到150 毫升锥形瓶中。在沸水浴上加热30 分钟后，冷 却。离心(3000r/min)15 分钟，将上清液缓缓倾入30 ML 酸性乙醇溶液中。 注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心(3000r /min)3 分钟。弃去清液。用95%乙醇洗涤沉淀两次，乙醚涤沉淀一次后，再 用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
取200mg 提取的核酸，加入1.5mol/L 硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加热 10 分钟制成水解液并进行组分的鉴定.
1、嘌呤碱取水解液1 支液1 mL 加入过量浓氯水，然后加入约1 mL 0.1mol/L 硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2、核糖取1 支加入水解液1 mL、三氯化铁浓盐酸溶液2 mL 和苔黑 酚乙醇溶液0.2 mL。放沸中10 分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核 糖的存在。
3、磷酸取1 支试管，加入水解液1 mL 和定磷试剂1 mL。在中加热， 观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
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实验六 酵母核糖核酸的分离及组分
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你可能喜欢生化实验中,酵母RNA的提取和组分鉴定要注意的问题?
1.总是要戴着手套.2.总是要用不含RNA酶的样品管、移液器枪头、塑料容器和溶液.3.总是要把RNA储藏液分装到不含RNA酶的容器中,这样你才不会污染到储藏液.4.在处理RNA时,或者保持样品管置于冰盒,或者置于超过50°C的水浴中.一定要几乎所有容器用DEPC水处理,电泳检测槽也不例外.
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注意别被RNA酶污染
还要注意溶液pH的控制了，RNA蛋白溶于碱，DNA蛋白溶于酸。提纯的话因为溶液中有DNA，首先要先高温加热且温度要迅速达到80以上使DNA变性，30分钟左右后，拿出来再骤冷防止其复性。
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