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植物趣闻 标题热度培养基配制与灭菌方法
培养基配制与灭菌方法
　　微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，微生物培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。为了达到特定要求的研究，需要进行培养基配制和灭菌，那么微生物培养基该如何配制与灭菌呢?
1.配制溶液
　　向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
　　配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化.并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
2.调节pH值
　　用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
　　用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤.用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
　　已过滤的培养基应进行分装.如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中.如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
　　分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
　　装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3～4毫升(1/4～1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
　　分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染.棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞.棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
6.制作斜面培养基和平板培养基
　　培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
　　(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条,厚度为1厘米左右，将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
　　(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度.铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
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共有&23&人回复了该问答废弃培养基能和待灭菌的培养基一起灭菌吗？
废弃培养基能和待灭菌的培养基一起灭菌吗？如果不能那能用一个高压灭菌锅吗？如果一个星期灭菌一次可以吗？
回复于： 8:41:13废弃培养基能和待灭菌的培养基& & 最好还是分开灭菌吧。同一个高压锅 倒还是可以的。一个星期灭菌一次 是可以的，但是你要注意不要叫污染了。
快速回复【花三五分钟，帮别人解决一个问题，快乐自己一天！】
回复于： 13:28:57
我们只有一个高压灭菌器，需要灭菌的都在这个里面灭菌，基本天天都要用
回复于： 8:41:13
废弃培养基能和待灭菌的培养基& & 最好还是分开灭菌吧。同一个高压锅 倒还是可以的。一个星期灭菌一次 是可以的，但是你要注意不要叫污染了。
回复于： 9:19:41
最好分开灭菌
回复于： 19:36:33
认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。
回复于： 16:52:07
原文由 aaaa3) 发表:我们只有一个高压灭菌器，需要灭菌的都在这个里面灭菌，基本天天都要用一个实验室只有1台，那使用率肯定就高
回复于： 16:53:28
原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染
回复于： 11:46:44
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:我们只有一个高压灭菌器，需要灭菌的都在这个里面灭菌，基本天天都要用一个实验室只有1台，那使用率肯定就高你们那多少台啊？
回复于： 11:47:30
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是
回复于： 17:14:38
原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:我们只有一个高压灭菌器，需要灭菌的都在这个里面灭菌，基本天天都要用一个实验室只有1台，那使用率肯定就高你们那多少台啊？8台，包括好几方面的 实验
回复于： 17:15:04
原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。
回复于： 19:32:30
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。[/quote]不过有时候灭菌温度不一样，也不能放一起灭
回复于： 19:35:54
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:我们只有一个高压灭菌器，需要灭菌的都在这个里面灭菌，基本天天都要用一个实验室只有1台，那使用率肯定就高你们那多少台啊？8台，包括好几方面的 实验[/quote]不差钱真好
回复于： 7:28:38
原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。[/quote]不过有时候灭菌温度不一样，也不能放一起灭[/quote]这倒也是，有些还就得分开了灭菌。
回复于： 7:29:19
原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。[/quote]不过有时候灭菌温度不一样，也不能放一起灭[/quote]121度15分钟和115度20分钟&
你们还有其他的吗
回复于： 7:29:49
原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:我们只有一个高压灭菌器，需要灭菌的都在这个里面灭菌，基本天天都要用一个实验室只有1台，那使用率肯定就高你们那多少台啊？8台，包括好几方面的 实验[/quote]不差钱真好[/quote]关键项目给的多，自己再整了几台。
回复于： 12:24:10
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你们还有其他的吗[/quote]温度应该就是这两种，时间有不同
回复于： 12:24:50
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。[/quote]不过有时候灭菌温度不一样，也不能放一起灭[/quote]这倒也是，有些还就得分开了灭菌。[/quote]恩，就不能嫌麻烦
回复于： 13:36:33
原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。[/quote]不过有时候灭菌温度不一样，也不能放一起灭[/quote]121度15分钟和115度20分钟&
你们还有其他的吗[/quote]温度应该就是这两种，时间有不同[/quote]说说你们的时间
回复于： 13:37:11
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回复于： 14:49:33
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你们还有其他的吗[/quote]温度应该就是这两种，时间有不同[/quote]说说你们的时间[/quote]115，15分钟；115，20分钟； 121，15分钟；121，20分钟；其他培养物一般都121，30分钟
回复于： 15:02:56
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 aaaa3) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:[quote]原文由 会师楼(hjx1988) 发表:[quote]原文由 aaaa3) 发表:认为可以在一个灭菌器里灭，如废弃物在下层，待灭菌的可放上层。需灭菌的还是废弃物应尽快灭菌。但是特别要注意污染恩，是其实注意防止污染了，在也没啥了。[/quote]不过有时候灭菌温度不一样，也不能放一起灭[/quote]这倒也是，有些还就得分开了灭菌。[/quote]恩，就不能嫌麻烦[/quote]干这个事就不能嫌麻烦了[/quote]是啊
回复于： 9:07:50
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你们还有其他的吗[/quote]温度应该就是这两种，时间有不同[/quote]说说你们的时间[/quote]115，15分钟；115，20分钟； 121，15分钟；121，20分钟；其他培养物一般都121，30分钟[/quote]你们的这还真多啊
回复于： 9:08:11
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你们还有其他的吗[/quote]温度应该就是这两种，时间有不同[/quote]说说你们的时间[/quote]115，15分钟；115，20分钟； 121，15分钟；121，20分钟；其他培养物一般都121，30分钟[/quote]看来工作整的很细啊
未解决问题培养基二次灭菌可以吗
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showmefood 发表于
最好不要&&培养基本身就可以放几天& &用前加热融解&&没必要再次灭菌
其实有规定的，除特殊说明的。基础培养基（使用前不添加成分的培养基）一般可以在4度环境下保存不超过3个月，20度室温下不超过1个月。具体可参照SN/T 1538.1
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九日 发表于
其实有规定的，除特殊说明的。基础培养基（使用前不添加成分的培养基）一般可以在4度环境下保存不超过3个 ...
对的&&我们是做的一个月的有效期验证
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不能用了，不能二次灭菌，会破坏里面的营养物质
亲爱的自己，你要自信甚至是自恋一点，时刻提醒自己我值得拥有最好的一切./我的小店
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showmefood 发表于
最好不要&&培养基本身就可以放几天& &用前加热融解&&没必要再次灭菌
培养基怎么加热溶解啊 在无菌室内还是在外面就可以？ 用电磁炉加热大概多长时间啊？
(拓普生物培养基)
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市场上销售的都是三层真空包装的,经过辐照灭菌的
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有影响的，我也曾做过比较：发现二次灭菌的营养琼脂上菌长得不好，而新灭菌的菌长势不错，所以感觉还是有影响的。
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applemy08 发表于
最好不用，有的营养物质已经被破坏了，比如糖类经多次、长时间的高温容易碳化等，检出来的数据不准确
说的很对啊&&最好是不用&&营养物质都破坏了 做出了的结果也不会准的
微生物啊微生物啊&&你能不能长得再好看些& &
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储存条件2-25度，3周没问题
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我们一般使用自制的培养基都是现配现用的，二次杀菌肯定会对结果有影响，如果你怀疑培养基有污染，建议不要用了，重新配一份最好，又不要多长时间。
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最好不要二次灭菌，会导致检测结果的差异。
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灭完的培养基不用最好放在4℃的冰箱里保存，存放时间不要超过1星期，下次使用时再灭一次就可以了，营养油损失，但是对细菌的活化没有多大影响的
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如非必须不建议使用，以前实验室是这样处理：一次灭菌未使用完毕的培养基存放在锥形瓶中，密封好放置在4℃冰箱中（一般一周左右都会使用完，尽量现用现配），下次使用时放在微波炉内进行加热，实验室没有微波炉的话放在电磁炉上进行加热，尽量减少灭菌次数，尽量不要重复使用已经灭菌的培养基。
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2013年度魅力人物
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Powered by不同作用时间对微波炉灭菌效果的影响　
作者单位：吉林医药学院，吉林 吉林【关键词】& 消毒；灭菌；微波炉；病原微生物
长期以来各实验室、医院广泛采用高压蒸汽灭菌法来杀菌消毒，杀菌效果虽好，但费时、费力。近年来研究表明微波炉具有一定的杀菌作用，微波炉杀菌具有升温快、杀菌力强、消毒时间短的特点［1］，适宜于小件或厚度不大的物品消毒灭菌。但微波炉的杀菌效果影响因素众多［2］，本实验研究了病原微生物种类及作用时间与灭菌效果的关系，旨在为家庭及小型实验室快速消毒灭菌提供实验依据。
&&& 1& 材料与方法
&&& 1.1& 实验菌种及器材
&&& 菌种包括金黄色葡萄球菌（atcc25923）、大肠埃希菌（atcc25922）、痢疾志贺菌、白色念珠菌（atcc90028），均购自北京国家菌种保藏中心，本室传代保存，培养基采用营养琼脂培养基。
&&& midea微波炉（广东美的微波炉制造有限公司，kj23can2）、高压蒸汽灭菌锅（上海申安医疗器械有限公司）；细菌培养箱（天津市中环实验电炉有限公司）；营养培养基（杭州天和微生物试剂有限公司）。
&&& 1.2& 菌液制备
&&& 用普通营养琼脂培养基培养金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、痢疾杆菌、白色念珠菌至对数生长期，用预先配制好的无菌肉膏汤作稀释液，分别调配1个麦氏比浊、2个麦氏比浊、3个麦氏比浊菌悬液5 ml。
&&& 1.3& 微波灭菌及计数
&&& 将配制好的菌稀释液放入无菌平皿中，并在高火档微波炉内分别加热60、90、120、150、180 s（微波炉中央用1 000 ml烧杯放入200 ml水作为水负载）［3］。取灭菌后的细菌稀释液0.5 ml于无菌平皿中做倾注平板，冷却后放入35℃恒温箱中孵育18～24 h，计数活菌数。第 1 期& 赵& 龙，等.不同作用时间对微波炉灭菌效果的影响
&&& 2& 结& 果
&&& 同一种细菌随着加热时间的延长，灭菌效果增强。大肠埃希菌加热120 s可达到完全杀菌，痢疾杆菌经过150 s可达到完全灭菌，金黄色葡萄球菌和白色念珠菌经过180 s仍有细菌生长，但此四种细菌经过120 s杀菌率可达99.9%以上。而微波炉对革兰阳性菌的灭菌效果不如革兰阴性杆菌，白假丝酵母菌灭菌效果最差（结果见表1）。表1& 微波炉灭菌后的平均活菌数
&&& 3& 讨& 论
&&& 随着的发展，人民生活条件的改善，微波炉已普遍进入人们的生活中，微波炉是一种高效、方便、廉价的加热工具。研究微波炉的灭菌效果具有重要的现实意义和价值。虽然微波灭菌的机理至今仍未明确，但是目前人们认为微波炉主要以热效应和非热效应两种形式发挥灭菌功效。
&&& 国外学者研究表明在最适灭菌波段的微波可加快酶促反应，同时发现微波亦可以激活细菌内的部分酶（如细胞色素c、干扰素2&2&溶菌酶）进而影响细菌新陈代谢，因此在加速细菌衰老和死亡中可能起到一定作用。在实验中我们发现，大肠杆菌和痢疾杆菌在60～80℃时活菌数减少最多［4］，这两种细菌在此段温度最敏感，尤以大肠杆菌明显，而这两种细菌都是革兰氏阴性细菌，其与革兰氏阳性菌相比在细胞壁的结构上有本质的区别，故微波穿透细菌细胞壁时就会产生一定的差异。这也充分说明微波灭菌含有一定的非热效应。国内外有学者通过研究微波炉灭菌的环境湿度与灭菌效果，发现含水量对杀菌速度影响较大，当含湿率&25%时，含湿率越高，杀菌效果越好［5］。实验中考虑到这点，故加热时放置200 ml水做水负载。同时有学者通过微波对干菌片和湿菌片杀菌效果观察表明：微波灭菌非热效应起一定作用。
摘自： 　　
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