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关于北京三药的培养基
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关于培养基的配制，培养基包装说明上一般是将脱水的培养基粉放入纯化水中加热溶解，但是好像不同的单位方法都不尽相同。考虑到以后要做培养基配制、分装、灭菌、储藏条件及有效期等一系列验证，所以在此想跟到家讨论一下：
1．对于北京三药的玫瑰红钠琼脂培养基，我们在配制的时候，按照产品说明30.5g : 1L的配比，取244g脱水培养基，倒入已盛有8L的纯化水的大锅中搅匀，并开始用燃气加热，其间不时地搅拌，以防糊锅和扑出来。这里有些疑问：
（1）首先，要很长和时间才能把培养基粉和水的混合液加热到沸腾，这个可能是因为我们配的量太大了。但是在沸腾后，虽然已经把火关小，也勤于搅拌，可还是有很多泡沫产生，泡沫可能是正常现象吧。可关键是这样一直又加热了10多分钟后，停止加热放置了一会儿，培养基液一直还是昏昏的、不够透明澄清，是不是培养基粉没有完全溶解啊？还有个问题：我们加热的方法正确吗？
（2）这个时候还有少量泡沫漂在上面，我们把泡沫撇去不要。接着开始用杯子舀取培养基液分装至500ml三角瓶中，可是在分装过程中，大概有5到10分钟的样子（这时培养基还热的，没凝固），锅中剩余的培养基液中逐渐有许多类似琼脂的东西沉降到底层中。这样的现象正常吗？难道是琼脂还没有溶解啊？担心这样分装出来的这些培养基瓶中，有的琼脂浓度低，有的琼脂浓度高，会不会影响使用啊？
（3）与之对比呢，我们之前一直使用上海一家单位的培养基，用同样的配制方法，第一、泡沫比较容易去除，第二、最终配好的培养基澄清透明，而且放置过程中不会出现琼脂沉降到下层的情况，第三、即使是已经凝固的培养基，也是一致的比较鲜亮的颜色。
（4）最后还有个很大的疑问，本来上海的那家玫瑰红钠培养基凝固后，加热复融化很快的，而且倒了平板之后凝固的也很快，工作效率很高。而对比之下，北京三药的玫瑰红钠琼脂培养基，需要加热很久很久才能把块状的培养基全部融化，而且即使是融化了的培养基也是昏昏的，也存在有些琼脂沉降的问题。同样，倒平板后凝固的也很慢。
以上出现的问题如果是因为我们配制方法不正确，那么上海的这家培养基怎么没有类似的情况？
大家在使用中有没有出现过上面这些情况呢？
2．我们之前使用的上海这家单位的培养基，各种培养基灭菌的温度和时间不尽相同，比如营养琼脂和硫乙醇酸盐流体培养基等是115度30分钟，而改良马丁培养基等有些是115度20分钟或15分钟。虽然这家培养基用起来一直也没出现什么问题，但是115度20分钟的F0没有通过灭菌柜验证的要求，心里有些担心。加之由于10版药典规定要用对照培养基做灵敏度检查，担心这上海家的培养基质量通不过。所以出于对中检所的信任，最近打算逐渐把无菌检查、微生物计数、控制菌检查的培养基全部换成北京三药的培养基。疑问来了：三药各种培养基包装说明上的灭菌条件均一致为121度15分钟，但是听有人说用121度灭菌有些含糖的培养基质量会受到破坏。所以在此向请教一下各位前辈。
3．北京三药生产的美坛牌的脱水培养基是中检所监制的吗？
在此并不是对三药质疑，而是想把自己的疑惑讲出来。如果大家有在使用其他单位的培养基的话，有没有出现类似的一些问题呢，大家一起讨论吧！！！
另外，希望大家能把在培养基方面自己的见解分享一下，大家共同进步！
欢迎参与技术讨论
(去年冬天)
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你的配制方法是没错，可是为何一次配那么多呢
可以分次配制呀
我没用过三药的培养基
具体如何也不太清楚
楼主这些疑问可以先打电话到生产厂家咨询一下
学问之美，在于使人一头雾水；诗歌之美，在于煽动男女出轨；女人之美，在于蠢得无怨无悔；男人之美，在于说得白日见鬼。
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还是用海博的，质量不错。
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用的环凯的，其它的还没用过
(镇楼大师)
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三药？都没有听说过这个厂家
干粉试剂还是用大品牌靠得住
你们一次要配那么多培基吗
不能一次性灭菌那么多的
会出现过热现象
这个有个培基的国标上有规定
不然你就溶解和过滤除菌
(碧海蓝天 南博万)
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用日水的吧，质量比国产的强很多。
日水 高端质量
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我们一直用的是三药的培养基啊，配制玫瑰红钠琼脂培养基时一直都没问题呢，是不是一次配太多了？
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没别的原因，就是因为一次配的太多了，直接配400ml的。
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玫瑰红钠琼脂培养基？
你用于什么微生物检验啊？
(早起的虫子)
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& & 马老师OUT了，是用来做霉菌酵母的吧
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玫瑰红钠琼脂培养基 是2010版药典里用来检测霉菌和酵母菌的培养基
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标题: 有关DMSO溶解药物(药物,药物浓度,培养基)
摘要: [有关DMSO溶解药物(药物,药物浓度,培养基)] 请教：我要用DMSO溶解药物，所需药物浓度较高，有500mg L，处理细胞时DMSO的浓度又不能超过0 1%，这样1L的培养基中只能有1mlDMSO，这1ml怎么能溶解500mg的药啊？如何解决这个问题？谢谢！ 关键词:[药物 药物浓度 培养基]……
请教：我要用DMSO溶解药物，所需药物浓度较高，有500mg/L，处理细胞时DMSO的浓度又不能超过0.1%，这样1L的培养基中只能有1mlDMSO，这1ml怎么能溶解500mg的药啊？如何解决这个问题？谢谢！
回复我也要用DMSO溶药物，并且我的浓度比你的还要大，我的最大浓度是1g/L。我想问你，你能确定用DMSO处理细胞里的浓度不能超过0.1%吗？如果这样的话，我的细胞也有问题了！希望能进一步交流，谢谢！回复好像是0.1%到0.5%，但是在<=0.1%的情况下，对细胞的影响可以互忽略不计。你溶解的是药片还是粉剂？怎么溶解的？回复我的是粉剂,因为最大浓度已经超过你说的0.1-0.5%,所以现在还没找到很好的方法,请你如果知道更好的方法,请告之,谢谢!回复我的药物溶解也遇到这样的问题,如果使DMSO的量少,药就溶不了,怎么办呢,大家继续讨论啊回复你的药物溶解的问题，最后解决了没？回复我的药物溶解也遇到这样的问题,如果使DMSO的量少,药就溶不了,怎么办呢回复我也碰过这样的问题,我们是尽量控制DMSO的量 ,达不到0.1%也无所谓,只要你所有的干预组补上同样剂量的DMSO就行了回复peakhell:请问你一下，我不太明白你的意思，所有的干预组都补上同样剂量的DMSO。这样虽然每一组里所含的DMSO是一样的，但是如果DMSO本身对细胞有抑制的话，你也说不清最后你的实验结果是药物的抑制还是DMSO的抑制啊？回复不知道可不可以把DMSO用培养基稀释一下再配药啊？回复超声，适当提高DMSO比例，可以到1%，先去少量药物溶解回复yeats2005 : 可否说的详细些阿？谢谢！回复liuyingliu，不可以拿培养基把DMSO稀释了再溶药，因为拿DMSO来溶药一般都是因为这种药不溶于水的原因，如果拿培养基来稀释了，那也就起不到溶药的作用了！回复moonlightttt:我说了尽量控制DMSO的量 实际上 1%的DMSO基本就不会影响细胞生长 你可以把你的实验组跟你的DMSO组比较啊 不要跟空白组比较回复谢谢moonlightttt ！你打算怎么溶药呢？回复liuyingliu，不可以拿培养基把DMSO稀释了再溶药，因为拿DMSO来溶药一般都是因为这种药不溶于水的原因，如果拿培养基来稀释了，那也就起不到溶药的作用了！这样的话 如果我的药是用DMSO溶解的 加药时我再把它溶到培养基内 不知道这样我的药能均匀的溶于培养基吗回复其实很简单，你讲药物先用DMSO溶解，加药后会稀释的啊，比如，你加2微升用DMSO溶解的药物到2毫升培养基里面，是不是这时的DMSO浓度不就稀释1000倍而变成0.1％了吗？或者也可以这样：先用DMSO溶解药物，然后再用你配的别的溶剂稀释成你需要的浓度。两种方法各有好处，前者在加药的时候只需要加微量即可，不会影响总体的体积，但是药物和DMSO对单个或部分细胞的瞬时浓度很高，可能会带来抑制作用影响结果；后者加入药物由于事先稀释，对总体各细胞作用较平均，但需加的量较多，影响总体体积，而且较为繁琐。本人推荐采用第一种方法，在加药后用抢吹打，使药物迅速稀释开，避免对部分细胞的损伤。以上是本人拙见，望能者继续加以补充！回复1.找到你所用药物的说明书,上面会告诉你这个药物在DMSO中的溶解度,如果没有写明,你可以写信到公司咨询.2.如果你所需的药物浓度超过的药物本身的溶解度,你可以用DMSO和PBS的混合液(1:1)来稀释药物.另外,一般来讲,1ml的DMSO溶解500mg的物质是没有没有问题的,因为它的溶剂能力是惊人的,有"万能溶剂"之称.回复同意Phenix2046的说法，也就是说，药物在培养基中的浓度是终浓度，所以配药时一般比终浓度高100-1000倍，在稀释成10倍，每9ml再加1ml
10倍的，就成终浓度了。回复我使用的一种抗癌药物（不能溶于水），根据文献上讲的先要溶于DMSO，再加入1640中（培养液中DMSO终浓度不能大于1％，否则影响细胞的生长）。在实际操作中这种抗癌药物能很好的溶解在DMSO中（10mg/100μl）,但加入1640中，药物就沉淀出来。我很迷茫呀，听别人说国产的DMSO的纯度不高，会出现上述现象。回复进口的也会析出，我用的就是进口的回复楼上的朋友不知您有没有什么好的避免的解决方法，使用超声帮助溶解有效果吗？回复我们这里说DMSO<1%就可，是这样的吗？回复我今天用1mlDMSO溶解100mg的药物，没能完全溶解，已溶的也只是悬浊液而已，该怎么办？回复有没有尝试过调一下DMSO的pH值？在不影响药物作用的的基础上，pH值7.4左右时药物会溶得比较好，加在培养基中也不会析出的。回复我用DMSO把药物溶解了，然后用培养基稀释，刚配完还好，液体透明，放到4度冰箱里，拿出来就看见有沉淀了，用吸管吹了以后就成悬浊液了，怎么办啊？还能用吗？回复我使用的一种抗癌药物（不能溶于水），根据文献上讲的先要溶于DMSO，再加入1640中（培养液中DMSO终浓度不能大于1％，否则影响细胞的生长）。在实际操作中这种抗癌药物能很好的溶解在DMSO中（10mg/100μl）,但加入1640中，药物就沉淀出来。我很迷茫呀，听别人说国产的DMSO的纯度不高，会出现上述现象。我的药物是浮在上层~~~~~~~~~怎么办回复我也出现类似的问题，药物能很好的溶在DMSO里面，一旦加到培养液中，只要浓度过大就会出现不溶物。浓度较小则无此现象发生。 一直找不到很好的解决方法。我用SIGMA的DMSO，同样出现此类问题。回复DMSO是用来配水不溶性的药物的，临用时再把溶于DMSO的药物加入到培养基中，不要把DMSO与培养基提前混合，否则会有沉淀析出，造成培养基内部药物不均匀。DMSO用量一般建议不超过0.1%，多些也没有关系，结果比较时与加入同等量DMSO的control组相比即可。回复用ＤＭＳＯ溶解的药物如何保存阿？回复一般都是冻在-20度保存。看药品说明上有没有特别强调什么。回复我用10ul挥发油+10ulDMSO溶于980ul培养基~~`倍比稀释作用于96孔板~~~结果发现前3个浓度细胞大多死亡加了一个1%浓度的DMSO+无培养基的，结果显示细胞极少量死亡0.246 1.336 1.166 0.133 0.142 0.182 1.403 1..1220.186 1.33 1.115 0.134 0.118 0 1.44 1..2850.163 1.352 1.055 0.128 0.132 0.192 1.248 1..5090.195 1.275 1.556 0.136 0.141 0.2 1.362 1..418空白 0ul/ml DMSO1%10ul/ml5ul/ml2.5ul/ml1.25ul/ml0.625ul/ml0.3125ul/ml0.01ul/ml回复DMSO溶解的药物最好是现用现配，时间长了溶解效果就要降低，当然对于溶解度好的放在4度，应该没有问题。 我最近用的药物很难溶解，在DMSO中溶解好后，加入培养基中很容易出现沉淀， 培养基中的DMSO达到1％（对细胞的状态有一定的影响，不过设好对照还是可以用的），最后没办法只有降低药物的浓度，我更换了新的DMSO也没有明显的效果。但是我使用的药物在文献中使用的可要比我现在用的浓度高，不知那些人就近是怎么溶解的。回复刚开始做实验就那么烦啊 我用DMSO溶解士的宁粉末 刚配成5ug/ul 有人又告诉我注意DMSO的毒性 可是我是脑内给药 容积只能是1ul 还怎么稀释药物啊 别的溶剂试了又不行 怎么办 硬上？不稀释了 设个对照组看一下没影响就行了回复同求啊～～～～
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用dmso溶解的药物稀释到培养基后，重新析出来了？大家之前有遇到这种情况吗？应该怎么解决。
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我用dmso溶解的药物稀释到培养基后，重新析出来了？大家之前有遇到这种情况吗？应该怎么解决。镜下和直视。dmso在孔里最大的浓度是1%，这个是大了点，但是其他都是低于1%。换助溶剂为乙醇或丙酮能解决问题吗？最后不都要溶解稀释到培养基吗？求支招啊。谢谢
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inter158 恕我愚昧，真的不太明白这是什么意思，能否再细致一些，谢谢! 比如你母液是5mg/ml，需要的药物浓度是25μg/ml，假设体系是200μl的话，就是取母液1μl，不知道算的对不对，如果你把母液配制成10mg/ml了，那么同样的浓度就取0.5μl就可以了，这样DMSO在200μl中的浓度就降低了，以上数值只是随便举的~不知道您实际情况是什么样子可做调整，原则就是以可以溶解药物的最大DMSO做为母液，这样就可以忽略DMSO的影响了
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什么药物，试着改变下组成，比如，盐酸-，醋酸-。这样是否可行，另外，是否有先例？
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wangmaoshui 什么药物，试着改变下组成，比如，盐酸-，醋酸-。这样是否可行，另外，是否有先例？ 有。一个中药有效成分。 我是看着别人的硕士论文做的。他的文章里也没有提到会出现这个问题。为什么我的就不行。
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先用DMSO溶解,再加入一定量的表面活性剂，可以用点吐温,PEG或者聚氧乙烯蓖麻油. 吐温在细胞最终浓度0.5％以下
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有些药物的溶解PH是碱性的，中性或偏酸性就会析出
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请问现在这个问题解决了吗？我现在是用DMSO溶解吲哚美辛，配成母液，然后用培养基或者PBS稀释的时候也是发生了药物析出，好头疼啊！到底应该怎么办呢？
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有的药在溶解在dmso里面在用的时候需要交联在bsa上面才不会沉淀出来，你试试把你的药和20%的BSA1:1混合或者摩尔比1：3
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你们都不加表面活性剂么？
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加大药物浓度，减少用药量试一下
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ythuijuan 请问现在这个问题解决了吗？我现在是用DMSO溶解吲哚美辛，配成母液，然后用培养基或者PBS稀释的时候也是发生了药物析出，好头疼啊！到底应该怎么办呢？ 我们最后还是减小了药物的浓度，最大与最小浓度的比例为100。但是最大浓度的瓶底还是能看见沉淀。不知道之前师兄师姐的浓度怎么配出来的。
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zhangcarlman 你们都不加表面活性剂么？主任说不能这么弄。原因我也没有查到。
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小鱼279 加大药物浓度，减少用药量试一下恕我愚昧，真的不太明白这是什么意思，能否再细致一些，谢谢!
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xyq641160 有的药在溶解在dmso里面在用的时候需要交联在bsa上面才不会沉淀出来，你试试把你的药和20%的BSA1:1混合或者摩尔比1：3 非常感谢，现在不敢去试了，太浪费药物和时间了。能不能稍微再细致的说说BSA交联的原理？？
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抱歉，这个不太清楚，我现在做脂肪酸，这个东西在血清里面绝对是不溶解的，先用酒精或者dmso然后交联bsa
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inter158 恕我愚昧，真的不太明白这是什么意思，能否再细致一些，谢谢! 比如你母液是5mg/ml，需要的药物浓度是25μg/ml，假设体系是200μl的话，就是取母液1μl，不知道算的对不对，如果你把母液配制成10mg/ml了，那么同样的浓度就取0.5μl就可以了，这样DMSO在200μl中的浓度就降低了，以上数值只是随便举的~不知道您实际情况是什么样子可做调整，原则就是以可以溶解药物的最大DMSO做为母液，这样就可以忽略DMSO的影响了
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xyq641160 抱歉，这个不太清楚，我现在做脂肪酸，这个东西在血清里面绝对是不溶解的，先用酒精或者dmso然后交联bsa 同意，脂肪酸还可以先和NaOH反应，再和BSA反应~
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我的也是一个中药，和你情况一样，加了甘油促容效果不好，楼主是怎么解决的？求赐教，十分感谢！
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leetong 我的也是一个中药，和你情况一样，加了甘油促容效果不好，楼主是怎么解决的？求赐教，十分感谢！ 我后来没有加促溶剂，没有按文献所说的浓度配，浓度减半，实验就能做下去了。促溶剂不敢用，怕把那么贵的药给搅和了。
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leetong 我的也是一个中药，和你情况一样，加了甘油促容效果不好，楼主是怎么解决的？求赐教，十分感谢！ 我后来没有加促溶剂，没有按文献所说的浓度配，浓度减半，实验就能做下去了。促溶剂不敢用，怕把那么贵的药给搅和了。我也出现了同样问题，一年前用dmso溶解后加入dmem高糖，完全没有沉淀，但这次只要一加入dmem或者三蒸水，马上出现沉淀。同样的方法与比例为什么去年就能完全溶解，今年就出现好多沉淀？药物很贵，想另外问一下，析出的药物还能再回收利用吗？我这次配的唯一不同就是上次直接配的工作液，这次配的储备液，浓度是上次的100倍，求赐教！怎么解决……急急急啊
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不好意思，我无法解答你的问题，或者药学专业的同学能帮到你。
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关于丁香园什么叫培养基母液？为何配置培养基时先要配置母液_百度知道
什么叫培养基母液？为何配置培养基时先要配置母液
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有机物母液等、铁盐母液://e，非常繁琐.baidu://e;<img class="ikqb_img" src="/zhidao/wh%3D600%2C800/sign=ecd8db319a3df8dca5eb3/b90e7bec54e736d1b3fc2d46269ca，分别或混合溶解制成浓缩液，每次配制培养基时
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出门在外也不愁1、母液的配制和保存（1）基本培养基母液&&&&在植物组织培养过程中，配制培养基是日常必备的工作。为减少工作量，经常使用的培养基，可先将各种药品配成浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存，用时再按比例稀释，这样比较方便，且精确度高。母液要根据药剂的化学性质...
1、母液的配制和保存
（1）基本培养基母液
&&& 在植物组织培养过程中，配制培养基是日常必备的工作。为减少工作量，经常使用的培养基，可先将各种药品配成浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存，用时再按比例稀释，这样比较方便，且精确度高。母液要根据药剂的化学性质分别配制，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物质等母液。
&&& 在配制大量元素母液时，要防止在混合各种盐类时产生沉淀，为此各种药品必须在充分溶解后才能混合。在混合时要注意加入的先后次序，把Ca2+、Mn2+、Ba2+、SO42-、PO43-错开，以免KH2PO4和MgSO4与CaCl2等发生化学反应，相互结合生成CaSO4、BaSO4、Ca3(PO4)2沉淀。另外在混合各种无机盐时，其稀释度要大，慢慢混合，同时边混合边搅拌。在配制微量元素母液时也要注意药品的添加顺序，以免产生沉淀。
&&& 铁盐容易发生沉淀，需要单独配制。一般用FeSO4·7H2O和Na2-配成铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀，铁盐放在棕色瓶中保存比较稳定。
&&& 母液要用水配制，药品应选用纯度较高的化学纯CP或分析纯AR，以免有杂质对培养物造成不利影响。药品的称量及定容都要准确，在称量时不同的化学药品需使用不同的药勺，避免药品的交叉污染和混杂，每称好一种药剂应立即作一记号，以免重复或遗漏。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。
&&& 配制好的母液应分别贴上标签，注明母液种类、倍数、配制时间，并在记录本上详细记载配制及称取量，以便工作的准确及日后检查。母液最好在2-4℃的冰箱中保存，特别是有机物质要求更严，储存时间不宜过长，如发现母液有霉菌污染或沉淀变质时，应重新配制。
&&& 多数植物生长调节剂不溶于水或难溶于水，IAA、NAA、IBA、2，4-D等生长素类和GA3，可先用少量0.1molNaOH或95%酒精溶解，然后再用水定容到所需要的体积。KT、6-BA等细胞分裂素类则可用少量1mol/L HCl加热溶解，然后加水定容。植物生长调节剂母液可以在2-4℃的冰箱中保存。配制好的植物生长调节剂母液，也应在瓶上贴上标签，注明名称、浓度、配制日期，以便配制培养基基时计算，准确量取。
2、培养基配制
&&& 将配制好的各种母液按顺序排列，并逐一检查是否有沉淀或变色，避免使用已失效的母液。先取适量的蒸馏水防入容器内，然后依次用按培养基配方要求量吸取预先配制好的各种母液及生长调节剂等，并混合在一起。再将粉和糖加入其中，溶解混匀后加蒸馏水定容至所需体积。用0.1mol/L NaOH或HCl将培养基的pH调至所需的数值，然后分装到培养容器中。根据材料的不同，装入培养基的量稍有差别，一般培养装入0.7~1.2cm厚，让培养材料能保持原有的状态即可。最后包扎好瓶口或盖上瓶盖，对不同配方的培养基要做好标记，以免混淆。
&&& 培养基的pH是影响植物组织培养成功的因素之一。不同种类的植物，其生长发育适宜的pH值也不同，应该根据所培养的植物特性来确定pH值，多数植物要求灭菌前培养基的pH值调节到5.7~5.8。经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2~0.8个的安慰，故灭菌前的pH要高于目标pH值0.5个单位。
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