叶绿体提取方法色素的提取用什么溶液

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叶绿体色素的提取分离实验报告
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色素的提取和分离实验中用到的有机溶液是什么?（两种）
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下列有关“叶绿体色素的提取和分离”实验的叙述正确的是A．加入碳酸钙可以防止滤液挥发B．用层析液提取叶片中的色素C．用无水酒精分离滤液中的色素D．加入二氧化硅（石英砂）有利于充分研磨
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标题: 实验三十二 叶绿体色素的提取与分离（纸层析法）以及叶绿体色素性质的观察
摘要: [实验三十二 叶绿体色素的提取与分离（纸层析法）以及叶绿体色素性质的观察] 绿色植物的光合作用是在叶绿体中进行的，了解叶绿体色素的组成和性质对于理解光合作用的本质很有帮助。叶片中的叶绿素含量与光合强度以及氮素营养之间又有密切关系。因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用。 Ⅰ、叶绿体色素的提…… [关键词:色素 叶绿体 叶绿素 丙酮 培养皿 甲醇 提取液]……
绿色植物的光合作用是在叶绿体中进行的，了解叶绿体色素的组成和性质对于理解光合作用的本质很有帮助。叶片中的叶绿素含量与光合强度以及氮素营养之间又有密切关系。因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用。
　　Ⅰ、叶绿体色素的提取
高等植物叶绿体色素主要包括叶绿素（叶绿素a和叶绿素b）和类胡萝卜素（胡萝卜素和叶黄素）两类。它们是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，并在类囊体中与类囊体膜相结合成为色素蛋白复合体。这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。叶绿体色素易受光氧化，提取色素应在弱光中进行，并避光保存色素。
　　一、、药品与材料
　　（一）实验材料
　　菠菜（Spinacia oleracea L.）等新鲜的绿色植物叶片。
　　（二）与用品
　　天平，量筒，烧杯，具塞试管，研钵，离心机，漏斗，滤纸等。
　　（三）
丙酮，碳酸钙，石英砂。
　　二、实验步骤
　　1．用于理化性质鉴定和色层分离的叶绿体色素提取： 取含水量较低的新鲜植物叶片，擦净组织表面污物，去中脉后剪碎，混匀。去中脉后称取4 g放入研钵中，加入少许碳酸钙和石英砂，再加入10 mL丙酮，匀浆。取滤纸1张，置于漏斗中，用丙酮润湿，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤，用少量丙酮冲洗研钵、研棒及残渣过滤，得叶绿体色素提取液，暗中保存。
　　2．用于定量分析的叶绿体色素提取：取新鲜植物叶片，擦净组织表面污物，去掉中脉后称取0.5 g，剪碎放入研钵中，加入少许碳酸钙和石英砂，再加入10 mL丙酮，匀浆，过滤，再用10 mL丙酮冲洗滤渣，得叶绿体色素提取液。暗中保存备用。
　　Ⅱ、叶绿体色素的分离
分离色素的方法有多种，纸层析是其中最简便的一种。当溶剂不断从层析滤纸上流过时，由于混合物中各成分在流动相与固定相间分配系数不同，因此它们移动速率也不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
　　一、仪器、药品与材料
　　（一）实验材料
　　新鲜制备的叶绿体色素溶液。
　　（二）仪器与用品
　　量筒，新华滤纸，大培养皿一只，结晶皿或小培养皿，毛细滴管，毛细管，电吹风，剪刀。
　　（三）
　　丙酮-汽油（航空）推进剂（V/V=3/10）：用分析纯丙酮与航空汽油以体积比3：10混合即得。
　　二、实验步骤
　　1．取一长滤纸条卷成芯（纸芯的长度取决于从结晶皿或小培养皿底部到大培养皿边缘的高度），用毛细滴管在一端点样（注意一次所点溶液不可过多，使色素尽量少地扩展），电吹风吹干后，再重复数次 (也可把浓叶绿体色素溶液放在平底培养皿中，用滤纸一侧蘸叶绿体色素，然后将纸沿着长轴方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰好在纸捻的一端)。
　　2．另取一大圆形定性滤纸（比培养皿直径稍小），在滤纸的中心戳一孔径与纸芯相符的小孔，将纸芯带有色素的一端插入图形滤纸的中心处的小孔中，并使纸芯与滤纸齐平（勿突出）。
　　3．取一小结晶皿或培养皿，皿内加入适量丙酮-汽油（航空）推进剂，把插有纸芯的圆形滤纸平放在培养皿上（纸芯垂直），使纸芯的下端浸在推进剂中，迅速将大培养皿盖上。此时推进剂借毛细管引力顺着纸芯扩散到圆形滤纸上，并把叶绿体色素沿着滤纸向四周推进，不久即可看到被分离的各种色素的同心环。待推进剂前沿将要达到培养皿边缘时，取出滤纸。待推进剂挥发干后，用笔标出各色素的具体位置与名称。
　　Ⅲ、叶绿体色素某些理化性质观察
当叶绿体色素分子吸收光量子而转变成激发态时，分子很不稳定。当它再次回到基态时就会发射出红光量子，此现象称为荧光现象。因此从与入射光相垂直的方向观察可见叶绿体色素溶液呈血红色。
在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁可被H +
取代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制做植物的原色标本。
叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。叶绿素是一种二羧酸酯——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，因而可与碱起皂化反应，产生醇（叶绿醇与甲醇）和叶绿酸的盐，叶绿酸的盐可溶于水，利用此法可将叶绿素与类胡萝卜素分离。
氢氧化钾 叶绿素a的盐
甲醇 叶绿醇
一、仪器、药品与材料
（一）实验材料
新鲜制备的叶绿体色素溶液与新鲜叶片。
（二）仪器与用品
分液漏斗，移液管，与架，量筒，烧杯，酒精灯，滴管，药匙等。
（三）试剂
1．醋酸铜粉末。
2．KOH的甲醇溶液： 称取30 g KOH颗粒溶解于甲醇中，并用甲醇定容至100 mL。
3．含醋酸铜的醋酸溶液：称取6 g醋酸铜溶于100 mL 的50％醋酸溶液中。
4．1N浓盐酸：将36%的浓盐酸85.45mL稀释到1 000 mL即得。
　　二、实验步骤
　　1．叶绿素的荧光观察：取叶绿体色素提取液少许于试管中，首先从与入射光垂直的方向观察叶绿体色素溶液的颜色，然后再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色。两种不同的观察方向下，叶绿素体色素溶液颜色有何不同？为什么？
　　2．光对叶绿素的破坏作用：取上述叶绿体色素提取液少许，分装在2支试管中，一支放在暗处或用黑纸包裹，另一支放在强光(太阳或强光源)下。 2-3小时后，观察两支试管中溶液的颜色有何不同？为什么？也可用叶绿体色素色层分析的层析纸，剪成两半，每个半张上都有相同色素带，半张放在暗处，半张置于强光下，半小时后比较两张色谱上各色带的颜色变化。
　　3．铜代叶绿素反应：取上述叶绿体色素提取液少许于试管中，逐滴加入浓盐酸数滴并摇匀，观察溶液颜色的变化。待溶液颜色变褐色后，倾出一半于另一试管，加入醋酸铜粉末少许，微微加热，观察溶液颜色的变化。另取含醋酸铜的醋酸溶液20
mL，放入烧杯，取新鲜绿叶一片，放入溶液中，用酒精灯缓缓加热，观察叶片颜色的变化，直至颜色不再变化为止，解释上述颜色的变化过程。
　　4．叶绿素的皂化反应：取上述叶绿体色素提取液10 mL，加到盛有20 mL乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿漏斗边缘加入30 mL水，轻轻摇动分液漏斗，静置片刻，观察溶液变化。弃去下层丙酮和水，再用水冲洗乙醚溶液1-2次。然后于色素乙醚溶液中加入5 mL 30% KOH的甲醇溶液，用力摇动分液后静置约10min，再加蒸馏水约10 mL，摇动后静置分离，则得到黄色素层和绿色素层，分别保存于中。　　　
　　三、思考题
　　１．用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水丙酮等提取植物材料，特别是干燥材料中的叶绿体色素，结果会如何？为什么？
　　２．研磨提取叶绿素时，为何要加入CaCO3？
　　３．画图说明叶绿体色素纸层析结果，并解释原因。
　　４．铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用，这有何实用意义？
５．黄色素与绿色素的分离中，KOH溶液中为何要加入甲醇？如不加入甲醇，实验中会出现什么现象？
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