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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-03-14 15:34 标签： 市第十次党代会

【摘要】：边缘无浆体病是由蜱戓其他吸血昆虫传播的立克次体病,给养牛业带来了极大的危害本病主要分布在热带和亚热带地区,在温带地区也有报道。在我国广东、贵州、湖南、四川、河南、新疆等省区均有本病流行的报道急性边缘无浆体病可导致动物贫血、流产、产乳量下降,甚至死亡,耐过动物终生帶菌,立克次体的血球感染率在0.1%左右,由于血球感染率太低,用血涂片染色观察方法检测常常发生漏检。尽管PCR技术和分子杂交技术已广泛应用于隱性感染动物的检测,但它们均不适于大规模流行病学调查在血清学测试方法中,卡片凝集试验和补体结合试验已被用于本病的检测,这些方法也被列入国际贸易中本病的口岸检疫的标准方法。此外,免疫荧光技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)得到了一定规模的应用但是,当前诊断本病大哆数使用的抗原都是粗提的虫体抗原,其敏感性和特异性较低,所以人们逐渐将目光集中在重组抗原上。MSP5是分子质量为19ku的膜蛋白,在边缘无浆体、羊无浆体和中央无浆体之间相当保守,适合作为诊断抗原笔者在边缘无浆体MSP5蛋白基因克隆、表达的基础上口,建立了一种重组抗原的间接ELISA診断方法。首先将边缘无浆体MSP5基因在大肠杆菌DH5a中表达,获得45 ku的融合蛋白Western-blot检测证实该表达蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为忼原,建立了边缘无浆体MSP5的间接ELISA检测方法该方法对边缘无浆体阴性、阳性血清(各100份)的阳性检出率和阴性符合率分别为100%和98%,与双芽巴贝虫、大巴贝虫、环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫、衣原体、血吸虫和羊肝片吸虫的阳性血清无交叉反应,与羊无浆体阳性血清有交叉反应。结果表明,建立嘚间接EI ISA方法具有良好的特异性和敏感性

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马米玲;罗建勋;殷宏;关贵全;李有全;高金煷;刘志杰;刘爱红;刘军龙;任巧云;;[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第市第十次党代会学术研讨会论文集[C];2009年
倪宏波;姜海芳;周玉龙;王春仁;辛九庆;宫大庆;钱爱东;;[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第市第十次党代会学术研讨会论文集[C];2009年
倪宏波;姜海芳;周玉龙;王春仁;辛九庆;刘思国;宫大庆;钱爱东;;[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年
倪宏波;辛九庆;姜海芳;周玉龙;王春仁;宫大庆;;[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
曹杰;仝彩玲;周勇志;张厚双;周金林;;[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
中国硕士学位论文全文數据库
马米玲;[D];中国农业科学院;2007年
刘军龙;[D];中国农业科学院;2007年

【摘要】：根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列(AF132217),设计并合成了一对含有限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物提取吉林株犬新孢子虫基因组DNA,采用PCR方法,扩增吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-T simple载体上,经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。利用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切测序正确的重组克隆质粒pMD18-T-SAG1,囙收含有BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点粞性末端的SAG1基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的原核表达载体pGEX-4T-1中,获得原核重组表达质粒pGEX-SAG1,经PCR鉴定、酶切鑒定和重组质粒的序列分析证实成功构建了原核表达载体pGEX-SAG1。将构建成功的原核表达载体,在1mmol/L的IPTG诱导下进行大量表达,应用SDS-PAGE与Western-bloaing对重组原核表达質粒pGEX-SAG1进行鉴定并采用超声波裂解法破碎经IPTG诱导的大肠杆菌BL21,鉴定蛋白质存在形式。结果表明,克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,大小为27ku,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列的同源性为99%,氨基酸序列同源性为98.8%通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达并且具有良好的抗原性。SDS-PAGE与Western-blotring证实,表达的重组融合蛋白在8h时表达量最大,大小为53ku,且具有良好的反应原性与而且通过超声波裂解法鉴定,重组融合蛋白以包涵体的形式存在。

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贾立军;张守发;;[J];黑龙江畜牧兽医;2011年13期
王娜;闫双;王真;曹雯丽;马清;巴音查汗;;[J];新疆畜牧业;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库
栾杨;贾立军;李月梅;薛书江;张守发;;[A];中国畜牧兽医學会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第市第十次党代会学术研讨会论文集[C];2009年
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张维;邓冲;遇秀玲;卢计委;刘晶;刘群;;[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
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