揭秘智能机器人编程之旅——初识基于ROS的传感器&&不要等待，不要犹豫！！！马上动手，立刻拥有。属于你的智能机器人，就在你眼前。机器人神秘吗？学习机器人编程难吗？造机器人困难？接下来，每个周末，与大家相约，和大家一起交流机器人技术，揭开机器人的神秘面纱。本公号大致安排，先利用开源系统ROS带领大家进入神秘的机器人世界，让大家对机器人有一个理性的认识，后续会把这些核心功能的算法与现代工程、数学等结合起来进行深入探究。前面介绍了一些关于ROS的，今天开始为大家介绍几大核心功能之一传感器。机器人操作系统几大核心功能：1、传感器2、机器人导航3、机器人抓取4、机器人视觉5、机器人大脑6、机器人仿真由于传感器种类繁多，我们只简单介绍常用类型。想了解更多的ROS设备，请访问www.ros.org/wiki/Sensors。常用设备1、游戏杆|游戏手柄()在ROS里，游戏杆可以改变速度和方向远程控制机器人。2、激光雷达(Lidar)——Hokuyo URG-04lxLidar专门用于测量机器人与物体之间的距离，在移动机器人领域占有很高的地位。用于创建地图并进行导航、获取障碍物具体位置...Hokuyo URG-04lx激光雷达可以实现实时地图创建和导航的设备。想了解更多关于Hokuyo的信息，请访问www.hokuyo-aut.jp。3、3D——Kinect微软Kinect，它可以帮助我们完成机器视觉和机器人任务，它有3种设备：一个彩色VGA视频摄像头一个深度传感器一个麦克风阵列4、伺服电动机——Dynamixel& 伺服电动机在移动机器人领域，应用得比较广泛。Dynamixel由一家韩国ROBOTIS公司开发的一种机器人专用的线性、高性能网络执行机构。5、惯性测量模组(IMU)——Xsens MTiIMU时一种用于测量和报告被测设备速度、方向和重力的电子设备，它能将加速度计、陀螺仪，甚至是磁场强度计等传感器的数据进行综合。ROS系统中有很多IMU，Xsens MTi性能还算可以。6、开源电子原型设计平台——Arduino& Arduino有一个强大的社区，你可以找到你所想要的各种应用，可以帮助你找到各种设备信息。编程项目&游戏杆控制机器人ROS中的很多机器人也带有游戏杆的相关代码，只需要简单的移植即可，使用的移植代码是clearpath_husky机器人中的python代码1、测试游戏杆驱动安装功能包$ sudo apt-get install ros-fuerte-joystick-drivers&$ sudo apt-get install ros-fuerte-joystick-drivers-tutorials　　首先将游戏杆的接口插入电脑，检测手柄是否能够被识别：&&$ ls /dev/input/显示如下：&创建的端口是js0，然后测试游戏杆的操作是否工作:&&&&$ sudo jstest /dev/input/js0　　然后会在终端中显示游戏杆的各个控制值的即时值，操作游戏杆，如果每个按键和操作都有效，说明游戏杆是正常的。为了进行测试，我们需要使用joy和joy_node功能包：&&&&$ rosrun joy joy_node　　查看节点数据:&&&&$ rostopic echo joy2、控制代码查看游戏杆的数据结构：&　　我们主要用到的就是axes和buttons数据。最终的代码如下 roslib.load_manifest（'smartcar_teleop'）import rospyfrom sensor_msgs.msg import Joyfrom geometry_msgs.msg import Twistfrom std_msgs.msg import Stringclass Teleop:&&&&def __init__（self）：&&&&&&&&rospy.init_node（'smartcar_teleop_joy'）&&&&&&&&self.turn_scale = rospy.get_param（'~turn_scale'）&&&&&&&&self.drive_scale = rospy.get_param（'~drive_scale'）&&&&&&&&self.deadman_button = rospy.get_param（'~deadman_button', 0）&&&&&&&&self.cmd = None&&&&&&&&cmd_pub = rospy.Publisher（'cmd_vel', Twist）&&&&&&&&announce_pub = rospy.Publisher（'/smartcar/announce/teleops',&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&String, latch=True）&&&&&&&&announce_pub.publish（rospy.get_namespace（））；&&&&&&&&&rospy.Subscriber（&joy&, Joy, self.callback）&&&&&&&&rate = rospy.Rate（rospy.get_param（'~hz', 20））&&&&&&&&while not rospy.is_shutdown（）：&&&&&&&&&&&&&rate.sleep（）&&&&&&&&&&&&if self.cmd:&&&&&&&&&&&&&&&&cmd_pub.publish（self.cmd）&&&&def callback（self, data）：&&&&&&&&&&& Receive joystick data, formulate Twist message. &&&&&&&&&&&cmd = Twist（）&&&&&&&&cmd.linear.x = data.axes[1] * self.drive_scale&&&&&&&&cmd.angular.z = data.axes[0] * self.turn_scale&&&&&&&&if data.buttons[self.deadman_button] == 1:&&&&&&&&&&&&self.cmd = cmd&&&&&&&&else:&&&&&&&&&&&&self.cmd = None&if __name__ == &__main__&: Teleop（）3、机器人控制　　创建一个launch文件(teleop_joy.launch):&&&&在rviz中打开我们的机器人模型，然后打开游戏杆的控制节点：&&&&$ roslaunch smartcar_display.rviz.launch&&&&&$ roslaunch smartcar_teleop teleop_joy.launch　　然后按住刹车键进行操作，机器人就可以开始移动了&&&&&在新终端中输入：&&&&$ rostopic echo joy　　可以查看到实时的游戏杆控制数据：4、节点关系图&&今天带领大家初步认识一些常用传感器，并用简单的例子进行说明，后续详细介绍如何利用其他传感器进行编码。不要等待，不要犹豫！！！马上动手，立刻拥有。属于你的智能机器人，就在你眼前。机器人神秘吗？学习机器人编程难吗？造机器人困难？接下来，每个周末，和大家一起交流机器人技术，揭开机器人的神秘面纱。&AIRobotROS(gh_c9cb6e5a121b)　
　文章为作者独立观点，不代表大不六文章网立场
gh_c9cb6e5a121b致力于智能机器人技术的研究、讨论、交流、学习...，将智能机器人产业化、平民化。全力打造数据化、个性化、智能化的未来。大数据分析、人工智能技术、机器学习...融合体—智能机器人投资顾问，将不定期的推送投资理财信息和策略。热门文章最新文章gh_c9cb6e5a121b致力于智能机器人技术的研究、讨论、交流、学习...，将智能机器人产业化、平民化。全力打造数据化、个性化、智能化的未来。大数据分析、人工智能技术、机器学习...融合体—智能机器人投资顾问，将不定期的推送投资理财信息和策略。&&&&违法和不良信息举报电话：183-
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【求助】流式检测ROS的结果图，麻烦你们帮我分析下了急用
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这个帖子发布于5年零52天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位帮帮我吧。。。
是这样的，我将细胞培养在六孔板中加药后培养24小时后取出六孔板按照说明书操作，我用的是碧云天的ROS检测试剂盒，稀释的各种比例按照说明书上所写，然后上机检测，结果很是怪异1.阳性对照是上图，下图是没有加药的细胞，可是相差完全没有2.怎么出现了两个峰？3.我加药后的细胞死光了，完全检测不出来了，我方法是不是存在问题了4.怎么分析流式的ROS图啊各位大侠，求求你们了，老板逼得太紧了
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我最近也用的Beyotime的Kit, 用荧光显微镜检测， 也是发现没有趋势。而且发现激发光下荧光有增强的变化，问了一下他们的技术服务，说是自由基的产生是动态的，需要固定一下。可能你也是这个问题，你可以问问他们的客服。
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我最近也用的Beyotime的Kit, 用荧光显微镜检测， 也是发现没有趋势。而且发现激发光下荧光有增强的变化，问了一下他们的技术服务，说是自由基的产生是动态的，需要固定一下。可能你也是这个问题，你可以问问他们的客服。
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首席丫头 各位帮帮我吧。。。
是这样的，我将细胞培养在六孔板中加药后培养24小时后取出六孔板按照说明书操作，我用的是碧云天的ROS检测试剂盒，稀释的各种比例按照说明书上所写，然后上机检测，结果很是怪异1.阳性对照是上图，下图是没有加药的细胞，可是相差完全没有2.怎么出现了两个峰？3.我加药后的细胞死光了，完全检测不出来了，我方法是不是存在问题了4.怎么分析流式的ROS图啊各位大侠，求求你们了，老板逼得太紧了
先多看看文献，看下别人大致做出来的图是什么样子的，用什么指标来代替ROS(一般使用平均荧光强度,MFI).先问下你的阳性对照是用什么做的？看你的结果可能是使用了H2O2。看你的原图标注的M1和M2还有待商榷。
1.两者没有差异，可能是探针没有洗干净，DCFH的本底很强的;或是你的处理出现了什么差错。可以再做一组实验看看。
2.本来就是要有两个峰的，后面的是阳性细胞（与探针结合的细胞），前面的是正常的没有与探针结合的。
3.你加药后细胞死完了？是加你要造模的药还是其它药，或是阳性对照的药物。可以考虑减少药物的浓度，多做几次预实验，摸出最佳的药物剂量（如MTT，CCK8等）。
4.你原图上没有贴出来，一般FACS自带的软件分析的时候有个Mean，做3组独立实验，用均数±标准差统计。
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民间恺撒 edited on
有两个峰很可能是因为你的样品中有两群不同的细胞。ROS流式结果最好用平均荧光强度分析。至于结果如何，那只能多摸实验条件了，比如药物处理时间。
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kern6549 有两个峰很可能是因为你的样品中有两群不同的细胞。ROS流式结果最好用平均荧光强度分析。至于结果如何，那只能多摸实验条件了，比如药物处理时间。 你好，谢谢，我是用药物处理K562/A02细胞24h分为三个组：1.对照组，没加药，没有探针的细胞
2.实验组，加药后加入探针的细胞
3.加入ROS阳性对照，没有加药的细胞我培养24小时后取出六孔板，温PBS洗后，用无血清1640稀释探针（终浓度10umol/L）每组加入工作液1ml，阳性对照的加入稀释好的阳性对照也是1ml，培养箱中放半小时，五分钟翻转一次。取出后用温PBS洗三次，最后加入500ul温PBS重悬，上机检测。我的样品中就只有一种细胞，可以用流式设定检测平均荧光强度分析吗？
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民间恺撒 方法可以参考
首先感谢你。
我一下课就看了网页上的方法介绍，我今天下午再做一次ROS检测，看看能不能按照你提供的流式图分析，做完我再把结果上传，麻烦你了，帮我看看吧，谢谢。。
我的步骤：1.昨天去细胞铺6孔板，细胞密度1×106/L，加入药物后培养24h（昨天进行分三组：1.探针对照组：K562/A02+DCFH-DA，2.加药组 K562/A02+药物+DCFH-DA，3.空白对照组 K562/A02+阳性对照探针）
2.24小时后取出温PBS洗一遍，稀释DCFH-DA探针（10umol/L）和阳性对照，工作液1ml加入各组细胞，培养箱中放半小时，每五分钟颠倒混匀。
3.半小时后取出温PBS洗三遍，最后用500ulPBS重悬细胞上机检测。
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首先感谢你。
我一下课就看了网页上的方法介绍，我今天下午再做一次ROS检测，看看能不能按照你提供的流式图分析，做完我再把结果上传，麻烦你了，帮我看看吧，谢谢。。
我的步骤：1.昨天去细胞铺6孔板，细胞密度1×106/L，加入药物后培养24h（昨天进行分三组：1.探针对照组：K562/A02+DCFH-DA，2.加药组 K562/A02+药物+DCFH-DA，3.空白对照组 K562/A02+阳性对照探针）
2.24小时后取出温PBS洗一遍，稀释DCFH-DA探针（10umol/L）和阳性对照，工作液1ml加入各组细胞，培养箱中放半小时，每五分钟颠倒混匀。
3.半小时后取出温PBS洗三遍，最后用500ulPBS重悬细胞上机检测。
1.细胞接板密度可以稍微减少点。最好加上阴性对照组（什么都不加，就你的细胞）。
2.PBS洗一遍可能不够，最好洗个2、3次，以去除未结合的探针。
你再做做看下，把图发给我，一起交流下啊。
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我最近也想做ROS，看了这帖子受益匪浅，有几个问题也想请教一下前辈：1.细胞装载完探针后洗涤，洗涤完后是要将贴壁细胞吹打下来再上机检测么？用PBS混悬就可以么？在用PBS的洗涤的过程中，细胞会不会洗没了呀？2.由于我实验室没有流式细胞仪，需要将我的细胞送到其他学校去检测，两校之间的大概需要30分钟的路程，在这过程中会不会对我的细胞有影响呢？我应采取什么措施来减少这种影响？3.我也是用的碧云天试剂盒，说明书上写明试剂盒中所提供的活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平，我的细胞要用药物处理24h，那我加上该活性氧对照后，该组的细胞岂不都会凋亡了？非常期待前辈的解答，不甚感激。
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sunrise84 我最近也想做ROS，看了这帖子受益匪浅，有几个问题也想请教一下前辈：1.细胞装载完探针后洗涤，洗涤完后是要将贴壁细胞吹打下来再上机检测么？用PBS混悬就可以么？在用PBS的洗涤的过程中，细胞会不会洗没了呀？2.由于我实验室没有流式细胞仪，需要将我的细胞送到其他学校去检测，两校之间的大概需要30分钟的路程，在这过程中会不会对我的细胞有影响呢？我应采取什么措施来减少这种影响？3.我也是用的碧云天试剂盒，说明书上写明试剂盒中所提供的活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平，我的细胞要用药物处理24h，那我加上该活性氧对照后，该组的细胞岂不都会凋亡了？非常期待前辈的解答，不甚感激。
1.不是直接吹打，那样对细胞损伤很大（如果你的细胞贴壁不是很紧，可以试试），用胰酶吧。
2.PBS混匀为什么会把细胞洗没了啊？不会的。
3.没关系，放到冰盒里，用封口膜封紧，固定牢，1h不会变化很大的，时间越短越好。
4.你可以等药物作用快24h后再加入H2O2做对照，这样过个20-30min后直接加探针就可以了。要学会变通！另外：建议你可以加探针时把培养基换成无血清的，加好后用PBS洗2-3遍，再加入含血清的培养基放到冰盒里。
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3.没关系，放到冰盒里，用封口膜封紧，固定牢，1h不会变化很大的，时间越短越好。
另外：建议你可以加探针时把培养基换成无血清的，加好后用PBS洗2-3遍，再加入含血清的培养基放到冰盒里。因为我对那个检测的实验室不熟悉，我怕过去后人家都不让我处理细胞，直接拿处理好的细胞上机检测，所以如果我直接将细胞消化完后混悬成上机前的状态再拿过去能不能行呢？我看前辈也是到其他地方做的流式，不知您有没有试过这样操作？
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sunrise84 因为我对那个检测的实验室不熟悉，我怕过去后人家都不让我处理细胞，直接拿处理好的细胞上机检测，所以如果我直接将细胞消化完后混悬成上机前的状态再拿过去能不能行呢？我看前辈也是到其他地方做的流式，不知您有没有试过这样操作？
那你可以先和人家沟通一下，看到底可不可以处理，其实只要有块地方就可以了，不用无菌状态的。你说的先处理好了后拿过去直接检测我也看到过别人说过，但我没做过，不能给你准确的答复了。
你可以先试试，如果发现结果有点诡异就重新考虑下，如果做出来的结果还可以就按照你这样做好了。我之前都是带过去后再处理的，结果还不错就没试了。
另外，你对流式机子的操作熟悉不熟悉，不然也会浪费挺多时间的。都要考虑进去，时间越长结果越不可靠。
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那你可以先和人家沟通一下，看到底可不可以处理，其实只要有块地方就可以了，不用无菌状态的。你说的先处理好了后拿过去直接检测我也看到过别人说过，但我没做过，不能给你准确的答复了。
你可以先试试，如果发现结果有点诡异就重新考虑下，如果做出来的结果还可以就按照你这样做好了。我之前都是带过去后再处理的，结果还不错就没试了。
另外，你对流式机子的操作熟悉不熟悉，不然也会浪费挺多时间的。都要考虑进去，时间越长结果越不可靠。哦，好的，非常感谢。我过去检测要付钱的，有专门检测的人员。我造的模型就是H2O2的氧化损伤模型，如果20-30分钟前另设一个H2O2的阳性对照组这样也可以么？一般一个组做几个重复孔呢？
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那你太幸福了，不过建议你先看看文献，看下别人的结果都是怎么表达的，做之前跟老师沟通好，把一些细节考虑到。
你做H2O2的氧化损伤模型，怎么还用H2O2做阳性对照啊？
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1.细胞接板密度可以稍微减少点。最好加上阴性对照组（什么都不加，就你的细胞）。
2.PBS洗一遍可能不够，最好洗个2、3次，以去除未结合的探针。
你再做做看下，把图发给我，一起交流下啊。
你好，民间恺撒，首先很感谢你呢，因为现在期末考试，K562/A02细胞生长状态不理想所以第二天进行的ROS检测推迟了，不好意思，已经铺板了，六孔板，细胞密度偏大，做了马上把图上传，一起交流谢谢。
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好的。第一次最好把你要做的药物也单独设一个孔，既药物+细胞（注意不加探针），看下有没有荧光产生。
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sunrise84 我最近也想做ROS，看了这帖子受益匪浅，有几个问题也想请教一下前辈：1.细胞装载完探针后洗涤，洗涤完后是要将贴壁细胞吹打下来再上机检测么？用PBS混悬就可以么？在用PBS的洗涤的过程中，细胞会不会洗没了呀？2.由于我实验室没有流式细胞仪，需要将我的细胞送到其他学校去检测，两校之间的大概需要30分钟的路程，在这过程中会不会对我的细胞有影响呢？我应采取什么措施来减少这种影响？3.我也是用的碧云天试剂盒，说明书上写明试剂盒中所提供的活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平，我的细胞要用药物处理24h，那我加上该活性氧对照后，该组的细胞岂不都会凋亡了？非常期待前辈的解答，不甚感激。
你好首先不好意思忙于考试才看到1.不要吹打，建议胰酶消化后PBS重悬，PBS不会把细胞洗没有2.应该会有影响，因为加入探针后需要在37℃的培养箱中每隔3-5min就混合，增加细胞和探针的接触，说明书上也有写清楚探针需要进入细胞内和ROS结合才能检测到，如果可以的话，学校里面有没有具有流式仪的实验室，咨询下也可以的啊。3.我的细胞是24小时后加入阳性对照的，没有一开始就加。一起交流。共同学习呢
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民间恺撒 好的。第一次最好把你要做的药物也单独设一个孔，既药物+细胞（注意不加探针），看下有没有荧光产生。谢谢你！！好的，就是说用一个孔只加细胞和作用的药物，24小时后也不加探针，直接洗涤后上机。恩知道了，非常感谢你~~因为ROS头都大了！！
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民间恺撒 是的。请问，流式也要测三次才有符合统计意义吗？我现在数据不稳，不知道怎么回事。请指教啊，谢谢。
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鲶鱼 请问，流式也要测三次才有符合统计意义吗？我现在数据不稳，不知道怎么回事。请指教啊，谢谢。
恩，文献上一般都是3次独立实验的。数据不稳定，可能有以下几个原因：1.标本的问题：细胞接板的密度是否差不多，有没有去血清化；药物作用的剂量和时间是否统一；药物和探针有没有过期（一般加了阳性对照组就可以了）等；2.操作的问题：每次操作是否都是由本人完成；操作的步骤是否一致；流式操作是否都是由同一人完成的等；3。环境的影响，温度、光线等。
这上面只是我做实验时的经验，有些问题还要靠自己去寻找，毕竟每个人做的总有差异。
我感觉自己最好每天在实验记录本里都写点东西，不管是什么：实验的操作、看文献和书籍得到的知识或看论坛得到的经验，把对自己有用的，以前不知道的都记下来；同时给自己提问，看什么方面没有解决或是不知道。这样等你分析的时候就能追根溯源的去找问题的所在，当你把你在实验记录本上的问题都弄清楚了，恭喜你，你的实验也就完成了，同时你也得到了锻炼。以上文字，仅供参考。
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民间恺撒 edited on
楼上kern6549的回复很好啊，楼主分析的时候用平均荧光强度，mean值看看?
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1.两者没有差异，可能是探针没有洗干净，DCFH的本底很强的;或是你的处理出现了什么差错。可以再做一组实验看看。
2.本来就是要有两个峰的，后面的是阳性细胞（与探针结合的细胞），前面的是正常的没有与探针结合的。
3.你加药后细胞死完了？是加你要造模的药还是其它药，或是阳性对照的药物。可以考虑减少药物的浓度，多做几次预实验，摸出最佳的药物剂量（如MTT，CCK8等）。
4.你原图上没有贴出来，一般FACS自带的软件分析的时候有个Mean，做3组独立实验，用均数请问阳性对照怎么加在细胞里啊？我的实验有三个组，正常组，模型组和药物组，我的药物作用时间是24小时。那么我是不是还要设一个组，在加药物同时，在这个组加阳性对照，也一起作用24小时。然后再一起检测？另外我的细胞是养在96孔板的，我可以直接在96孔板里加探针，然后上荧光酶标仪检测吗？这个问题我纠结了好久。。。。希望你能让我脱离苦海！
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gsm1net 请问阳性对照怎么加在细胞里啊？我的实验有三个组，正常组，模型组和药物组，我的药物作用时间是24小时。那么我是不是还要设一个组，在加药物同时，在这个组加阳性对照，也一起作用24小时。然后再一起检测？另外我的细胞是养在96孔板的，我可以直接在96孔板里加探针，然后上荧光酶标仪检测吗？这个问题我纠结了好久。。。。希望你能让我脱离苦海！再加一组就可以了，一般看你阳性对照用什么了，如果用H202的话，半个小时就够了，你可以在离加探针前30分钟加H2O2。 至于能不能直接加，还真不是很清楚。你可以参考下面这篇文献
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民间恺撒 是的。
真的很谢谢你，这次做的流式我让师兄帮我加了mean，操作过程如前，细胞铺版，加药作用24小时后，将六孔板取出收细胞，860rpm5min温PBS洗一次后，1:1000稀释DCFH探针作用于细胞，阳性对照组加入1ul阳性对照，放入培养箱30min，每隔5min翻转一次（中间两次忘记了）
师兄上机后，我觉得图还是很不理想，觉得峰值不对，麻烦帮我看下吧谢谢。。 补充一下，第三个图是加入阳性对照探针的第一个是没有加药的，第二个图是加药刺激24小时的，感觉不对不对的，真的谢谢你们
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首席丫头 edited on
叶绿素201006 楼上kern6549的回复很好啊，楼主分析的时候用平均荧光强度，mean值看看?你好，叶绿素201006，我这次做的用了平均荧光强度了。 我的图传在上一个回复了不好意思，麻烦帮我看一下谢谢
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真的很谢谢你，这次做的流式我让师兄帮我加了mean，操作过程如前，细胞铺版，加药作用24小时后，将六孔板取出收细胞，860rpm5min温PBS洗一次后，1:1000稀释DCFH探针作用于细胞，阳性对照组加入1ul阳性对照，放入培养箱30min，每隔5min翻转一次（中间两次忘记了）
师兄上机后，我觉得图还是很不理想，觉得峰值不对，麻烦帮我看下吧谢谢。。 补充一下，第三个图是加入阳性对照探针的第一个是没有加药的，第二个图是加药刺激24小时的，感觉不对不对的，真的谢谢你们
你正常对照有没有加探针？其实像你这样区别不是很大的话，可以考虑不用设M1，你重新用软件分析下全部细胞的平均荧光强度看下。
感觉不对？是文献上你的药加进去24h后改变很大，而你没做出来吗？
推荐一个专业的流式网站去看看。
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首席丫头?你好，叶绿素201006，我这次做的用了平均荧光强度了。?我的图传在上一个回复了不好意思，麻烦帮我看一下谢谢看ROS的平均荧光强度，可以不用看Ｍ１的，你的图里，从左到右 荧光强度是依次增强的，不知道符不符合你的实验预想
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按照各位前辈提供的方法，我昨天刚测了ROS，用碧云天的试剂盒，加入ROSUP处理半个小时候阳性对照组的平均荧光强度为180左右，不知道这个荧光强度处于什么水平呢？强还是弱呢？另外还想请教前辈，如何才能从图中看出加入探针DCFH后的背景深与浅？由于我现在还没有拿到图，所以无法贴图，期待各位的解答，谢谢！
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各位大侠们好，年后小的也要开始检测ROS啦，看完大家的帖子受益匪浅，但还是有几点疑问，还望各位达人不吝赐教：1.实验开始前咨询了流式的老师，说检测的时候需要一管不加探针的空白细胞做对照，因为我想要对比两种细胞中ROS的基础水平，那么需要同时准备这2种细胞的不加探针的空白对照么？这样的话，测出来的结果应该如何对比呢？2.= =！还是关于不加探针的空白对照的问题。。我的细胞在加药处理后还要进行放射线的照射。。也就是有不加药的空白对照组，加药组，药物处理后照射，然后检测ROS的水平，这个时候，这个不加探针的空白对照组应该是没有照射的还是照射过的。。。3.看别人检测的结果，空白不加探针的细胞有时候也有荧光值，，那么对比各实验组的时候是否应该减去这个不加探针的细胞的荧光值啊？
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sunrise84 按照各位前辈提供的方法，我昨天刚测了ROS，用碧云天的试剂盒，加入ROSUP处理半个小时候阳性对照组的平均荧光强度为180左右，不知道这个荧光强度处于什么水平呢？强还是弱呢？另外还想请教前辈，如何才能从图中看出加入探针DCFH后的背景深与浅？由于我现在还没有拿到图，所以无法贴图，期待各位的解答，谢谢！我一般做出来的在350-500之间。背景好像是在荧光显微镜下观察的吧，流式中就看Mean值就行了，如果正常组的值都很大就有可能是没洗干净。最好把图放上一起看看。
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coolkiddoctor 各位大侠们好，年后小的也要开始检测ROS啦，看完大家的帖子受益匪浅，但还是有几点疑问，还望各位达人不吝赐教：1.实验开始前咨询了流式的老师，说检测的时候需要一管不加探针的空白细胞做对照，因为我想要对比两种细胞中ROS的基础水平，那么需要同时准备这2种细胞的不加探针的空白对照么？这样的话，测出来的结果应该如何对比呢？2.= =！还是关于不加探针的空白对照的问题。。我的细胞在加药处理后还要进行放射线的照射。。也就是有不加药的空白对照组，加药组，药物处理后照射，然后检测ROS的水平，这个时候，这个不加探针的空白对照组应该是没有照射的还是照射过的。。。3.看别人检测的结果，空白不加探针的细胞有时候也有荧光值，，那么对比各实验组的时候是否应该减去这个不加探针的细胞的荧光值啊？1.不加探针的细胞是用来调阴性区的，把细胞调到最左边，一般的Mean值大概就个位数，这个是为了检测下细胞自身会不会产生荧光（与你要检测的，在相同的激发和发射波长），如果数值不大就没什么影响，可以用来做实验。你要比较两组细胞的基础ROS水平，就先检测下两种细胞会不会产生荧光，如果没有，在同时加入探针然后上流式检测，对比两者的Mean值就可以了。2.你可以检测下细胞被照射后会不会产生荧光，没有的话就无所谓了，按照正常的步骤来。3.不用减去的，但你在收细胞的时候都要在相同的条件下，这样才有可比性。 这个帖子是我发在中文流式网上的，一些问题可能对你有帮助，可以去看看。
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民间恺撒 edited on
民间恺撒 你可以检测下细胞被照射后会不会产生荧光，没有的话就无所谓了，按照正常的步骤来。特别感谢民间凯撒，我还想问一下，既然是调零用，我想不管照射后是否会产生荧光，是不是也应该用照射后的细胞作为resting cell调零呢？因为我所用的细胞是一种胞内活性氧清除剂水平较高的细胞，而我所加的药物是阻滞活性氧清除剂作用的药物，这个时候，要对比药物是否有效，是不是应该就用照射后的不加探针的细胞作为调零点？？如果我用未照射的细胞作为调零点，会不会对结果产生影响啊？？迷惑啊囧rz。。。。
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coolkiddoctor 特别感谢民间凯撒，我还想问一下，既然是调零用，我想不管照射后是否会产生荧光，是不是也应该用照射后的细胞作为resting cell调零呢？因为我所用的细胞是一种胞内活性氧清除剂水平较高的细胞，而我所加的药物是阻滞活性氧清除剂作用的药物，这个时候，要对比药物是否有效，是不是应该就用照射后的不加探针的细胞作为调零点？？如果我用未照射的细胞作为调零点，会不会对结果产生影响啊？？迷惑啊囧rz。。。。
不知道你的实验具体是怎么做的,这句话&因为我所用的细胞是一种胞内活性氧清除剂水平较高的细胞，而我所加的药物是阻滞活性氧清除剂作用的药物&我可不可以理解为你的细胞基础的ROS水平很低,而用了药物后由于阻滞了活性氧清除剂的水平而导致了ROS的水平上升?如果是这样的话就直接用没照射的细胞作为调零.
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不知道你的实验具体是怎么做的,这句话&因为我所用的细胞是一种胞内活性氧清除剂水平较高的细胞，而我所加的药物是阻滞活性氧清除剂作用的药物&我可不可以理解为你的细胞基础的ROS水平很低,而用了药物后由于阻滞了活性氧清除剂的水平而导致了ROS的水平上升?如果是这样的话就直接用没照射的细胞作为调零.嗯，如此，谢谢谢谢！知道该怎么做了，还有特别感谢你给的流式中文的帖子地址，看了很受益，一些心中存疑很久的问题都得到了解决
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