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【求助】DNA提取求助，急!
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这个帖子发布于6年零201天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位兄弟姐妹：我是一位做实验的新手，现做实验中问题重重，请帮助，先谢过。我用福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行DNA提取，对提取的DNA进行PCR扩增。我提取DNA后测OD260和OD280表明我提的DNA应该质量上还可以（在1.6-1.9），OD值在0.1-0.3（稀释20倍后测定值）.结果进行PCR扩增时老是没有扩增条带出来；而阳性对照有条带阴性对照则无，我现在判定我的PCR反应体系没有问题，应该是模板的问题。在进行DNA提取过程中我用的是QIAGEN 51304试剂盒进行提取的，扩增片段在350-450bp之间。我的问题到底在哪里呢？请高手指教！！热盼中
不知道邀请谁？试试他们
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把反应条件列出来。
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我也遇到相似的问题，不同的是我们提取的是石蜡包埋组织中的暗色真菌DNA，难度比较大。不知道各位同仁有没有做过这方面的研究，能否提供点经验，非常感谢！
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我用的是Takara的高保真Taq酶，PCR反应程序为：95度5分钟，94度30秒，53度45秒，72度60秒。进行了40循环，循环结束后72度延伸10分钟。
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两个问题：第一，阳性对照和样本什么区别，如果不涉及保密能否准确说一下是什么组织？第二，模板浓度多少？我遇到过这种情况，有可能是由于模板浓度太大或者太小造成的另外，由于是长期保存的组织，我建议你还是跑琼脂糖观察一下DNA降解的情况，如果降解很厉害，也会出现扩增失败的情况
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是这样的，我的阳性对照是从外周血淋巴细胞中提取的DNA（人基因组DNA）。而我的石蜡切片也是人的组织的石蜡切片（肺组织的）。在50ul反应体系中我用的模板量在100-500ng之间。还有如果是DNA降解的问题的话，是不是我改变引物将扩增片段适当缩短会不会好一点呢？多谢！
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yujiaping1 建议你还是跑琼脂糖观察一下DNA降解的情况，如果降解很厉害，也会出现扩增失败的情况有道理模板量降一些试试（50-100ng），加5%DMSO试试
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模版浓度不存在问题，如果DNA降解严重，可以多设计几对引物试试
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多谢各位战友的帮助，我又重新设计的两对引物，再试试。另外也加用DMSO看看能否P出来。等明日结果出来后再向各位战友汇报情况，大家相互学习。
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昨天进行了一次PCR，我降低了模板的用量（100ng）,同时在反应体系中加入了DMSO，结果还正的跑出了条带，只是条带很弱，达不到测序要求的产物的量，我下一步该怎么办呢？
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用的高保真酶再加点普通的taq或者干脆用普通的taq因为你的片段都不大，现在普通的酶的变异概率也很低的
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用的高保真酶再加点普通的taq或者干脆用普通的taq为什么要用普通的taq呢？不会仅仅是价格的问题吧？
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我也遇到类似问题，我也是用蜡块提取DNA，我提了后测OD值还可以，但用琼脂糖电泳却没有任何条带，有师姐说应该是DNA降解了，我现在都不知道该怎么办了，还请各位高手给指点指点,多谢了。
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不知道你提取DNA的蜡块中有多大的组织，如果没有什么组织也会提不出DNA或者提取的DNA的量特别少
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新鲜组织的DNA比较容易扩增，蜡块要更难，一般都用试剂盒提取蜡块的DNA建议将buffer，dNTP，尤其是Taq酶换用新的，最好是都用同一家公司的
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红杉树 各位兄弟姐妹：我是一位做实验的新手，现做实验中问题重重，请帮助，先谢过。我用福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行DNA提取，对提取的DNA进行PCR扩增。我提取DNA后测OD260和OD280表明我提的DNA应该质量上还可以（在1.6-1.9），OD值在0.1-0.3（稀释20倍后测定值）.结果进行PCR扩增时老是没有扩增条带出来；而阳性对照有条带阴性对照则无，我现在判定我的PCR反应体系没有问题，应该是模板的问题。在进行DNA提取过程中我用的是QIAGEN 51304试剂盒进行提取的，扩增片段在350-450bp之间。我的问题到底在哪里呢？请高手指教！！热盼中你用的阳性对照是什么？石蜡里提取的DNA是断裂的DNA,对PCR的反应条件很苛刻的
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红杉树 各位兄弟姐妹：我是一位做实验的新手，现做实验中问题重重，请帮助，先谢过。我用福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行DNA提取，对提取的DNA进行PCR扩增。我提取DNA后测OD260和OD280表明我提的DNA应该质量上还可以（在1.6-1.9），OD值在0.1-0.3（稀释20倍后测定值）.结果进行PCR扩增时老是没有扩增条带出来；而阳性对照有条带阴性对照则无，我现在判定我的PCR反应体系没有问题，应该是模板的问题。在进行DNA提取过程中我用的是QIAGEN 51304试剂盒进行提取的，扩增片段在350-450bp之间。我的问题到底在哪里呢？请高手指教！！热盼中你用的阳性对照是什么？石蜡里提取的DNA是断裂的DNA,对PCR的反应条件很苛刻的
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hTNGα作用相关基因BRI3的研究Ⅰ小鼠BRI3基因的克隆及其功能的初步研究Ⅱ用酵母双杂合系统筛选与人BRI3相互作用的蛋白质Ⅲ人BRI3相互作用蛋白BRI3BP的基因克隆和定位论文.pdf96页
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dudayixiu2891
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