各位高手,请问做什么是逆转录录时,10mM dNTP的量加多少合适啊?

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&&逆转录实验步骤 注意事项
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【求助】大家做逆转录时加多少RNA呢?
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这个帖子发布于7年零71天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚学会作反转录,用的是Fermentas的反转录试剂盒,20ul的体系,说可以转录0.1~5ug的总RNA。曾试着用不同个体的RNA样本,每次用50ng、100ng、200ng、300ng、400ng、800ng、1ug、2ug、4ug的总RNA做反转录,结果得到的cDNA浓度都在ng/ul。只有50ng的时候稍微少一些2200ng/ul,另外,个别时候(2ug的一次)到达3000ng/ul,但是得到的cDNA浓度显然与模板浓度没有线性关系。是说这个试剂盒其实只有转录0.1ugRNA的能力吗?还是因为受dNTP量的限制,cDNA的只能达到浓度?这样每次加1ug的RNA就浪费了。大家有人遇到这种情况吗,有米有高人给我指点一下呢?
不知道邀请谁?试试他们
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invitrogen的反转录试剂盒范围是:1ng-5ug RNA;但不知道反转录后cDNA的量
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40ul的体系,3ug 总RNA
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纯度不高时,建议少加一点,因为太多杂质会影响反转录效率。纯度很高时,就无所谓了。我做的时候都是加 1 uL,大约2 ug。
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多项选择题逆转录反应体系包括A.RNA酶抑制剂B.RNA模板、4种dNTPC.合适的缓冲液体系D.逆转录酶,寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物
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