1 屎肠球菌在饲用微生态制剂中的研究与应用_葛龙_图文_百度文库
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1 屎肠球菌在饲用微生态制剂中的研究与应用_葛龙
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植物乳杆菌C8_1产类细菌素的初步研究
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鸡源粪肠球菌的分离鉴定
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摘&&要：为丰富粪肠球菌（Enterococcus faecalis）菌种来源，本研究从鸡肠道内容物中分离获得9株疑似肠球菌的细菌，并对其分别编号。通过形态特征、生理生化鉴定、16S rDNA分子鉴定3种方法鉴定分离获得的9株细菌，研究结果显示，分离获得的9株菌中有4株是粪肠球菌，分别是粪肠球菌HEW-A107、粪肠球菌HEW-A109、粪肠球菌HEW-A110和粪肠球菌HEW-A113。关键词：鸡；粪肠球菌；分离鉴定益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，能作用于人或者动物体肠道、生殖系统，产生确切健康功效从而改善宿主平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称[1-2]。我国农业部《品种目录（2013）》规定可用于生产微生态制剂的细菌约有30种，即地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、枯草芽孢杆菌（B. subtilis）、两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidium）、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、乳酸肠球菌（E. lactis）、屎肠球菌（E. faecium）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、干酪乳杆菌（L. casei）、德氏乳杆菌乳酸亚种（L.delbrueckii subsp.lactis）、植物乳杆菌（L. plantarum）、乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）、戊糖片球菌（P. pentosaceus）、沼泽红假单胞菌（Rhodop seudanonas palustris）、婴儿双歧杆菌（Bifidobacterium infantis）、长双歧杆菌（B. longum）、短双歧杆菌（B. breve）、青春双歧杆菌（B. adolescentis）、嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）、罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）、动物双歧杆菌（B. animalis）、迟缓芽孢杆菌（B. lentus）、短小芽孢杆菌（B. pumilus）、纤维二糖乳杆菌（L. cellobiosas）、发酵乳杆菌（L. fermentum）、德氏乳杆菌保加利亚亚种（L.delbrueckii subsp. bulgaricus）、产丙酸丙酸杆菌（Propionibacterium acidipropionici）、布氏乳杆菌（L. buchneri）、副干酪乳杆菌（L. paracasei）、凝结芽孢杆菌（B. coagulans）、侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporu）。粪肠球菌是革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌，是人和动物肠道内主要菌群之一[3]，其能产生天然抗生素，有利于机体健康[4]；同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境[5]；还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降[6]。国内对粪肠球菌的研究起步较晚，但是发展较快，本研究通过从饲喂的动物中分离获得鸡源粪肠球菌，并鉴定分离获得的菌株，旨在丰富粪肠球菌菌种库，为粪肠球菌的研究提供菌种来源。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 分离材料10日龄健康肉仔鸡取自河北某场，取回实验室处理动物后无菌取仔鸡肠道作为分离菌种的材料。1.1.2 菌种粪肠球菌购自中科院微生物菌种保藏中心，作为生理生化鉴定中的模式菌株，在MRS培养基上培养。1.1.3 供试主要培养基和试剂MRS培养基，KF链球菌琼脂，牛肉膏蛋白胨培养基，LB培养基等；SDS、CTAB、Tris碱等细菌DNA提取试剂均为进口试剂，粪肠球菌16S rDNA PCR扩展引物F：（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和R：（5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′）由生物工程（上海）有限公司合成。TaqDNA聚合酶、dNTP购自生物工程（上海）有限公司，其它试剂均为国产分析纯试剂。1.1.4 试验仪器JA2003型电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），HZC-250型恒温振荡培养箱（江苏省太仓市实验设备厂），LDZH-200KBS型立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），T-42K型高速冷冻离心机（德国KONTRON公司），MG48+型PCR仪（杭州朗基科学仪器有限公司），GelDoc-It 200型自动凝胶图像分析系统（Ultra-VioletProductsLtd公司），PB-10型数字酸度计（德国赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）。1.2 方法1.2.1 粪肠球菌的分离纯化采集健康10日龄肉仔鸡肠道内容物，用灭菌的载玻片刮取黏液，用灭菌生理盐水稀释到10-4，取100μL涂布于链球菌选择性培养基（KF）平板上，37℃厌氧培养24~48h后，挑取菌落呈红色，表面光滑凸起，边缘整齐，1mm左右大小的菌落，转接于MRS斜面。对获得的疑似菌落进行革兰氏染色和过氧化氢酶试验进行筛选，获得G+，呈圆形或卵圆形，单个、成对或短链状排列的球菌且过氧化氢酶试验阴性的菌株，进行纯化后，用20%甘油-20℃冰箱保存备用[7-8]。1.2.2 生理生化鉴定参照东秀珠的《常见细菌系统鉴定手册》[9]和第八版《伯杰系统鉴定手册》[10]中的粪肠球菌的生理生化鉴定试验要求进行鉴定。1.2.3 16S rDNA分子鉴定对通过生理生化初步筛选出的粪肠球菌基因组DNA提取参照姜云等[11]的方法，采用CTAB法提取。利用引物F和R对疑似粪肠球菌的16S rDNA基因片段进行PCR扩增，PCR扩增体系（25μL）[12]包括引物F和R各1.0μL，Taq DNA聚合酶1.5U，10×Taqbuffer2.5μL，Mg2+ (25mmoL/L)1.5μL，菌株基因组DNA50 ng。反应条件为：94℃预变性5min，94℃ 变性40s，53℃退火1min，72℃ 延伸1min30s，共30个循环，72℃温浴10min。反应结束后取3μL PCR产物在1% 琼脂糖凝胶上进行电泳检测。所得PCR产物回收纯化，送中科院微生物所进行DNA序列的测定。将所测得的序列与GenBank中的16S rDNA序列进行BLAST分析比对，检索相似的序列和系统发育相关的物种，随后用MEGA 4.0软件[13]构建系统发育树进行系统发育分析。2 结果与分析2.1 细菌的初步分离观察
通过选择培养基对鸡肠道内容物进行细菌分离，共获得9株疑似肠球菌的菌株，并将这9株菌分别编号为HEW-A105、HEW-A106、HEW-A107、……、HEW-A112和HEW-A113。以上9株细菌在KF链球菌琼脂培养基的形态均为红色菌落，革兰氏染色均呈单个、成双或短链排列的卵圆形革兰阳性球菌，过氧化酶试验均为阴性。图1为HEW-A107的单菌落形态和显微形态图。file:///C:/Users/ADMINI~1/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.jpg图1 HEW-A107菌落形态及显微形态Fig.1 HEW-A107 colony morphology andmicroscopic morphology注：A为HEW-A107在MRS培养基上生长37h的单菌落形态，B为其革兰氏染色形态2.2 生理生化鉴定结果分离获得的9株细菌生理生化鉴定结果如表1所示，9株菌均在10℃和45℃下生长，均能耐6.5%氯化钠；HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A1130.04%亚碲酸钾反应阳性，HEW-A106和HEW-A112精氨酸双水解酶为阴性；其它反应如表1所示，通过与粪肠球菌模式菌株比较可初步鉴定HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113为粪肠球菌。表1 分离菌的主要生理生化特征Tab.1Physiology and biochemistry characteristics of isolates鉴定项目粪肠球菌A105A106A107A108A109A110A111A112A113&&革兰氏染色&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&接触酶&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&氧化酶&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&10℃生长&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&45℃生长&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&耐6.5%NaCl&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&0.04%亚碲酸钾&&&&+&&&&-&&&&-&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&-&&&&-&&&&+&&&&精氨酸双水解酶&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&葡萄糖&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&阿拉伯糖&&&&-&&&&-&&&&+&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&乳糖&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&麦芽糖&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&蔗糖&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&山梨糖&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&-&&&&+&&&&+&&&&鼠李糖&&&&-&&&&-&&&&+&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&+&&&&-&&&&棉籽糖&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&木糖&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&-&&&&甘露醇&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&&&+&&山梨醇+-++-+++++2.3 16S rDNA分子鉴定结果通过CTAB法提取获得菌株HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113的基因组DNA，然后利用引物F和R对HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113的16S rDNA进行PCR扩增，结果表明利用引物F和R能够PCR扩增获得菌株HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113的16S rDNA片段，片段大小在1500bp左右（图2示），将16S rDNA PCR产物测序获得菌株HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113的16S rDNA序列，其长度分别为1445bp、1475bp、1427bp、1491bp。将测序获得的序列用MEGA4.0构建系统进化树（图3示）进行序列比较分析，可以看出菌株HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113均与粪肠球菌（E. faecalis）聚于同一分支中，其同源性分别达到99%。通过菌株HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113的形态特征、生理生化反应、16SrDNA特征，确定菌株HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113为粪肠球菌（E. faecalis）。file:///C:/Users/ADMINI~1/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image004.jpg& && && && && && && &&&注：M为DL2000ladder ，1~5为16S rDNAgene（1为粪肠球菌模式菌株；2为HEW-A107；3为HEW-A109；4为HEW-A110，5为HEW-A113）图2 16S rDNA基因PCR扩增电泳结果Fig.2 PCR amplificationof 16S rDNA gene electrophoresis resultsfile:///C:/Users/ADMINI~1/AppData/Local/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image006.jpg图3 粪肠球菌和其它参考株16S rDNA序列的系统进化树Fig.3 System reference strains of Enterococcus faecalis and otherevolutionary tree of 16S rDNA sequences3 讨论肠道菌群是动物体内一个丰富并且复杂的微生态系统，可将其视为动物体正常的器官，这些微生物直接或间接参与宿主的生理代谢活动，是宿主机体不可缺少的重要组成部分。内源性肠球菌为动物体内微生态系统的一部分，其主要寄生于回肠和结肠部，有些菌能产生一些活性物质参与宿主的物质代谢过程。粪肠球菌（E.faecalis）作为肠道菌群，具有一定的生物屏障作用。本研究通过选择培养基从鸡肠道内容物中分离获得了9株疑似肠球菌的菌株，通过生理生化和16S rDNA分子鉴定发现，其中4株细菌为粪肠球菌，即HEW-A107、HEW-A109、HEW-A110和HEW-A113。本研究获得的内源性的粪肠球菌通过筛选加工，重新应用于动物，对动物无害且安全，并且动物也能较快速的利用这些菌株为自身服务。但微生物在体内寄生与繁殖是一个很复杂的生态学问题，而活菌制剂在一定范围内能够发挥生物活性，或着参与宿主代谢活动，并产生一定的生理作用，所以具有防病、治病、维持生态平衡的作用。目前，国内对粪肠球菌的研究也已经广泛开展，也取得了一定的成绩，粪肠球菌也作为饲料添加剂中微生态制剂菌种的一种得到一定的应用。粪肠球菌在动物肠道内能够形成生物薄膜并可以附着于动物肠道粘膜上，发育、生长并繁殖。同时将部分蛋白质分解成酰胺和，将大部分碳水化合物的无氮浸出物转化为L型乳酸，并将钙质合成L-乳酸钙，从而促进养殖动物对钙质的吸收。另外，粪肠球菌还能将饲料中的纤维变软，可以提高饲料的转化率[14]。粪肠球菌还能产生多种抗菌物质，这些抗菌物质对沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等致病菌具有良好的抑制作用[15]。本研究只对分离获得的菌种进行鉴定，其他益生性能作为下一步研究，下一步我们将对得到的4株粪肠球菌的益生性能进行研究；另外其在动物微生态制剂中的应用效果如何，还需进一步做动物饲养试验才能确定。参考文献[1]& &&&曹乐民,周云帆,韩二芳.微生态制剂的应用研究进展[J].河南农业,-48.[2]& &&&窦茂鑫,吴涛.饲用微生态制剂的发展现状与应用性研究[J].饲料研究,-17.[3]& &&&王亚宾,陈丽颖,胡慧,等.猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立[J].中国兽医学报, ):.[4]& &&&Beatriz Rojo-Bezares, Yolanda Sáenz, Patricia Poeta, et al. 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[15]&&MartaHugas, M Garriga, M T Aymerich. Functionalty of enterococci in meat products[J]. International Journalof Food Microbiology, -3):223-233.
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屎肠球菌及其在仔猪生产上的研究现状92
《儡料工业》?２００８年第２９巷第２２期；专题论述；屎肠球菌及其在仔猪生产上的研究现状；容庭何前陈庄王刚；摘要屎肠球茵不仅具有优良的生物学特性，还可以调节；方向；关键词肠球茵；屎肠球菌；生物学特性；仔猪生产中图；最初；陈平洁等（２００１）从４月龄健康猪粪中成功分离出；液达３ｈ；群，归属于链球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；ｌ屎肠球菌的生物学特性；１．１；
《儡料工业》?２００８年第２９巷第２２期专题论述屎肠球菌及其在仔猪生产上的研究现状容庭何前陈庄王刚摘要屎肠球茵不仅具有优良的生物学特性，还可以调节机体免疫功能，提高采食量及饲料转化率，降低腹泻率，改善肠道内环境，促进动物健康，是畜牧生产及食品工业首选使用的益生菌菌种之一。文章主要综述了屎肠球菌的生物学特性及其在仔猪生产上的应用、目前存在的问题及今后的发展方向。关键词肠球茵；屎肠球菌；生物学特性；仔猪生产中图分类号Ｓ８１６．３最初。肠球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）被划分为ＬａｎｃｅｆｉｅｌｄＤ陈平洁等（２００１）从４月龄健康猪粪中成功分离出两株屎肠球菌（ｓｔｌ、ＳＦ２），在ｐＨ值３．０条件下可存活；李梅等（２００７）从４０日龄健康仔猪空肠粘液中分离到的两株屎肠球菌（Ｅｆｌ、Ｅｆ２），在ｐＨ值４．Ｏ显阳性，但在ｐＨ值３．５显弱阳性：沈中艳等（２００７）从健康仔猪新鲜粪便中筛选分离到的屎肠球菌能耐受ＤＨ值２．５合成胃液达３ｈ。且在ｐＨ值１．５合成胃液培养３０ｍｉｎ后有群，归属于链球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）。随着核酸杂交技术、细胞脂肪酸分析和细胞壁结构分析技术应用于细菌分类。１９８４年Ｓｃｈｌｅｉｆｅｒ和Ｋｉｌｐｐｅｒ首次提出肠球菌不同于链球菌，肠球菌应从链球菌属中脱离开来，形成一个新的肠球菌菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｕｓ）。到目前为止，肠球菌属内已有３２个种。肠球菌来源广泛，通常从食品（如奶、奶酪产品）、植物、水、土壤及粪便中分离得到。屎肠球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍ）属于肠球菌中的一种．是兼性厌氧的乳酸菌．它不仅是人和动物肠道中常见的正常菌种，还用于改善食品、饲料的质量。屎肠球菌相对于严格厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌、乳杆菌来说．它是便于生产和使用的首选菌种。１９８９年美国ＦＤＡ就公布它为可直接用于动物的菌种之一。大多数实验证明。由屎肠球菌组成的益生素可提高幼年畜禽的体增重．改善饲料报酬。减少腹泻率，降低死亡率。另外。屎肠球菌代谢产生有机酸、双乙酰、过氧化氢、细菌素等物质，这些物质具有抑制病原菌和腐败菌、提高免疫力、改善畜产品品质等生理功效。因此．屎肠球菌在畜牧生产及食品工业中有着广泛的应用发展前景。ｌ屎肠球菌的生物学特性１．１存活，活菌数降低２―５个数量级，但培养达３ｈ后，无存活。ＮｅｌｓｏｎＰ６ｒｅｚＧｕｅｒｒａ等（２００７）试验中所用的屎肠球菌（ＣＥＣＴ４１０）在模拟胃液ｐＨ值２．０中能存活。造成屎肠球菌耐胃ｐＨ值能力的差异，原因可能是动物来源或动物的品种与年龄、分离部位、筛选方法等不同。ＫＯＳ等研究表明，益生菌通过胃肠的过程中．食糜作为一种保护剂使得益生菌受到伤害的程度减小．一旦这些菌在穿越胃和十二指肠的过程中能存活下来，随同食糜进入回肠和盲肠的细菌会急剧增加。可见，屎肠球菌通过胃存活的可能性较大。１．２耐胆盐哺乳仔猪胆囊内胆汁分泌量很少．胆汁量在出生后３周内缓慢增加．小肠内胆盐浓度在０．０３％。０．３０％范围内波动。大量试验表明，筛选得到的屎肠球菌可耐受１．０％的胆盐浓度，甚至高达３．０％和５％一６．５％ＮａＣＩ高盐。对胆汁的敏感性是筛选益生素菌株的重要指标。美国Ａｌｔｅｃｈ生物技术中心规定用于益生素的细菌对胆盐应有７０％以上的抵抗力。可见，屎肠球菌具有良好的耐胆盐性能及对胃肠道逆性环境的耐受性，具备了在小肠定植的基本条件。１．３具有良好的粘附力耐胃酸新生仔猪胃内的ｐＨ值在５－６之间，出生后由于高产酸细菌定植而逐渐下降，数小时后ｐＨ值可降到４，然后缓慢下降，在２月龄前ｐＨ值仍保持在３左右。容庭，华南农业大学动物科学学院，５１０６４２，广州。何前。单位及通讯地址同第一作者。陈庄ｆ通讯作者）、王刚，广东省农业科学院畜牧研究所。收稿日期：２００８－０９－０１Ｓａｙａｇｅ等（１９７７）将栖居于哺乳动物消化道的微生物划分为过路菌群ｆＡｉｌｏｃｈｔｈｏｎｏｕｓｔｉｏｎ）和固定菌群（Ａｕｔｏｃｈｔｈｏｎｏｕｓｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｏｐｕｌａ－ｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）ｏ固定菌群被认为粘附在消化道粘膜上皮细胞上或上．妻璺堡望皮细胞分泌的粘液层中，在动物消化道发挥重要的功能性作用，影响宿主的营养、免疫、生理机能、药效等。有研究表明．Ｃａｃｏ一２细胞系通常作为研究在肠上皮细胞上粘附的体外模型，如．Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＬＡｌ（Ｂｅｒｎｅｔ等，１９９４；Ｂｒａｓｓａｒｔ等，１９９４）、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓＧＧ（Ｅｌｏ等，１９９１；Ｃｏｃｏｎｎｉｅｒ等，１９９２；Ｌｅｈｔｏ等，１９９７）及Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓＬＣ一查鏖箜！星堑盎笪丛苤查堡堡垒生占丝堑窒墨鉴加剂的影响时发现，嗜酸乳杆菌不能耐受制粒，６０℃即检不到活菌。酵母不能耐受８０℃的制粒温度。李梅等（２００７）从健康仔猪新鲜粪便中筛选分离到的屎肠球菌能耐受４５℃，５０℃时几乎不存活，这与沈中艳等（２００７）的结果一样。但有试验表明，屎肠球菌在６０℃时仍可检到活菌。２屎肠球菌在仔猪生产上的应用研究断奶是仔猪生长中一个关键时期。由于食物状态、营养成分及生理状态的改变，必然引起肠道菌群大调整，以建立新的微生态平衡，此时易发生菌群失调、采食量下降及生长受阻（Ｏｄｌｅ等，１９９６）、引起仔猪腹泻（Ｆｒｙｄｅｎｄａｈｌ，２００２）、有害细菌过度生长、肠绒毛萎缩（Ｈａｍｐｓｏｎ，１９８６；Ｈａｍｐｓｏｎ等，１９８６）等。因此，仔猪肠道中正常菌群的平衡对仔猪的健康成长有重要作用。２．１对断奶仔猪体重和采食量的影响英国利兹大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ７０５（Ｌｅｈｔｏ等，１９９７）；Ｔｕｏｍｏｌａ等（１９９８）１ｊ２该模型研究了１２种不同乳杆菌的粘附情况，结果发现干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌鼠李糖亚种（ＬＣ一７０５）和乳杆菌ＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）的粘附能力最强。而屎肠球菌的粘附力仅次干酪乳杆菌。乳酸菌能顺利通过胃肠不利环境．在肠壁上的粘附是其定植并大量繁殖变成优势种群的前提．其在肠上皮细胞上粘附力的强弱是筛选益生菌菌株的重要标准之－－（Ｂｒａｓｓａｒｔ等。１９９４；Ｓａｌｍｉｎｅｎ等，１９９６ｂ）。１．４耐药性与抑菌作用肠球菌。尤其是屎肠球菌具有对广谱抗生素的耐药性（Ｂｒｕｎｔｏｎ，１９８４；Ｍｕｒｒａｙ，１９９０；Ｗｏｏｄｆｏｒｄ等，１９９５；Ｇｏｌｄ等，１９９６；Ｒｉｃｅ等．１９９６；Ｋｌａｒｅ等，１９９７；Ｑｕｉｎｔｉｌｉａｎｉ等，１９９９；Ｋａｋ等，２００２；Ｋｌａｒｅ等，２００２）。有试验表明，屎肠球菌（ＳＦｌ、ＳＦ２）对饲料添加剂中大多数常用抗生素都具有耐药性，但对万古霉素、四环素、亚氨硫霉素等少数几种抗生素较为敏感，这与Ｋｌａｒｅ等（１９９７）、Ｋｌｅｉｎ等（１９９７）的结果有所差异，即来源于食品的屎肠球菌对氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素和链霉素敏感。其原因可能是屎肠球菌的来源不同，其耐药性能也不同，这与屎肠球菌的ＤＮＡ指纹图有关。其耐药性能的差异性在诸多试验中得到证实Ｋｌａｒｅ等，１９９５；Ｌｅｍｃｋｅ等，１９９７；ＶａｎｄｅｎＬｅｅｄｓ）初步研究表明．在日粮中添加屎肠球菌能改善断奶后一周仔猪的生产性能，但Ｐｏｌｌｍａｎ等（１９８０）试验表明，在仔猪日粮中添加屎肠球菌（ＳＦ６８）对断奶仔猪的生产性能无影响，这与Ｂｒｏｏｍ等（２００６）结果一致：而Ｍａｅｎｇ等（１９８９）认为，在小猪日粮中一直添加屎肠球菌（ＳＦ６８）至０４个月。能增加小猪体重、采食量及提高饲料转化率。张振斌等（２００４）试验表明，肠球菌组显著提高断奶后两周仔猪的采食量，有提高仔猪日增重的趋势。这与ＶｉｏｌａＳｔｒｏｍｐｆｏｖ６ｔ等（２００６）结果相似，即添加屎肠球菌（ＥＫｌ３１对断奶仔猪的生产性能无显著影响。但有提高１４日龄仔猪体重和日增重的趋势。Ｔａｒａｓ等（２００７）也认为，添加屎肠球菌（ＮＣＩＭＢ１０４１５）对断奶仔猪的生产性能无显著影响，但使饲料转化率有所改善。而有试验表明，在仔猪日粮中添加屎肠球菌（ＣＥＣＴ４１０）显著提高断奶后２８ｄ仔猪的体重ｆＰ＜０．０５）。总之，在日粮中添加屎肠Ｂｒａａｋ等．１９９８；Ｑｕｅｄｎａｕ等，１９９９；Ａａｒｅ．ｓｔｒｕｐ等，２０００；Ｇａｍｂａｒｏｔｔｏ等，２００１；Ｅａｔｏｎ等，２００１）。除了对抗生素具有耐药性外，还对常见病原菌、强毒菌株有较强的抑制作用，这可能是屎肠球菌代谢过程中产生乳酸、乙酸、异丁酸、乙醇、２，３一丁二醇、细菌素等物质，这些物质具有抑制病原菌和腐败菌的作用。因此，这就提示了屎肠球菌用于常规饲料ｆ含抗生素）的可能性．而活菌制剂与抗生素是否可同时使用这个长期有争论的问题有可能迎刃而解。１．５耐热性球菌能否改善断奶仔猪的生产性能及提高采食量，还有待进一步探索与研究。２．２对断奶仔猪腹泻率的影响现代化集约饲养条件下，仔猪腹泻是困扰养猪业的最大问题之一。益生素在预防仔猪腹泻方面发挥了较明显的作用，在日粮中添加益生素能显著降低断奶后仔猪的腹泻率。禹慧明等（２０００１试验表明，菌生健（含肠球菌的活菌制剂）用于０～２８日龄仔猪，可使腹泻次数减少３５．６％。张振斌等（２００４）试验表明，在断奶后两周内，肠球菌制剂有降低仔猪腹泻率的趋势。Ｆｏｕｌｑｕｉ６一Ｍｏｒｅｎｏ等（２００６）报道．肠球菌（Ｅ』ａｅｃｉｕｍＳＦ６８）用作益生优良的乳酸菌不仅能抵抗动物胃肠道不利的环境．而且能耐受饲料制粒过程中的高温，但后者往往是许多益生菌无法达到的，这就阻碍了益生菌在颗粒饲料中的广泛利用。Ｒｉｓｌｅｙ在研究饲料制粒对微生物添奎鏖釜；垦堕垡堕垦甚垄堡塑垒生占盟堑窒墨些素防治抗生素相关性腹泻，在临床上认为是有效的。Ｔａｒａｓ等（２００７）ｉ式验也认为，添加屎肠球菌（ＮＣＩＭＢ１０４ｌ习组显著降低断奶后仔猪的腹泻率（Ｐ＜０．０５），这与他之前所报道的结果相同（Ｔａｒａｓ等，２００５、２００６）。２．３童里笙壅便中大肠杆菌的活菌数量（Ｐ＜０．０５）。这与ＶｉｏｌａＳｔｒｏｍｐ．ｆｏｖ丘等（２００６）结果一致。说明在１３粮中添加屎肠球菌能有效促进有益菌的增殖，减少有害细菌的数量。从而改善肠道内环境。也有报道表明，添加屎肠球菌（ＳＦ６８）对断奶后６ｄ仔猪小肠内厌氧菌或乳酸菌无影响，这与Ｓｃｈａｒｅｋ等（２００５）结果相似。大量研究表明。采食水平高低与仔猪小肠粘膜绒毛高度及隐窝深度有关。高采食水平可促进小肠粘膜的发育（Ｐｌｕｓｋｅ等。１９９６；ＶａｎＢｅｅｒｓ对仔猪免疫功能及部分血液生化指标的影响肠道菌群不仅影响散布于消化道淋巴组织（ＧＡ∽中免疫细胞的机能，还可以影响全身的免疫系统（Ｔｒａｖｎｉｃｅｋ等，１９８９）。还有一些研究表明，不同菌群效应可激活免疫系统。另外，肠道菌群对营养抗原类物质的免疫耐受具有诱导和维持作用。益生菌在改善动物健康和防御病原体方面发挥了重要的作用，如双歧杆菌和其它乳酸菌可以增加肠道的ＩｇＡ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ等，１９９８；Ｖｉｔｉｎｉ等，２０００）；干酪乳杆菌具有免疫佐剂活性（Ｐｅｒｄｉｇｏｎ等。１９９１）及植物乳杆菌促进感染大肠杆菌的小鼠抗体的产生ｆＨｅｒｉａｓ等，１９９９）。有试验表明，在断奶后ｌ周内．添加屎肠球菌Ｓｃｈｒｅｕｒｓ等，１９９８；ＭｃＣｒａｃｋｅｎ等。１９９９）。张振斌等（２００４）试验发现，添加肠球菌制剂能改善断奶后两周末仔猪小肠粘膜绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度比值，且断奶后两周内仔猪采食量显著增加：因此，外源添加屎肠球菌通过提高仔猪采食量促进小肠粘膜的发育，从而增进对营养物质的消化吸收功能。３存在的问题及今后的发展方向目前．对屎肠球菌或者由其组成的微生态制剂的作用机理不十分清楚。大多数研究还停留在生物学特性方面及使用效果水平上。值得注意的是，在分离得到的屎肠球菌菌株中，至今未发现万古霉素耐药株，还有人们所担心屎肠球菌质粒编码因子是否能把耐药因子传给正常菌群或病原菌。屎肠球菌有非致病菌和致病菌之分，其来源也广泛。因此．在分离上不仅保证其来源于健康的动物或未受污染物质，还要经过专门的严格鉴定。否则，将危及人类和动物的健康及食品安全。在动物生产中，直接饮水饲喂屎肠球菌或者采用拌料方式饲养动物，其加工工艺手段落后、单一，很难保证在饮水或与饲料混合的过程中不被其它有害菌污染，无法保证其安全稳定性；在颗粒型饲料中，屎肠球菌不能耐受制粒过程中的高温蒸汽挤压处理：虽然屎肠球菌在生物学特性方面具有诸多优点。但在生产上单独应用效果不显著。大多数试验表明，由屎肠球菌与其它益生菌组成的益生素或微生态制剂在动物生产上的应用效果均优于单一菌或单一菌制剂。因此．一方面利用生物技术手段开发出高生产性能的屎肠球菌菌种。来提高屎肠球菌或其微生态制剂的饲喂效果：另一方面研制复合菌剂，如与寡聚糖、中草药等联用．都是今后的发展趋势。（ＳＦ６８ｆｉ］ｉ仔猪的ＩｇＧ水平略高于对照组，但在断奶后４周小猪总的ＩｇＧ水平极显著低于对照组ｆＰ＜０．０１）：对Ｔ淋巴细胞中的ＣＤ４＋与ＣＤｓ＋无影响，而在仔猪空肠上皮的Ｔ淋巴细胞（ＣＤｓ＋）水平显著下降，这与Ｖｉｔｉｎｉ等（２０００）结果一致。ＶｉｏｌａＳｔｒｏｍｐｆｏｖ６等（２００６）ｉ式验表明．添加屎肠球菌（ＥＫｌ３）分别在７和１４ｄ后极显著或显著提高新生仔猪血清总蛋白浓度（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０５）；能降低血清胆固醇（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０５）：能提高血红蛋白、血细胞比值和白细胞数量（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０５）：能提高红细胞数量（Ｐ＜０．０１）、粒性白细胞的吞噬活性指数（Ｐ＜Ｏ．０１）、血钙水平（Ｐ＜Ｏ．０１）及血清谷胱甘肽过氧化物酶浓度（Ｐ＜０．０５）。也有报道表明，在日粮中添加屎肠球菌（ＳＦ６８）对断奶后６ｄ仔猪的血清ＩｇＧ及肠内ＩｇＧ无影响，但有降低断奶后２０ｄ仔猪血清ＩｇＧ浓度的趋势（Ｐ＜Ｏ．０１）。细胞因子是宿主全身免疫系统的重要调节者。由于散布在消化道淋巴组织（ＧＡＬＴ）ｋ抗原ｆ益生素）与淋巴样细胞的相互作用，促使细胞因子的释放，这些细胞因子能调节机体全身的免疫系统。因此，添加屎肠球菌（ｓｔ６８）有降低仔猪血清ｌｇＧ的趋势，这就提示了屎肠球菌可作为一种免疫调节剂。２．４对肠道菌群及肠粘膜结构的影响禹慧明等（２０００）ｉ式验发现，饲喂含肠球菌的益生健的仔猪肠道中双歧杆菌和类杆菌的数量比对照组明显增加，在盲肠达到显著水平（Ｐ＜Ｏ．０５），但肠球菌的数量却无显著增加。ＮｅｌｓｏｎＰ６ｒｅｚＧｕｅｒｒａ等（２００７）ｉ，试验（参考文献３２篇，刊略，需者可函索）（编辑：沈桂宇，ｇｕｉｙｕｓｈ＠１２６．ｃｏｒｎ）发现．添加屎肠球菌（ＣＥＣＴ４１０）显著降低断奶仔猪粪屎肠球菌及其在仔猪生产上的研究现状作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：容庭， 何前， 陈庄， 王刚， Rong Ting， He Qian， Chen Zhuang， WANG Gang容庭,何前,Rong Ting,He Qian(华南农业大学动物科学学院,510642,广州)， 陈庄,王刚,Chen Zhuang,WANG Gang(广东省农业科学院畜牧研究所)饲料工业FEED INDUSTRY) 本文链接：http://d..cn/Periodical_silgy.aspx包含各类专业文献、行业资料、应用写作文书、文学作品欣赏、外语学习资料、专业论文、生活休闲娱乐、高等教育、屎肠球菌及其在仔猪生产上的研究现状92等内容。
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