湿热灭菌
湿热灭菌法比干热灭菌法更有效。湿热灭菌是利用热蒸气灭菌。在相同温度下，湿热的效力比干热灭菌好的原因是：①热蒸气对细胞成分的破坏作用更强。水&分子的存在有助于破坏维护蛋白质三维结构的氢键和其它相
湿热灭菌法比干热灭菌法更有效。湿热灭菌是利用热蒸气灭菌。在相同温度下，湿热的效力比干热灭菌好的原因是：①热蒸气对细胞成分的破坏作用更强。水 分子的存在有助于破坏维护蛋白质三维结构的氢键和其它相互作用弱键，更易使蛋白质变性。蛋白质含水量与其凝固温度成反比（表示）；②热蒸汽热空气穿透力 强，能更加有效地杀灭微生物；③蒸汽存在潜热，当气体转变为液体时可放出大量，故可迅速提高灭菌物体温度。
多数细菌和真菌的营养细胞在60oC左右处理15min后即可杀后，酵母菌和真菌的孢子要耐热些，要用80oC以上的温度处理才能杀死，而细菌的芽胞更耐热，一般要在120oC下处理15min才能杀死。湿热灭菌常用的方法有常压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌。
常压蒸汽灭菌：
（1）常压蒸汽灭菌方法
&常压蒸汽灭菌是湿热灭菌的方法之一，在不能密闭的容器里产生蒸汽进行灭菌。在不具备高压蒸汽灭菌的情况下，常压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法。此外，不宜用高压蒸煮的物质，如糖液、牛奶、明胶等，可采用常压蒸汽灭菌。这种灭菌方法所用的灭菌器有阿诺氏（Aruokd）灭菌器或特制的蒸锅，也可用普通的蒸笼。由于常压蒸汽的温度不超过100oC，压力为常压，大多数微物的营养细胞能被杀死，但芽胞细菌却不能在短时间内死亡，因此必须采取间歇灭菌或持续灭菌的方法，以杀死芽胞细菌，达到完全灭菌。
蛋白质含水量与其凝固温度的关系
蛋白质含水量/%&&&&&&&&&&&&&&&&&& 蛋白质凝固点/oC
50&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 56
25&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 74～80
18&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 80～90
6&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 145
①巴氏消毒：是用于牛奶、啤酒、果酒和酱油等不能进行高温灭菌的液体的一种消毒方法，其主要目的是杀死其中的无芽胞病原菌，如牛奶中的结核分枝杆菌或沙门氏菌，而又不影响其特有风味。巴氏消毒法是一种低温消毒法，具体的处理温度和时间各有不同，一般在60～85oC下处理15～30min。具体的方法可分两类，第一类是较老式的，称为低温维持法，例如在63oC下保持30min可进行牛奶消毒；另一类是较新式的，称为高温快速，用于牛奶消毒时只要在85oC下保持5min即可。但是巴氏消毒法不能杀灭引起Q热的病原体&&伯氏考克斯氏体（一种立克次氏体）。
②间歇灭菌法：又称分段灭菌法。适用于不耐热培养基的灭菌。方法是：将待灭菌的培养基在100oC下蒸煮30～60min，以杀死其中所有微生物的营养细胞，然后置室温或20～30oC下保温过夜，诱导残留的芽胞萌发，第二天再以同法蒸煮和保温过夜，如此连续重复3天，即可在较低温度下达到彻底灭菌的效果。例如，培养硫细菌含硫培养基就应用间歇灭菌法灭菌，因为其中的元素硫经常规的高压灭菌（121oC）后会发生熔化，而在100oC的温度下则呈结晶状。
③蒸汽持续灭菌法：微生物制品土法生产或食用菌制备时常用这种方法。在容量较大的蒸锅中进行。从蒸汽大量产生开始，继续加大火力保持充足蒸汽，待锅内温度达到100oC时，持续加热3～6h，杀死绝大部分芽胞和全部营养体，达到灭菌目的。
以上三种方法通过是在无高压蒸汽灭菌条件的地方（如农村）使用。
（2）灭菌过程中注意事项
①使用间歇法或持续法灭菌时必须在灭菌物里外都达到100oC后，开始计算灭菌时间，此时锅顶上应有大量蒸汽冒出。
②为利于蒸汽穿透灭菌物，锅内或蒸笼上堆放物品不宜过满过挤，应留有空隙。固体曲料大量灭菌时，每袋以1.5～2.0kg为宜，料袋在锅内用蓖子分层隔开，不能堆压在一起。
③火大水足才能保证汽足，蒸锅里应先把水加足。一次持续灭菌时，如锅内盛水量不能维持到底，应在蒸锅侧面安装加水口，以便在蒸煮过程中添水。添水应用开水，以防骤然降温。
④间歇法灭菌时应在每次加热后，迅速降温，然后在室温放置24h，再第二次加热。如果降温慢，往往使未杀死的杂菌大量滋长，反而导致灭菌物变质，特别是固体曲料包装过大时，靠近中心部分更易发生这种情况。
⑤从使用效果看，分装、三角瓶或其它容器的培养基，因其体积小，透热快以用间歇法为佳。固体曲料，因其包装较大，透热慢，用间歇法容易滋生杂菌变质或者水分蒸发过多，曲料变得不新鲜，影响培养效果，因此使用一次持续灭菌法较好。
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌法是微生物学研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌方法。
⑴ 灭菌原理
高压蒸汽灭菌是在密闭的高压蒸汽灭菌器（锅）中进行的，其原理是：将待灭菌的物体放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内。把锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱尽后将锅密闭。再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上升，从而温度也随之上升到100oC以上。为达到良好的灭菌效果，一般要求温度应达到121oC（压力为0.1MPa），时间维持15～30min。也可采用在较低的温度（115oC，即0.075MPa）下维持35min的方法。★为什么比干热灭菌的工艺指标低？此法适合于一切微生物学实验室、医疗保健机构或发酵工厂中对培养基及多种器材、物品的灭菌。蒸汽压力与温度的关系如表所示。
蒸汽压力与温度的类系
蒸汽压力（表压）
在使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌时，蒸汽灭菌器内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压。所以当水蒸汽中含有空气中，压 力表所表示的压力是水蒸汽压力和部分空气压力和总和，不是水蒸气的实际压力，它所相当的温度与高压灭菌锅内的温度是不一致的。这是因为在同一压力下的实际 温度，含空气的蒸汽低于饱和蒸汽。见表所示。
由表看出：如不将灭菌锅中的空气排除干净，即达不到灭菌所需的实际温度。因此，必须将灭菌器内的冷空气完全排除，才能达到完全灭菌的目的。
在空气完全排除的情况下，一般培养基只需在0.1Mpa下灭菌30min即可。但对某些物体较大或蒸汽不易穿透的灭菌物品，如固体曲料、土壤和草炭等，则应适当延长灭菌时间，或蒸气压力升到0.15Mpa保持1～2h。
⑵ 灭菌设备
高压蒸汽灭菌的主要设备是高压蒸汽灭菌锅，有立式、卧式及手提式(图&&&& )等不同类型。实验室中以手提式最为常用。卧式灭菌锅常用于大批量物品的灭菌，不同类型的灭菌锅，虽大小外形各异。但其主要结构基本相同。
高压蒸汽灭菌器的基本构造如下：
空气排除程度与温度的关系
压力表读数
灭　菌　器　内　温　度/ oC
未排除空气
排除1/3空气
排除1/2空气
排除2/3空气
完全排除空气
①外锅：或称&套层&，供贮存蒸汽用，连有用电加热的蒸汽发生器，并有水位玻管以标志盛水量。外锅的外侧一般包有石棉或玻璃棉绝缘层以防止散热。如直接使用由锅炉接入的高压蒸汽，则外锅在使用时充满蒸汽，作为内锅保温之用。
②内锅：或称灭菌室，是放置灭菌物的空间，可配制铁蓖架以分放灭菌物品。
③压力表：内外锅各装一只，老式的压力表上标明三种单位：公斤压力单位（kg/cm2），英制压力单位（Ib/in2）和温度单位（oC），便于灭菌时参照。现在的压力表用MPa表示。
④：可分为两种，一种是直接插入式的水银，装在密闭的铜管内，焊插在内锅中，另一种是感应式仪表，其感应部分安装在内锅的排气管内，仪表安装于锅外顶部，便于观察。
⑤排气阀：一般外锅、内锅各一个，用于排除空气。新型的灭菌器多在排气阀外装有汽液分离器（或称疏水阀），内有由膨胀盒控制的活塞。利用空气、冷凝水与蒸汽之间的温差控制开关，在灭菌过程中，可不断地自动排出空气和冷凝水。
⑥安全阀：或称保险阀，利可调弹簧控制活塞，超过额定压力即自动放气减压。通常调在额定压力之下，略高于使用压力。安全阀只供超压时安全报警之用，不可在保温时用作自动减压装署。
⑦热源：除直接引入锅炉蒸汽灭菌外，都具有加热装置。近年来的产品以电热为主，即底部装有调控电热管，使用比较方便。有些产品无电热装置，则附有打气煤油炉等。手提式灭菌器也可用煤炉作为热源。
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&& 物理因素对细菌的影响
物理因素对细菌的影响
各种对都能产生一定的影响作用。
高温对细菌有明显的致死作用。热力灭菌主要是利用高温使菌体变性或凝固，酶失去活性，而使细菌死亡。但是，更细微的变化已发生于细菌凝固之前。有人认为单螺旋的断裂可能是主要的致死因素。细菌、等结构是由氢键连接的，而氢键是较弱的化学键，当菌体受热时，氢键遭到破坏，蛋白质、核酸、酶等结构也随之被破坏，失去其生物学活性，与细菌致死有关。此外，高温亦可导致功能损伤而使子物质以及降解的漏出。干热的致死作用与不尽相同，一般属于变性、受损和电解质水平增高的效应。
热力灭菌时最可靠而普遍应用的，包括湿热和干热灭菌法。
1．湿热灭菌法
在同样的温度下，的效果比干热好，其原因有：①蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量愈大，发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分，因较大同一温度的干热空气中易于凝固。②温热灭菌过程中蒸气放出大量潜热，加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所要温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。③湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好。
湿热灭菌法包括有：
（1）煮沸法：煮沸100℃，5分钟，能杀死一般细菌的。许多需经煮潮5～6小时才死亡。水中加入2%，可提高其沸点达105℃。既可促进芽胞的杀灭，又能防止金属器皿生锈。煮沸法可用于饮水和一般器械（刀剪、等）的。
（2）流通蒸汽灭菌法：利用100℃左右的水蒸汽进行消毒，一般采用流通蒸汽（其原理相当于我国的蒸笼），加热15到39分钟，可杀死。消毒物品的包装不宜过大、过紧以利于蒸汽穿透。
（3）：利用反复多次的流通蒸汽，以达到灭菌的目的。一般用流通蒸汽灭菌器，100℃加热15～30分钟，可杀死其中的繁殖体；但芽胞尚有残存。取出后放37℃孵箱过夜，使芽胞发育成繁殖体，次日再蒸一次，如此连续三次以上。本法适用于不耐高温的营养物（如）的灭菌。
（4）法（Pasteurization）：利用热力杀死液体中的或一般的杂菌，同时不致严重损害其质量的消耗方法。由巴斯德创用以消毒类，故名。加温61.1～62.8℃半小时，或71.7℃15～30秒钟。常用于消毒牛奶和酒类等。
（5）法：压力蒸汽灭菌是在专门的压力蒸汽灭菌器中进行的，是热力灭菌中使用最普遍、效果最可靠的一种方法。其优点是穿透力强，灭菌效果可靠，能杀灭所有。
目前使用的器可分为两类：下排气式压力灭菌器和预压力灭菌器。适用于耐高温、耐水物品的灭菌。
2．干热灭菌法
干热灭菌比湿热灭菌需要更高的温度与较长的时间。
（1）干烤：利用干烤箱，加热160～180℃2小时，可杀死一切微生物，包括芽胞菌。主要用于玻璃器皿、瓷器等的灭菌。
（2）烧灼和焚烧：烧灼是直接用火焰杀死微生物，适用于微生物实验室的针等不怕热的金属器材的灭菌。焚烧是彻底的消毒方法，但只限于处理废弃的污染物品，如无用的衣物、纸张、垃圾等。焚烧应在专用的焚烧炉内进行。
(3) ：红外线是一种0.77～1000微米波长的,有较好的热效应,尤以1～10微米波长的热效应最强。亦被认为一种干热灭菌。红外线由红外线灯泡产生,不需要经空气，所以加热速度快，但热效应只能在照射到的表面产生，因此不能使一个物体的前后左右均匀加热。红外线的与干热相似，利用红外线烤箱灭菌的所需温度和时间亦同于干烤。多用于医疗器械的灭菌。
人受红外线照射较长会感觉眼睛及头疼；长期照射会造成眼伤。因此，工作人至少应戴能防害的防护镜。
（4）：微波是一种波长为1毫米到1米左右的电磁波，频率较高，可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。微波能使介质内杂乱无章的极性在微波场的作用下，按波的频率往返运动，互相冲撞和磨擦而产生热，介质的温度可随之升高，因而在较低的温度下能起到消毒作用。一般认为其杀菌机理除热效应以外，还有电磁效应，场致力效应等的作用。消毒中常用的微波有2450MHZ与915MHZ两种。微波照射多用于食品加工。在中可用于检验室用品、非金属器械、病室的食品食具、药杯及其它用品的消毒。
微波长期照射可引起眼睛的晶状混浊、和功能紊乱等全身性反应，因此必须关好门后才开始操作。
1．日光与紫与外
日光是有效的天然杀菌法，对大多数微生物均有损害作用，直射杀菌效果尤佳，其主要的作用因素为，此外，热与氧气起辅助作用。但光线效应受很多因素的影响，如烟尘笼罩的空气、玻璃及有机物等都能减弱日光的杀菌力。
紫外线是一种低能量的电磁辐射，波长范围为240～280nm,最适的波长为260nm，这与DNA吸收光谱范围相一致。其杀菌原理是紫外线易被吸收，使DNA的同一条上相邻的形成，从而干拢DNA的复制，导致细菌死亡或变异。紫外线的穿透能力弱，不能通过普通玻璃、尘埃，只能用于消毒物体表面及空气、、实验室及，亦可用于不耐热物品表面消毒。杀菌波长的紫外线对人体、眼睛均有损伤作用，使用时应注意防护。
包括高速电子、和r线等。具有较高的能量与穿透力，可在常温下对不耐热的物品灭菌，故又称“冷灭菌”。其机理在于产生游离基，破坏DNA。可用于消毒不耐热的塑料注射器和等；亦能用于食品消毒而不破坏其营养成份。
将液体或空气通过含有微细小孔的滤器，只允许小于孔径的物体如液体和空气通过，大于孔径的的物体不能通过。主要用于一些不耐热的血清、、、药液、空气等除菌。一般不能除去、和细菌的L型。滤器的种类很多常用的有：
滤膜滤器（Membrane filter）由硝基纤维素制成薄膜，装于滤器上，其孔径大小不一，常用于除菌的为0.22um。硝基纤维素的优点是本身不带电荷，故当液体滤过后，其中有效成分丧失较少。
蔡氏滤器（Seitz）是用金属制成，中间夹石棉滤板，按石棉K、EK、EK-S三种，常用EK号除菌。
玻璃滤器是用玻璃细砂加热压成小碟，嵌于玻璃漏斗中一般为G1、G2、G3、G4、G5、G6六种，G5、G6可阻止细菌通过。
实验室等处应用的，就是利用过滤除菌的原理去除进入工作台空气中的细菌。
每秒钟超过200，000次振动的声波不被人耳感受，称为超声波。微生物对强度高的超声波很敏感。其中以最敏感，而球抵抗最强。虽然声波强烈地振动可使菌群死亡，但往往有残存者。因此，这种方法在消毒灭菌方面无实用价值。主要用以裂解分离提取细胞组分或制备。超声波灭菌的机理尚不清楚，可能是细菌外表受细微气泡的作用，扰乱细胞内容物及破坏致细菌崩解而死亡。
多数细菌的繁殖体在空气中干燥时很快死亡，例如、、、等。有些细菌抗干燥力较强，尤其有蛋白质等物质保护时。例如链球菌在尘埃中存活25日，在干数月不死。芽胞更强，例如耐干燥20余年。干燥法常用于保存食物。浓盐或糖渍食品，可使细菌体内水分逸出，造成性干燥，使细菌的停止。
多数细菌耐低温。在低温状态下，这些细菌的减慢，当温度如回升到适宜范围又能恢复生长繁殖，故低温常用作保存菌种。
出自A+医学百科 “医学微生物学/物理因素对细菌的影响”条目
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湿热灭菌和干热灭菌的区别
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