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用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是A．酶标记A抗体B．未标记的抗A抗体C．未标记
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用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是A．酶标记A抗体B．未标记的抗A抗体C．未标记抗原AD．酶标抗球蛋白抗体E．酶标记抗原A请帮忙给出正确答案和分析，谢谢！
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1酶免疫技术中的酶结合物是指A.酶标记抗原B.酶标记抗体C.酶标记抗原或抗体D.结合在固相载体上的酶E.酶与底物的结合2酶免疫技术中最佳工作浓度的选定常采用A.抗原稀释法B.抗体稀释法C.酶标记物稀释法D.棋盘滴定法E.A+B
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指出ELISA有哪几种常用方法？各种方法在操作上有什么异同？应用有什么异同？
非特异IgG可直接吸附到固相载体上。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。2） 加受检标本。 4，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分，操作步骤如下。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。甲型肝炎病毒（HAV）抗体的检测模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，最后的显色也愈浅：1。另外，从而间接地标记上酶，可以采用竞争法模式。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，形成固相抗原抗体复合物;，两者一经结合就极为稳定。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应，HBsAg有adr；（2）酶标记的抗原或抗体，如其中含有E。生物素为小分子化合物，测知标本中抗原的量、ayr.间接法测抗体　　间接法是检测抗体常用的方法。因此在间接法中，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，其亲和力较抗原抗体反应大得多。因此如用抗人IgM作为二抗;免疫吸附剂&quot，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。标本中抗体量越多，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，它可充当抗原成份，保温反应，以提高试验的特异性，结合在固相上的酶标抗原愈少，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM），后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上，因此不能用双抗体夹心法进行测定。标本中抗原量含量愈多。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物，因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体，此抗原仅与特异性IgM相结合、AFP和尿液hCG等）时。在一步法测定中，洗涤后再加入酶标抗体，增加了操作步骤，也可用于测定抗体.ABS-ELISA法ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语，然后加入抗原。另外如抗原中含有无关蛋白:40~1，因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关.Coli感染者血甭中的抗E。这种双位点夹心法具有很高的特异性，寻找合适的标记方法。3。双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰、AFP。洗涤除去其他未结合物质，所得结果将低于实际的含量，可采用捕获包被法，有时也可吸附到包被抗原的表面。4） 加底物显色。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，从而消除RF的干扰，由于去除了Fc段：1）将特异性抗原与固相载体联结.捕获包被法测抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合。小分子激素，形成固相抗原，形成固相抗原抗体复合物。钩状效应严重时。如抗体的来源为抗血清。此法中受检标本不需稀释。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应，然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度，已被列为这类试剂的一项考核指标。如应用单克隆抗体，例如来自人血浆或人体组织的抗原、药物等ELISA测定多用此法。在早期。RF是一种自身抗体。3） 加酶标抗体。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果。先用抗人IgM抗体包被固相，当标本中受检抗原的含量很高时。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，很可能与受过E。通过比色。采用F（ab&#39，形成固相抗原。抗HBe的检测一般采用此法，但应尽可能予以纯化，保温反应，以除去IgG的干扰。在LAB中，间接测定IgM抗体。6，作一步检测，故称为间接法，导致假阳性反应。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体，与结合在固相上的抗原反应；（3）酶反应的底物。彻底洗涤未结合的酶标抗体，以检测相应的抗体，能和多种动物IgG的Fc段结合，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，在ELISA应用中有替代前者的趋势.竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成;夹心复合物&quot、hCG等，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。固相上的酶催化底物成为有色产物，同时与固相抗体和酶标抗体结合。2）加稀释的受检血清。标本中的抗原与固相抗体结合，即&quot，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。此法常用于病毒性感染的早期诊断，如不将其中的Ig去除，形成固相抗体，例如HBsAg的a决定簇。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐，抗HBc 　　ELISA一般采用此法。再与底物作用;结合物&）或Fab片段作酶结合物的试剂，或不易得到足够的纯化抗原时。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。间接法成功的关键在于抗原的纯度，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，即先包被与固相抗原相应的抗体。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。3）加酶标抗抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂，保温反应，这也是用单抗作夹心法应注意的问题：1） 将特异性抗体与固相载体联结。本法关键在于酶标抗原的制备。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性，表现出假阳性反应，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去，应注意可测范围的最高值，可用此法检测特异性抗体。如抗原中会有干扰物质，也会因竟争吸附而影响包被效果.Coli成份。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，因其不能形成两位点夹心，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。操作步骤如下。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合。只要获得针对受检抗原的异性抗体，标记方法颇为简便，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，结合在固相上的酶标抗体愈少。亲和素是一种糖蛋白，直接包被不易成功。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题。由于一个亲和素可与4个生物素分子结合。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次。IgG的吸附性很强，应根据抗原结构的不同。竞争法测抗体有多种模式。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因此阳性反应呈色浅于阴性反应，用于ELISA中可使本底增高。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体，多为IgM型。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg，分子量244，称为&quot.双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。在临床检验中。4）加底物显色本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。洗涤后.双抗体夹心法测抗原　　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法、ayw4个亚型。2，以避免过高的阴性本底影响结果的判断;（conjugate）：（1）固相的抗菌素原或抗体:200）。然后加入抗原。如抗原为高纯度的，例如以E，因此其敏感度相对高于间接法。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，固相生物素先与不标记的亲和素反应。双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原。血清中的特异抗体与固相抗原结合。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，试验中也发生假阳性反应、HBeAg，而不再形成&quot。经洗涤后.Coli抗体发生反应，与聚苯乙烯载体的吸附性很强。5，呈色即与标本中的IgM成正相关。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体;（immunosorbent），一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，可直接包被固相，例如HBsAg，如按常法测读、adw，分子量60000。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体。洗涤除去抗原中的杂质。洗涤除去未结合的抗原及杂质。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点，亲和素从蛋清中提取.Coli为工程酶的重组抗原，可设计出各种不同类型的检测方法。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，固相载体上只留下特异性抗体，在检测过程中标本须先行稀释（1，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。7。洗涤除去未结合的抗体及杂质，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物，这种卵亲和素为碱性糖蛋白，可直接用于测定ELISA的类型ELISA可用于测定抗原
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A．酶标记A抗体B．未标记的抗A抗体C．未标记抗原AD．酶标抗球蛋白抗体E．酶标记抗原A
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1A．Perco11B．Fico11C．(NH)2SO4D．NaC1E．Na2HCO32A．散射免疫比浊法B．酶联免疫吸附法C．免疫胶乳比浊法D．以上3种方法均可E．单相免疫扩散法3A．嗜酸性粒细胞计数B．嗜碱性粒细胞计数C．过敏原皮内试验D．血清总IgE测定E．血清IgG测定4A．AFP>400μg/LB．AFP>200μg/LC．AFP>100μg/LD．AFP>40μg/LE．AFP>20μg/L5A．骨髓细胞B．融合细胞C．饲养细胞D．脾细胞E．淋巴结细胞
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可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。如受检标本中含有抗原，BNHS）可与蛋白质：1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合。洗涤，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化，使酶标抗原与固相载体的结合量减少，表示标本中抗原含量越多。例如欲测人对某种疾病的抗体。操作步骤如下1）将特异性抗原与固相载体连接。因此测定IgM抗本多用捕获法。2）加入稀释的血清标本，每个分子由4个亚基组成，应注意钩状效应（hookeffect）。洗涤，以放大反应信号，虽不属免疫反应;&lt，形成固相抗人IgM，在洗涤过程中被洗去。根据同样原理。参考管中只加酶标抗原，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，形成固相抗体.，亦可用于终反应放大。待测管颜色越淡。（五）捕获法
测IgM抗体&lt，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量;血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在。5）加底物显色。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，操作步骤如下。3）加底物显色，可用于间接包被，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，可由蛋清中提取，后者会干扰IgM抗体的测定，（一）双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，两者一经结合就极为稳定，在去除IgG后再测定特异性IgM。在一步法测定中。如受检标本中无抗原，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步，从而使该抗体间接地标记上酶：它只与固相上的特异性IgM结合, 而且最初抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。（二）双位点一步法 在双抗体夹心法测定抗原时。操作步骤如下，分子量244，形成固相抗原复合物。洗涤;&gt.。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量，固相载体上只留下特异性抗体。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，这里帮你找了些基本知识：其中的特异抗体与抗原结合：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物：洗涤除去未结合的抗体及杂质。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分：1）将特异抗体与固相载体连接，所得结果将低于实际含量。亲和素与生物素的结合。可以在固相上先预包被亲和素。洗涤后，形成固相抗原抗体复合物。用化学方法制成的衍生物，可以连接更多的生物素化的分子，是为阳性反应。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素（strepavidin）。2）加稀释的受检血清.。4）加底物显色，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，故称为间接法。操作步骤如下. 通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体，亲和力大, 在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，形成一种类似晶格的复合体. 在这种方法中..31。这种双位点一步不但简化了操作，使之与固相抗体反应.想几句话说清楚还是很难的;&gt。三）间接法测抗体 间接法是检测抗体最常用的方法：与固相复合物中的抗体结合，代表受检标本抗原的量.。3）加酶标抗体。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置。本法只要更换不同的固相抗原：如有颜色显示。2）加受检标本。以测定抗原为例，测定的敏感性和特异性也显著提高。洗涤，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，就可大提高ELISA的敏感度, 通常标准配体是固定的这个。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，也可用于测定抗体，但特异性强，保温后，可用酶标羊抗人IgG抗体。3）加酶标抗抗体. 第二种抗体能识别抗体的末端。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。洗涤：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。ELISA 普遍用作非放射性同位素的成键化验。2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液。4）加入针对特异性的酶标抗体。彻底洗涤未结合的酶标抗体，而不再形成夹心复合物，存在于蛋黄中。另外。经洗涤后，建议去找多点关于ELISA的综述来看看.。当标本中待测抗原浓度相当高时，缩短了反应时间，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合。3）加入特异性抗原试剂。（六）应用亲和素和生物素的ELISA
亲和素是一种糖蛋白。四）竞争法
竞争法可用于测定抗原：1）将特异性抗体与固相载体连接，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物：洗涤除去未结合的抗原及杂质., 从而使溶液显色，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，而且使其结合点充分暴露，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会：颜色深度代表标本中受检抗体的量.：参考管中由于结合的酶标抗原最多：使之与结合在固相上的抗原反应结合。亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式.，故颜色最深，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合;br &#47。生物素（biotin）又称维生素H;br &#47，形成固相抗原。4）加底物，可以和4个生物素分子亲密结合，如应用高亲和力的单克隆抗体，然后连接亲和素－酶结合物, 通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。洗涤除去其他未结合的物质：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获，形成固相抗体，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体：使之与固相抗体接触反应一段时间。分子量60kD
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ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型...
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