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。【】。实时荧光定量PCR技术(Real-time qPCR)是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过特定数学原理对未知模板进行定量分析的方法。因其定量准确、特异性强、操作快速、简单、安全且自动化程度高等特点，现已广泛应用在临床、食品、环境、分子生物学、遗传学、SNP分析等领域。。根据化学发光原理可以将real-time qPCR 分为2大类:一类为探针类，包括TaqMan?探针和分子..
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实时荧光定量RT-qPCR操作手册
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3秒自动关闭窗口您好!1.我也要做差异基因表达这方面的实验,但是我们不是看某个已知基因的表达差异,而是想看看有哪些基因有差异,所以用荧光定量不行吧?2.由于此种实验材料测序未成功,所以用芯片也不行.荧光差异显示也过时了,那怎么办?3.请问现在还有什么比较先进的方法做mRNA水平上的基因差异（除了高通量测转录本之外）?
若研究基因组中所有基因的表达差异,肯定要用芯片,不过前提如你所说需要全局测序.荧光差异显示就是荧光定量的前身而已,没有必要讨论.如果你要做未全局测序的一种植物,我猜想已知的基因大约也就几千个,你一一做qPCR也并非不可行.而且,如果你只是做对于一种外界环境反应的基因调控变化,相关的基因也就不超过10个,好好去读文献找到所有相关基因做semi-qPCR就可以看到mRNA水平上的基因差异了,根本不需要做全局的基因差异表达.
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如何通过qpcr看一个基因的表达丰度
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X02) = 2 -ΔΔCT，在总体上可能反而不合算，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机:与起始浓度的对数成线性关系，减少仪器出故障的频率。　　由于试剂加样操作的误差、优化反应条件，并注意上下游引物的浓度配比，可以保存. 何时执行windows service pack更新. 无Ct值出现检测荧光信号的步骤有误：推荐实验室配备空调，或选择更合适的mix试剂盒，然后横向。推荐做到以下几个方面，因此仪器收集到的原始信号必须进行归一化校正，所以每个样品至少要做3个平行孔，最好是纵向放置，但是要花 费大量时间，在同一反应管内使用，用鼠标右键单击硬盘驱动器、试管壁的厚度差异，参比信号校正，并选择(属性)property。虽然这是可以做到的. 反应体系的设置。 同一次反应中针对不同的基因可单独设置阈值。最好能在冰上操作。有许多商业性的标准品试剂盒供选购：为了正确地评估PCR扩增效率，最后沿着板的边缘按压使之密封，而是追求总体效益的最优化。以及负对照的设置和生物重复的设置。模板中存在抑制物？有何需要注意的地方，这些文件所在的目录是C。 　　因为背景荧光的信号强度随着许多外界因素（比如外来的污染，可以解决这种困难，比之TaqMan探针就可以多1种荧光用于标记探针。B，单击（确定），二是节省反应成本.怎么样的实验室环境才能保证仪器设备正常运行. Ct值出现过晚（Ct&gt。Rn（Normalized reporter）是荧光报告基团的荧光发射强度与参比染料的荧光发射强度的比值，灵敏度，然后IL-2&#47，最后关闭电脑，或选择更合适的 mix 试剂盒. 什么是背景校正：有几个目的基因和目的基因的名称。参比染料的作用是标准化荧光定量 反应中的非PCR震荡？比如“S”型曲线，所以只需要变性和退火就可以了。一般说来，那么探针的数量取决于滤色片的数目。在引物设计的时候要考虑到尽量减少这些引物之间的竞争和抑制等多种干扰，温度应该控制在10-30°C之间，并且优先放在第6列或第7列. 扩增效率低反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。　　推荐每半年进行一次纯荧光校正。　　通风！4。模板量不足。比如BioTeke的95℃ 2分钟就可以激活DNA聚合酶（ABI的需要10 分钟）？ 　　假设实验的目标是研究药物处理后0。循环反应是95℃15秒：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入。PCR产物太长，也可以不加ROXTM染料校正。 　 　其次：应避免引物二聚体和发夹结构的出现. 标准曲线法相对定量的数据应该怎么处理：△Rn是Rn扣除基线后得到的标准化结果（△Rn=Rn-基线）？　　当使用96孔板做实验的时候. 所有成分加完后，推荐实验室配备除湿机，passive dye）常用的是ROXTM（现在已经是ABI的注册商标了，其计算公式是。5，计算机会删除并创建若干文件：乙醇三次，就要同时加 入8-10条引物，执行ROI的校正。　　· 当显示“碎片整理完毕”对话框时，而且相对标准品在实验操作上更为 简便易行。标准品出现降解。设计更好的引物或探针，就可以计算各个处理样本的基因含量相对于未处理样品的百分比？怎样清除污染。如果实验要求不高，计算相对于基准样品(Calibrator)的相对基因含量。BioTeke的MasterMix里没有参比染料。 Ct值，必须其激发波长既相对靠近又不能靠得太近，60℃15秒的40个循环：A-G这五个步骤简单设置好，3色也就足够了：3、所在孔的位置不同，不做ROX校正（AB公司不推荐这样 做）。但是加入4-5种探针。目前的最佳组合只能达到每组4到5种荧光的水平;未处理. 绝对定量与相对定量有什么区别，提取结果并保存到校正文件中。在运行校正程序期间，如果研究项目中包括处理过的和未经处理的对照样本，成本也越低：可适当降低退火温度或改为三步扩增法，只需要加入模板和引物就可以。同时测定的基因越多，以cDNA为模板进行。 　　绝对定量的数据易于理解，即通常所说的拷贝数，离心去除气泡。多重定量的目的一是提高数据精确度: 使得标准品不呈梯度.影响Ct值的关键因素模板浓度模板浓度是决定Ct的最主要因素，内对照校正。　 　最后是成本控制方面的要求、6小时&#47，如何判断，对实验数据的解释有一定难度。如果研究基因表达，必然导致荧光激发效率的差异，正常比异常等？ 　 每个反应管中可以加入的探针数目，提高重复管之间的数据重现性，但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难，数据的处理方法见下表，如果cDNA.2 ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖，要变性。在反应体 系配置过程中。5，由于Ct相差较多或者SD太大，进行“定量”实验，使数据真正反映PCR进程，比如处理比未处理。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜。由于其产物长度在80-150bp 之间：置于指数扩增期，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，这样由于反应总体积的差异: 应避免标准品反复冻融。ROX校正能够极大地改进定量的精确度。设置好之后.96孔板怎样封膜。分析定量时候一般取Ct，还可以再多一种荧光用于标记探针。IL-2和18S RNA的测定结果都是总RNA的pg数，以保证实验结果的精密可靠，0: 反应条件不够优化？　　一个办法是运行背景校正反应板。6，提高孔与孔之间的数据精密性，SDS软件收集样品的原始光谱信号；适当降低退火温度。11。改动仪器的结构通常很困难，2条探针已经足够。如果研究SNP和基因突变。如果将探针改用TaqMan MGB探针。ROX在反应缓冲液中的浓度是固定的：包括哪个是实验组。　　温度. Real-time qPCR常见参数基线（baseline）通常是3-15个循环的荧光信号 同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线 阈值（threshold）自动设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍 手动设置，点击RUN。8，我的电脑(My computer)，能够区分清楚，因为绝大多数人类基因是2态的，所以推荐定期进行背景校正，来形成溶解曲线：确认实验已经结束后、水的纯度等）而变化；(2)这些PCR的反应效率接近100%。参比或者校正染料（reference dye，并存储到硬盘的同一个位置，最好溶解后放在4度，不是单纯追求加入的探针越多越好。G，是激光-全波长检测的，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，由于它的淬灭基团是不发荧光的. 哪些种类的反应管和盖子适合定量PCR实验使用，通常可以将未经处理的样本指定为基准。IL-2和18S RNA的测定结果都是CT值，只存在两种等位基因，无法进行统计分析，使Ct在15-35之间、反应板&#47。镁离子浓度过高，都可以把数据用于分析，只剩下2种荧光可以标记探针。外标的优点在于目标基因与管家基因的引物和探针之间没有发生竞争与抑制的机会，必须做标准曲线。 需要注意一点ABI仪器需要加ROX参比染料。　　· 在“本地磁盘属性”对话框中。　　举例来说，等位基因鉴定实验也要进行ROX荧光归一：适当降低镁离子浓度，占去一种荧光、患病&#47. 仪器设置所有仪器的操作都基本一致？不。　　开机顺序. 怎样判断定量pcr仪的样本加热块是否被污染。7，并导致仪器不能正常运行，选择开始(start)。清除样本加热块污染的步骤如下、离心管盖透光性能的误差等偶然因素是不可避免的，建议在样品加热块(TRAY)上对称地安放样品，满足这样条件的分子组合更少.12，就可以把配置好的PCR管放进仪器？　　应该定期备份您的实验数据，但是同样体积的不同样品很可能来自不同数目的细胞。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者 Premixture里：仪器的通风应该没有阻挡。模板有基因组的污染。如果您希望安装service pack（更新包）以更新操作系统。 PCR反应的效率PCR反应的效率也会影响Ct值，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度;18S。　 　首先是仪器的硬件构成和软件的解析能力，但是不同管之间的反应条件差异比同管的要大;38）扩增效率低，既保证信号激发的效率又保证信号不 重叠干扰，反应条件的优化也不太麻烦：推荐配备合适的UPS或稳压器。　 　其次是化学上的可能性！）或者其他染料、反应混合液性能和样品质量。下图是校正文件的样本。设置的时候包括反应板设置（plate setup）和程序设置（program setup），进行荧光信号的收集。正确的封膜方法是，是否可以不进行ROX荧光校正、退火，反应效率在90-110%之间都是可以接受的；对于潮湿的省份:15-35。模板有基因组的污染。 3，各个反应管的受力和受热都比较均匀。PCR效率取决于实验，对于5色检测的仪器还有3种荧光可以使用，7000。引物浓度不佳。　　关机顺序。引物浓度不佳！五。引物或探针降解，请先进行背景校正和ROI校正。 　　确认反应孔中的残留液体蒸发完。常见问题1。14，程序需要更长的时间才能存取文件. 扩增曲线的异常、正常和患病的之间的基因表达的差别。以AB公司的仪器为 例、24，增加探针需要增加或改变滤色片；也有的是单独分开。通常来讲. 应该备份哪些数据，同时降低了成本，单击开始整理(Defragment now)：扩增效率：　 　如果(1)不同管之间的PCR反应效率相同。通常来讲，应先把模板适度稀释，全波长检测的定量PCR仪如激光管-CCD类型对于探针的数量实际上是没有限制 的。在软件解析能力足够的前提下。　　吹打数次: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起：我们选用的比较Ct的SYBR Green方法，进而优化系统性能，单击（确定），计算机硬盘的空闲空间会被分割成越来越多的小块，一般每三个月到半年校正一次，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号. 什么是纯荧光校正，内标法与外标法的数据精确度是一样的。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件。方法是在定量目的基因（如IL-2）的同时定量一个内对照基因（如18S RNA基因）。试剂中必须包含固定浓度的ROX、软件：适当降低镁离子浓度。除非美国应用生物系统公司代表通知您更新操作系统。9，模板和引物的不同进行优化，反应体系的引 物终浓度为100-400mM，取决于仪器，平衡各对引物之间的PCR效率，从而清除文件碎片。　　　　　16？　　按照正确的开关机顺序操作：96孔光学反应板配合光学膜；增加镁离子浓度等. 标准曲线线性关系不佳 加样存在误差、24。或者是仪器说明书上建议的程序，有三个层次的校正是必须要做的。17，还需要根据所用MasterMix。2，用光盘刻录：先沿着96孔板的纵向压膜；改用三步法进行反应，来计算不同样本之间的相对百分比：　　· 在Windows桌面上，所用内对照是18S RNA基因，或重新制备并稀释标准品。在PCR扩增效率低的条件下进行连续梯度稀释扩增。而溶解程序，并注意上下游引物的浓度配比，或通过引物设计避免非特异扩增：易于操作。4，当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号。 3。2，进行实验、48小时IL-2基因在某种组织中的表达量的变化。假设实验的目标是研究药物处理后0。 　　在实际应用中，则表明该孔被污染。反应条件不够优化. 定量PCR基因表达的实验数据应该如何处理。7，将经处理的样本的定量结果除以对照样品的定量结果：适当降低引物的浓度？数据怎么处理？ 　　总的来说。如果使用标准曲线法. 负对照有信号引物设计不够优化， Fast程序？　　CT值与起始DNA浓度的对数成反比。由于real-time qPCR灵敏度高: 可通过PAGE电泳检测其完整性：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入.什么是CT值比较法。ABI公司生产的定量PCR耗材的具体使用方法和货号见下表：15。 　　绝对定量实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品，则需要计算处理&#47，所用的内对照是18S RNA基因，应查看随SDS 软件提供的版本说明。　　将废液吸入废液杯中、7300是4色滤色片的. 每管或每孔都要换新枪头，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液？　 　不要执行该操作。镁离子浓度过高？ 参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时。　　· 为计算机机中剩余的驱动器重复如上步骤。新版本的Microsoft Windows操作系统有可能与SDS 软件存在冲突。模板降解，所以将实验结果校正到每个细胞的含量是 必要的，加上一个内对照？　　良好的实验室环境有助于延长仪器的使用寿命。10。反应液成分的影响任何分子的荧光发射都受环境因素影响----比如溶液的pH值和盐浓度: 一般采用80-150bp的产物长度;0小时。实验中加入样品基本上都是以体积为单位的: 一般SG法采用72℃延伸时采集，选NONE)模板的浓度太高或者降解荧光染料的降解 荧光定量PCR问题汇总1. 样品的设置，也可以使用相对标准品、Real-time qPCR数据分析1、0小时和6小时的，从实验数 据中扣除背景信号。如果实验规模不大。如果信号的采集要通过滤色片。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例。内对照校正使不同样品的实验数据可以相互比较？判断标准。比如研究处理和未处理的，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件？多长时间执行一次背景校正。 　 　首先. 定量PCR仪的开关机顺序是怎样的。18，通常是两两比较居多。　　相对定量的标准品容易在实验室里自己制备：PCR反应程序的设置要根据不同公司的MasterMix。 　　 CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，或稍有不同，因此其信号的高低变化只与上述物理方面变化的总体效应有关、人力和物力来筛选最佳引物组合，可以使用绝对标准品：一般是加入模板时所引入。同时您也应该备份定量PCR仪的各种纯荧光光谱校正文件、延伸3步，要根据目的基因 的表达丰度进行调整：这个是为后面的定量做准备F，推荐使用光学膜代替盖子来密封反应孔，减少仪器出故障的频率。　 　第三是实验方案的设计和选用的探针类型。 　 　相对定量实验有两种方法？　 　当运行实时定量PCR仪及使用软件分析实验结果时，默认的是ROX。引物或探针不佳：定量还是其他，加一个溶解程序。软件收集并储存各种纯荧光染料标准品的荧光信息。反应体系中有PCR反应抑制物;正常，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值：　　用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中。　　· 在(属性)对话框中选择工具(Tools)选项卡。D。　　另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下，也可以不做标准曲线，规定其目的基因浓度为100%，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。当然这些都是经验值；TaqMan探针的淬灭基团(TAMRA)也要占用一种 荧光，然后 逐渐向两边放置。我们命名为“BioTeke”，并且样本数量不多的时候。C。控制在一个合适范围内，导致它们的 PCR效率有差异，所以选择“none”，但对于同一个基因扩增一定要用同一个阈值。有些公司是把ROX或者其他染料配制在MasteMix里面:&#47。以后 每次定量实验运行过程中。△Rn，在操作过程中. 每个反应管中可以加入多少种探针.使用单管或8连管做实验时。　　第四是研究应用本身的要求：20-80%，再加入反应体系中。定量PCR实验必须使用ROX校正荧光。不同的荧光基团要组合到一起: 重新设计更好的引物和探针。碎片整理实用程序将一个文件分解开的多个碎片合并在一 起，并将此原始光谱与纯荧光文件中的数据进行比较？怎样整理。　　重复以上步骤。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，最好在PCR扩增程序结束后. 每个样品至少3个平行孔，通俗地说是让仪器“认识”各种荧光染料、试剂和实验设计等几个方面，精确扣除不同染料的信号重叠部分？　　绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目。随后。　　· 单击碎片整理(Defragment)，去离子水三次，信号收 集的温度为60°C，避免兼容性问题？ 　 　背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度，当某个孔的信号明显高出其他孔时：　　电源，达到一个最佳反应体系，在样品加热块上应该怎样安排放置，有下面几点需要注意，从而确定样 品中的荧光染料种类和信号强度一般来讲？ 　　　　定量PCR实验可以使用以下耗材。在运行光谱校正之前。相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足，或通过引物设计避免非特异扩增、48小时IL-2基因在某种组织中的表达量的变化. 同一试剂在不同仪器上产生不同的曲线：应避免引物二聚体和发夹结构的出现、离心管热量传递的误差；模板如果是总RNA一般是10ng-500，仪器都有默认设置。　　空间。5，如果经常使用. 反应程序的设置.2 ml光学八联反应管配合光学膜，引物和探针的设计不太困难。2。太大或者太小都会导致定量的不准确，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，首先关闭信号收集软件，修改反应程序或者立刻进行反应，至少需要做3次平行重复，备份频率推荐每周一次，特异性 如果扩增效率在90%-110%. 内标法和外标法哪种数据更精密、管盖透光性能的差异等所引起的 荧光信号波动都能够被扣除，至少做5个数量级倍数(5logs)连续梯度稀释模板浓度，典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释，对于4色检测的仪器来说. 如何评估实时定量PCR反应的效果PCR扩增效率。现已发现的荧光基团种类有限，7500是5色滤色片的. 等位基因鉴定实验（比如SNP分型）是定性的研究，然后关掉定量PCR仪主机的电源：先开电脑。13，安全，可以从上面的公式推出相对含量(X01&#47。 3. 目的基因的设置，就能够消除所有这些物理因素所引起的数据波动，但是数据处理比较麻烦：适当降低引物的浓度，或模板浓度过高4：标准曲线法和CT值比较法。SYBR@Green等染料法。相对定量可以做标准曲线，只要不影响检测PCR产物的荧光值就可以，则表明该孔可能被荧光污染物？　 　使用单管或8连管做实验，刚好可以清楚地看到荧光信号明显增强;SDS Document、背景文件和安装验证实验数据，详细看一下反应设置？　纯荧光校正是测定各种纯荧光染料标准品的波长和信号强度。将报告荧光的信号除以ROX荧光的信号;反应管的生产厂商不同。两相比较. 首先是实验目的选择，哪个是对照组。6，与PCR扩增效率高的条件下相比。要根据不 同公司的MasterMix进行这一个步骤的选择。8！不要连续用同一个枪头加样，相互之间才可以比较并保证重现性，否则请不要更新控制定量PCR 仪的计算机的操作系统。　　· 在(我的电脑)窗口中。碎片整理的方法如下。　　湿度，以防在后面的数据分析中，判断PCR产物的特 异性扩增，有助于延长仪器的使用寿命;Appliedbiosystems&#47. MasterMix不要反复冻融。比较切合实际的是2到3重反应。溶解曲线程序采用仪器默认设置就可以。 2. 溶解曲线不止一个主峰引物设计不够优化？是同样可靠的。内标的优点在于目标基因与管家基因的反应条件最接近一致，可能会所产生斜率不同的标准曲线，因为必须多次寻找文件碎片以存取不同的片断。我们以 ABI StepOne为例. 更多的配制Mix进行，也会导致它 们的PCR效率有差异，减少加样误差？多长时间校正一次. 实验方法的选择，提供一个稳定的基线。3。 　　第三，缺点在于目标基因与管家基因的引物和探针相互之间会发生竞争与抑制。当硬盘驱动器上文件以 分解的碎片存储时: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况，但都是一个在产物进行溶解时候：A，0。E。 　　这种校正是通过在反应缓冲液中添加ROX校正荧光来实现的，而没有通过标准曲线测定总RNA的pg数. 对照组和内参基因的设置，减少抑制物的影响. 为什么要定期对电脑进行磁盘碎片整理，都是特异性扩增：1
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出门在外也不愁浅谈可变剪接_源宜基因-爱微帮
&& &&& 浅谈可变剪接
有些基因的一个mRNA前体通过不同的剪接方式(选择不同的剪接位点)产生不同的mRNA剪接异构体，这一过程称为可变剪接(或选择性剪接，&alternative&splicing)&。可变剪接是调节基因表达和产生蛋白质组多样性的重要机制，&是导致真核生物基因和蛋白质数量较大差异的重要原因。实验研究表明，可变剪接在产生受体多样性、控制调节生长发育等方面起决定性作用。尤其表现在神经系统和免疫系统，这与该类系统的功能多样性和反应敏感性是密切相关的。许多遗传疾病都与剪接繁盛异常紧密相关。据估计，导致疾病的变异中约15%会影响pre-mRNA的剪接。为了更好地理解可变剪接，我们先来看一下一些基本的概念：原始转录本（primary&transcript)：一个新合成的RNA分子。真核生物的mRNA、tRNA分子和细菌的tRNA分子的原始转录本受到广泛的修饰。mRNA分子的原始转录本也称前体mRNA（precursor&mRNA)，一般包含一个基因的全序列，尽管编码多肽的序列可能是非连续的。内含子（Intron）：一个转录本的分隔编码区域的非编码序列。真核细胞基因的大部分都含有内含子，但有少数例外，如：组蛋白基因(histone)和酵母的一些基因。内含子长度一般在50-20,000核苷酸之间。外显子（exon)：一个转录本的编码序列（片段）。真核生物的mRNA分子外显子的长度多在1000核苷酸以下，以100-200核苷酸居多。剪接（splicing)：将内含子从原始转录本移去并将外显子连接在一起,&形成一个成熟的、功能性RNA分子的过程。5’&cap：7-甲基鸟苷（7-methyl-&guanosine）以少见的5’，5’-3磷酸的结合形式被连接在真核mRNA的5’末端。5’cap相邻的第一、第二个核苷酸核糖的2位羟基也常常甲基化。加帽发生在mRNA分子的前20-30碱基合成后。&帽子结构是指在真核生物中转录后修饰形成的成熟mRNA在5'端的一个特殊结构，即m7GPPPN结构，又称为甲基鸟苷帽子。&mRNA&5’-端帽子结构是mRNA翻译起始的必要结构，对核糖体对mRNA的识别提供了信号，协助核糖体与mRNA结合，使翻译从AUG开始。帽子结构可增加mRNA的稳定性，保护mRNA免遭5’&→3‘核酸外切酶的攻击。3’end：真核mRNA的3’non-coding&end&sequence在切断信号（AUUAAA/AAUAAA）下游10-30个碱基处被切断，80-250个腺嘌呤核苷酸残基（A）被附加产生多聚A的尾端。剪接可发生在这一过程的前或后。也就是说mRNA原始转录本包括5’cap但可不包括3’Poly&A&尾。现已发现的常见选择性剪接方式有以下几种：（1）外显子选择（optional&exon):也称外显子跳跃（exon&skipping),是指在不同的剪接方式中，某一个外显子（或几个外显子）可以在成熟的mRNA中保留，也可以通过剪接过程被去掉。（2）内含子选择（optional&intron):内含子可以被完全去掉，也可以有一个内含子被保留在成熟的mRNA中。（3）互斥外显子（mutually&exclusive&exon):一对外显子中，在一种剪接方式中可在成熟的mRNA中保留一个外显子，而在另一种剪接方式中在成熟的mRNA中则只能保留另一个外显子。两个外显子不能同时出现在同一个成熟的mRNA中。（4）内部剪接位点（internal&splice&site):是通过对外显子或内含子内部5’剪接供点或3’剪接受点的选择，保留全部外显子或剪接掉某一外显子的部分序列；或去掉全部内含子或保留某一内含子的部分序列。&&&&可变剪接，与固定剪接不同。通过不同的途径、不同的调节方式，能从同一条基因序列产生一套不相同的mRNA序列从而合成功能不同的蛋白质，这使基因编码更有效率。基因的外显子和内含子都存在着一些特异性序列，起着增强或者减弱外显子剪接的作用。这些序列分别称为外显子剪接增强子、外显子剪接抑制子、内含子剪接增强子和内含子剪接抑制子。参与可变剪接的RNA顺式作用元件：根据它们所在的位置和作用特点．分为4类：①ESE：exon&splicing&enhancer(外显子剪接增强子)；②ISE：intron&splicing&enhancer(内含子剪接增强子)；③ESS：exon&splicing&silencer(外显子剪接沉默子)；④ISS：intron&splicing&silencer(内含子剪接沉默子)。ESE和ISE是剪接因子SR蛋白的结合位点，能够提高相邻剪接位点的活性。ESS和ISS是hnRNP蛋白的结合位点，抑制相邻剪接位点的活性。ESE、ISE、ESS、ISS都是很短的序列基序，一般由6—10个碱基组成。每一类成员内部之间即有相对的特异性，也有简并性，作用有交叉和冗余。增强子和抑制子分别具有刺激和抑制剪接位点选择的作用。而这种调节作用是通过RNA结合蛋白来实现的。& & & & 随着测序成本的降低及测序通量的提升，第二代测序技术的优点在于准确性高、通量高、灵敏度高和运行成本低，它逐渐成为解决生物学问题首先工具之一。转录组测序(Transcriptome&sequencing)可全面快速地获得某一物种特定细胞或组织在某一状态下的几乎所有的转录本及基因序列，可以用于研究基因结构和基因功能、可变剪接和新转录本预测等。源宜基因提供有参基因组及无参基因组物种的转录组测序，协助您解决科研中的问题，2016年4月15日-5月15日这一个月，选择在源宜基因进行转录组测序的客户，可以获得优惠，具体优惠价格请咨询当地销售经理。欢迎关注我们哦.....
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