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在配Gibco DMEM培养基时大家一般每升加多少克碳酸氢钠呢？
小生刚刚接触细胞培养，在给BOSS养HepG2细胞时发现细胞长得不够Happy:(，而且无论培养多久，培养基都不变色（保持红色），细胞死得也很快（3-4天细胞就全挂了）:cry:。查了一些资料，怀疑自己配的培养基有问题。（配方：Gibco DMEM培养基粉+3.7g/L碳酸氢钠+10%FBS 滤膜过滤 5%二氧化碳开放培养）可能是pH过高或者FBS浓度不对。遂取新鲜培养基先测了pH，结果pH=7.94，确实高了:o，于是用36.5%的盐酸调节pH至7.24（约加了0.3ml盐酸）。可是在4℃冰箱中放置3-4天后pH又回到了7.94。（碳酸氢钠加多了？？:rol:）
想请教各位，平时在配GibcoDMEM培养基时大家每升都加多少克的碳酸氢钠呢？
今天重配了1L DMEM，只放了1.85g碳酸氢钠，不过没加丙酮酸钠，先试试效果。另外想再请教下，少量的丙酮酸钠大概是多少g/L？需要加双抗吗？一般情况下配完培养基需要调节pH吗？谢谢！:cat39:
0.05g左右吧，配完后当然要调PH啦。双抗可加可不加，可以在培养细胞的时候再添加
非常感谢！我是用HCl调的PH，调好后过滤，发现PH又会升高（超出0.2-0.3），是不是因为我没用1N的HCl调节的缘故呢？:cat9:
1L培养基里面只加1.5g？
不知道你用的是什么浓度的盐酸，但我们一般用的都是1N的。不是调了PH后还要再测吗，怎么会又升高呢。我们配了培养液后把PH调到7.2-7.4之间后，然后在加的血清，之后都没有测PH，但细胞长的还可以。
我直接拿36.5%的浓盐酸调，调到7.2-7.4后再加血清和超纯水至1L，过滤，再测会发现pH会升高（已超过7.4，大概在7.8左右）。可能是没用1N的盐酸的缘故。经实验，这样的培养基也能养细胞，但是细胞长得时好时坏，让人很苦恼。
按照3.7g配1L，培养基会偏碱（大概pH=7.9），调节pH时不太方便。
想找出原因，也不能一直都用买的哇
呵呵，那很巧啊！我养的是肝癌细胞HepG2，按道理癌细胞是很好养的，可是细胞不喜欢我配的培养基。
调了PH再加水，肯定会偏碱啦
能不能给我发个详细点的Protocal啊？谢谢了！好人一身平安！长命百岁！:tiger28:
gibco人家说了让你调pH到比7低一点点 没有pH计就买精密pH试纸呗 能有多不方便？
很厉害的样子啊！受教了！
我是照着说明书配的，缺少经验，在调节pH时遇到点问题，多谢指点！
那再请教几个问题：
1.配好的培养基放在4℃冰箱中几天，发现pH升高，是什么原因呢？
2.显微镜下观察培养的细胞时发现较多黑点样的东西，细胞内外均有分布。是支原体、衣原体吗？其分泌物会杀死细胞吗？加抗生素还能让细胞回到正常状态吗？
3.如果发现已配好培养基偏碱，能将培养瓶瓶盖拧松，放入CO2培养箱中，利用CO2调节中和pH吗？
ps:呵呵，确实遇到过察色辨pH的猛人！
碳酸氢钠和培养基粉末最好分别溶解均匀再混合
哦，好像是吧 我每次都是到300ml水在容量瓶里-放转子开搅拌-到碳酸氢钠-到培养基粉末-用水冲洗培养基粉末袋子和容量瓶壁-调pH-定容 碳酸氢钠基本下去就溶了，应该也就是你的意思吧
1 因为你的瓶子密封性不好 少量空气进去了，国产瓶子经常有这个毛病，缠封口膜也没用 进口瓶子好很多
2 高度怀疑是支原体，会缓慢的影响细胞生长，短时间可能对生长影响不大，我们试过几种抗生素，氧氟沙星有效 你可以试试
3 可以的，放上一天会有效，但是高温对培养液中的成分不好，你可以临用前少弄一点放培养箱里，不建议整瓶放，我以前用1640的时候还用过滤过的1M盐酸再次调pH，也可以，1640的缓冲能力弱颜色变化十分明显
我们用的是JET BIOFIL的塑料瓶子，就算进入少量空气也不会引起pH的太大改变吧。
第3点建议很有帮助！谢谢！:D
通CO2是个不错的选择，但具体的操作是怎样的呢？需要特殊的装置吗？你有没有尝试过？
没什么特殊装置，就是注意把减压阀出气的调的小一点，用胶管接上平时用的移液管，通到瓶里
是这样啊，有什么安全方面的注意事项吗？
1N的HCl对滤膜会不会有损伤啊？一旦滤膜破了就起不到过滤的作用了啊！
谢谢！没试过，成本有点高。我用大家给的方法已经调好pH了，但还有几点疑惑。第一，为什么Gibco的方法上要写3.7g的碳酸氢钠？这样配下来培养基太碱，需要加很多盐酸调低pH；第二，细胞培养时观察到的黑色点点（可能是细胞碎片）会不会跟我传代时消化时间有关（5分钟左右，贴壁细胞完全漂浮）。第三，FBS是使用的时候加还是配培基的时候加？
我在上海细胞库买的细胞，目录上说就让加那么多，配出来细胞长得挺好的。。。
你是什么细胞啊？能不能传张图片让大家学习学习呢？
第一个，3.7克这个我也不太清楚，当时也疑惑过，后来我觉得是不是不仅是PH的事，还涉及到渗透压的事或者足够的钠盐支撑缓冲体系？第二个，黑色点点的话可能是死细胞碎片，如果养的神经元，还有可能是伴胞的一种细菌。传代的话，肿瘤细胞2分钟就够了，你是用的胰酶加EDTA么？第三，我一般是配200ml培养基的时候加血清，然后放到冰箱里随用随取，配多了容易染菌和变质。你要是用量大多配点也行。
我用的是Thermo的trypsin，其中是含有EDTA的。
5min是不是有点长，损伤了细胞，导致细胞长不好，细胞碎片变多？（最近把消化时间缩短到了1m30s，用调好pH的培基长HepG2，已正常，黑点还有，但相对较少）:hand:
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
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大家 好 ！我想大家问下关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液怎样换算？谢谢！
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
本帖最后由 djl 于
20:37 编辑
5%=1.25%剩于4&&比例为1：4&&举例如 5%碳酸氢钠20ml加入生理盐水80ml&&即为1.25%碳酸氢钠80ml。
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
本帖最后由 floor_18 于
21:02 编辑
如果配置1.4%的碳酸氢钠只需加入5%碳酸氢钠体积的2.5倍的5%葡萄糖即可，配置1.25%碳酸氢钠加入原溶液3倍的5%葡萄糖即可。比如10ml的5%碳酸氢钠溶液需加入25ml的5%葡萄糖，0.5/（10+25）=0.0143，约为1.44%：加入30ml的5%葡萄糖，0.5/（10+30）=0.0125，为1.25%
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
谢谢大家的指导！
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
如果配置1.4%的碳酸氢钠只需加入5%碳酸氢钠体积的2.5倍的5%葡萄糖即可，配置1.25%碳酸氢钠加入原溶液3倍的5 ...
floor_18 发表于
& & 老师你好！我还是又点不太明白！“5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%”那20ML5%碳酸氢钠溶液加入多少5%葡萄糖呢 ？是不是0.5/（20+3*20）=0.00625?还是请教下你，谢谢！
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
不敢称老师，相互学习。
原液是20ml,20ml的2.5倍,就是50ml水，1/（20+50）=0.0143，就是1.44%浓度了。由于10ml的5%碳酸氢钠含碳酸氢钠0.5g,20ml的碳酸氢钠溶液含碳酸氢钠就是0.5×2=1g了。
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
& & 真诚的谢谢你！
这下就明白了，看来这还是道数学题？
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
溶液的浓度=溶质（g）/溶剂（ml）【医学常用单位g/ml】=溶质（kg）/溶剂（L）【国际单位kg/L】
由于5%碳酸氢钠是溶液，本身是有“水（溶剂）”的，计算的时候应该把原溶液的水计入所配置的溶液的溶剂中，配置溶液的浓度=溶质/（原溶液溶剂+水）（公式1）。
把5%碳酸氢钠配置成1.25%浓度，先算原溶液溶质和原溶液溶剂，假如原液有100ml，溶质就是100×5%=5g,原液溶剂是100ml,我们按照固定的原先固定的3倍配比关系，应加入水的量就是100×3=300ml，我们用公式1计算就是：溶质/（原溶液溶剂+水）=5g/(100ml+300ml)=1.25%
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
本帖最后由 floor_18 于
12:26 编辑
这个比例关系是固定的，想配1.44%就加入原液<font color="#ff倍的水，想配1.25%就加入原液3倍的水，当然原液必须是5%碳酸氢钠。这个主要用在儿科中，如果是成人可以按照二楼的办法。
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
& & 真晕你，数学没学好还是理化没学好？
5% 是 1.25% 的 4倍。
把原来的溶液添加溶剂，总体积为原来的4倍就行了。
10毫升5%的，就加到40毫升，额外加入30毫升葡萄糖就可。
20毫升的，就加到80毫升，额外加入60毫升葡萄糖就可。
100毫升的，就加到400毫升，额外加入300毫升葡萄糖就可。
2毫升的，就加到8毫升。
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关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
& & 还真不好意思，数学一直我的弱项，在加上我都快脱离临床了，突然想起补液的一些计算方式方法不会？就向你们问问！
关于5%碳酸氢钠溶液配制成1.25%或1.4%的等渗溶液？
我还是有点不懂得哦，为什么有些时候他们加3.5倍的gs呢
回复 7# 别来无样
这个比例关系是固定的，想配1.44%就加入原液2.5倍的水，想配1.25%就加入原液3倍的水 ...
老师，2.5倍到底是怎么来的啊，数学太差了，这部硬是没搞懂啊？
求指教，固定原先固定的三倍关系从哪里来的呢？
看到这个了，我懂了腻
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病情分析：
你好，这个浓度一般是比较大的，建议250ml12.5g碳酸氢钠注射加125毫升水，稀释成4%左右的浓度，这样还是可以的。
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专长：内科 妇科 儿科
&&已帮助用户：51109
你好，孕前吃了半个月碳酸氢钠，对小孩没有影响的
问刚怀孕用了外用药有什么影响吗？
职称：医生会员
专长：消化疾病，不孕不育疾病，妇科病，高血压，心脏病
&&已帮助用户：16587
病情分析： 你好，一般妇科外用药对孩子影响不大的。要慎重选择内服药物。现在要增加营养，均衡营养，预防各类感染（感冒，腹泻等）。暂禁房事，尤其前三个月。定期产前检查。孕15周后可以做个唐氏筛查，孕24-28周可做“糖筛检查”。祝你好孕。
问怀孕要是吃了药有什么影响
职称：医师
专长：高血压，心血管疾病
&&已帮助用户：190225
指导意见：你好怀孕要是吃了药 要看具体情况，定期孕检，注意休息
问吃促排的药怀孕有什么影响
职称：医生会员
专长：主治阴道炎，盆腔炎，不孕不育等
&&已帮助用户：100021
意见建议：你不用担心，怀孕前吃的促排卵药不会影响到胎儿发育的，建议你做好孕期检查，可以再怀孕13周查胎儿的颈项透明层的厚度、怀孕16-22周做唐氏筛查，都能排除胎儿发育异常。
问吃减肥药的时候怀孕了有什麽影响..
职称：护士
专长：妇科疾病，
&&已帮助用户：7429
问题分析：您好，一般情况怀孕前后（3--6个月左右），是不建议用药物的，因为在怀孕初期易引起出血可能等。意见建议：建议及时到医院做检查，同时少吃生，冷，辛，辣等刺激性的食物。
问怀孕前吃过伤痛类的药会有什么影响?
职称：医师
专长：不孕不育
&&已帮助用户：66329
问题分析：怀孕早期服用药物对胎儿发育影响较大，影响的几率和程度与用药种类、剂量、持续时间以及孕妇体质等因素有关。意见建议：最好是提议做好孕产
期检查(如怀孕14－20周进行唐氏筛查，怀孕22－26周进行彩超排畸检查)，有异常情况及时解决
问怀孕前吃了减肥药有什么影响
职称：医师
专长：胃、十二指肠溃疡,面神经炎,低血压
&&已帮助用户：245428
指导意见：你好,不用担心,对孩子的影响较小,建议继续妊娠,
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