流式细胞报告单怎么看仪细胞凋亡的结果怎么分析

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-10-15 06:58 标签： 流式细胞仪的工作原理
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流式细胞仪测定细胞凋亡结果分析
作者 yueliangwan
各位虫友们，大家都是怎么用流式测定细胞凋亡的啊，除了Annexin V/PI之外，还有别的试剂盒吗，大家药物一般作用多长时间啊，还有请大家帮我解释一下下面的结果吧，各个象限分别是凋亡的哪个周期啊。
沙发自己坐了，跪求各位大侠啊。。。帮忙看一下啊:，
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与700万科研达人随时交流实验时间 | 流式细胞仪检测细胞凋亡实验
流式细胞仪检测细胞凋亡可以：
鉴定细胞凋亡形态；
可以准确的进行凋亡细胞的计数；
可以进行特异的定性分析和定量分析。
细胞凋亡时，在细胞、亚细胞和分子水平上会发生的特征性改变，这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性。通过流式细胞仪检测这些特征性的变化，进而判断细胞凋亡的情况。
一、收集细胞
收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个 / mL｝，500～1 000 r/min 离心 5 min，弃去培养液。
二、细胞洗涤
3 ml PBS 洗涤 1 次。
三、乙醇固定
离心去 PBS，加入冰预冷的 70% 的乙醇固定，4℃，1～2 小时。
想查看更多实验步骤，请扫以下二维码或点击「阅读原文」查看。
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细胞凋亡流式细胞仪分析方法的比较及选择
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流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较
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流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较
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【流式细胞凋亡图】如何分析annexin v的流式散点图
做药物干预细胞增殖的实验，用Annexin V-FITC试剂盒做流式，因为自己学校没有流式细胞仪，只能拿到外校去做，最后给了几张这样的散点图，请各位高手帮帮忙，我该如何对它进行数据分析？流式细胞仪是Becton Dickinson Facscalibour吧,具体描述为:UL：上左区；一般认为是死亡细胞,3.38%UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞,10.57%LL：下左区； 正常阴性细胞,80.85%LR：下右区; 早期凋亡细胞,5.19%Annexin V-EGFP的绿色荧光通过FITC通道（FL1）检测；PI红色荧光通过PI通道（FL2或FL3）检测，一般BD流式细胞仪建议使用FL2,而beckman coulter公司的仪器建议使用FL3。图中FL1应为Annexin V-FITC,FL2应为PI这个试剂盒是Annexin V/PI双染,那位做流式的老师给你标错了,你可以回去找他确认.如上图所示:左上象限为死亡的细胞,图旁边的数据显示,Gated%为5.19%,左下象限为阴性细胞,也就是活着的细胞,Gated%为80.85%,右上象限为晚期凋亡细胞,Gated%为10.57%,右下象限则是早期凋亡细胞,Gated%为3.38%secondary necrotic cells应该翻译晚期坏死细胞那位老师说左边象限是PI染色，右边是Annexin V。既然是这样的话.应该这么解释:左上象限为死亡的细胞,图旁边的数据显示,Gated%为5.19%,左下象限为阴性细胞,也就是活着的细胞,Gated%为80.85%,右上象限为晚期凋亡细胞,Gated%为10.57%,右下象限则是早期凋亡细胞,Gated%为3.38%还有一个疑问:做流式的老师在图上标明右上象限是早期凋亡,右下象限是晚期凋亡;但试剂盒的说明书上说右上象限是secondary necrotic cells,右下象限是apoptotic cells也就是凋亡细胞;我查了查坛子里大部分都说右下是早期凋亡,右上是晚期凋亡或坏死,到底哪种对啊?搞晕了。另外,这个secondary necrotic cells应该翻译成什么?继发坏死细胞?晚期坏死细胞?试剂盒是Beckman Coulter公司的Annexin V-FITC。你们那个实验室做流失的老师有问题吗? 你给我提供的消息是Annexin v-FITC,既然是FITC标记的就应该是第一通道,也就是FL1, Annexin 单阳属于早期凋亡,也就是右下象限为早期凋亡, 怎么会是晚期凋亡呢?既然你用PI这个染液了,还是第二通道的(FL2),PI标记的为死亡细胞,两者双阳才是晚期凋亡,而且你的试剂盒已经注明右上象限双阳为secondary necrotic cells.这不很明白吗?还有下次做流式的时候请上机的老师给你注明FL1-Annexin v. FL2-PI.这样你的图上才会显示出来,我在实验室给学生们做流式4年了,还从来没有人说我解释的不对.老师就是应该耐心的为学生服务解答问题!
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为3536kD的Ca2 依赖性磷脂结合蛋白。
近期,石河子大学医学院第一附属医院普外二科研究人员发表论文,旨在探讨来氟米特(A771726)对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响及可能机制。研究指出,来氟米特可能通过下调PI3KAktmTOR信号通路而诱导大鼠肾小球系膜细胞的凋亡。
日,国际著名自噬领域学术期刊《Autophagy》在线发表在线发表了 东南大学生命科学研究院发育与疾病相关基因实验室姚红红课题组题为Mir143BBC3 cascade reduces microglial survival via interplay between apoptosis and autophagy Implications for methamphetamine
摘要细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下。
7AAD 7aminoactinomycin D是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光。

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