火箭对流免疫电泳泳的火箭峰呈纺锤状是为什么

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培训课件-第六章免疫比浊分析.ppt 46页
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第六章免疫比浊分析免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。第二节自动化免疫比浊分析第一节免疫比浊的原理一、透射免疫比浊法二、散射免疫比浊法三、免疫胶乳比浊法四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用第一节免疫浊度分析原理抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（&19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（&19S），使反应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表示。第一节免疫浊度分析原理在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。免疫比浊技术分类：透射免疫比浊法（turbidimetricimmunoassay）散射免疫比浊法（nephelometryimmunoassay）速率散射比浊法终点散射比浊法　一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液时，由于溶液中的免疫复合物微粒对光线的吸收、反射和折射而使透射光减少，可用吸光度表示。在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。一、免疫透射比浊法（一）原理：抗原抗体反应曲线1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。（二）操作方法2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。待测的抗原抗体复合物分子量足够大。抗原抗体复合物数量足够多。具有充分的反应时间，只能测定抗原抗体反应的第二阶段。高亲和力的抗体，并保证抗体过量。（三）技术要求（四）方法评价优点:灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确不足:①抗体用量较大；②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素密切相关。二、免疫散射比浊法(一)原理不同大小的微粒形成的散射光分布不同。当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时，散射光的强度在各个方向的分布均匀一致，称Rayleighae散射。当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。当固定检测角度与发射光的波长时，散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。应选择适当的光源强度、反应时间、测量角度及光源的波长。另外，要注意保证抗原浓度合适。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。(二)技术要求　速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动态测定方法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1～2min即可完成。(三)速率散射比浊法（ratenephelometry）累计时间复合物产生总量产生速率5453020抗原抗体复合物形成时间与速率的关系当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比，随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多，抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。技术要求(三)方法评价散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的准确性。但仪器和试剂价格比较贵,对抗体的质量要求很高。用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚，使透射光和散射光即出现显著变化。三、免疫胶乳比浊法（一）原理：三、免疫胶乳比浊法（一）原理：第二节自动化免疫比浊分析（一）BN特种蛋白分析测定系统该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种改良。以发光二极管作为光源，检测前向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电二极
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可以用来定量测定抗原的试验是 A 火箭电泳
B 间接凝集抑制试验 C 免疫电泳
D 免疫荧光技术 E 肥达氏反应
A 火箭电泳火箭免疫电泳又称作单向电泳扩散免疫沉淀试验,是将电泳与单向扩散结合的一种免疫技术,实际上是加速度的单向扩散.将抗体溶入琼脂后制板,在琼脂板的一侧打孔,加入待检样品及不同浓度的标准抗原.电泳时抗原在含定量抗体的琼脂中向正极移动,并形成浓度梯度,在适宜的部位形成火箭状的沉淀峰.沉淀峰的高度与抗原的含量成正比,故可定量测定抗原.
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火箭免疫电泳终点应A．火箭峰呈云雾状B．火箭峰呈圆形C．火箭峰尖而清晰D．火箭峰顶部与基底同宽E．火
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火箭免疫电泳终点应A．火箭峰呈云雾状B．火箭峰呈圆形C．火箭峰尖而清晰D．火箭峰顶部与基底同宽E．火箭峰呈纺锤状请帮忙给出正确答案和分析，谢谢！
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免疫学检验第七章
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官方公共微信上海联硕生物科技有限公司：火箭免疫电泳(RIE)中国教育装备采购网围观1999次我要分享　　火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis，RIE)是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术，实质上是加速的单向扩散试验。实验时，将抗体混合于琼脂中，样品孔中的抗原置于负极端，电泳时抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。当琼脂中抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相关，因此用已知标准抗原作对照，抗原浓度为横坐标，峰的高度为纵坐标，绘制标准曲线，待测样品浓度就可根据沉淀峰的高度在标准曲线中计算获得。如果将琼脂中加入固定浓度的抗原时，便可检测抗体的含量(称为反向火箭电泳)。火箭免疫电泳图　　①②③④为标准抗原;⑤⑥为　　影响火箭电泳的因素很多，因此在操作时应注意以下几点：　　1.所用琼脂应是无电渗或电渗很小的，否则火箭形状不规则。　　2.注意电泳终点时间的确定，如火箭电泳顶部呈不清晰的云雾状或圆形，则表示未达终点。　　3.待测数量多时，电泳板应先置上搭桥并开启电源(电流要小)后加样，否则易形成宽底峰形，使定量不准。　　4.作IgG定量时，由于抗原和抗体的性质相同，火箭峰因电渗呈纺锤状，为了纠正这种现象，可用甲醛与IgG上的氨基结合(甲酰化)，使本来带两性电荷的IgG变为只带负电荷，加快了电泳速度，抵消了电渗作用，而出现伸向正极的火箭峰。　　火箭电泳作为抗原定量只能测定鹏/ml以上的含量，如低于此水平则难以形成可见的沉淀峰。加入少量125I标记的标准抗原共同电泳，则可在含抗体的琼脂中形成不可见的火箭峰，经洗涤干燥后，用X线胶片显影，可出现放射显影，这就是目前采用的免疫自显影技术，根据自显影火箭峰降低的程度(竞争法)可计算出抗原的浓度。免疫白显影技术可测出ng/ml的抗原浓度。来源：上海联硕生物科技有限公司作者：相关阅读
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