是不是任何一个细胞在任何时候都能发生基因突变和基因重组组

第十四章 基因重组与基因工程
一、选择题
(一) A 型选择题
1 .关于基因重组的描述,下列哪项是错误的
A .外源 DNA 片段不能在原核细胞中表达
B .外源 DNA 片段可以在原核细胞中表达
C .基因重组可引起自然突变
D .整段 DNA 能在不同物种间进行交换
E .整段的 DNA 能在细胞间进行交换
2 .在分子生物学领域,重组 DNA 技术又称
A .蛋白质工程 B .酶工程 C .细胞工程
D .基因工程 E . DNA 工程
3 .在重组 DNA 技术中,不常见到的酶是
A . DNA 连接酶 B . DNA 聚合酶 C .限制性核酸内切酶
D .反转录酶 E .拓扑异构酶
4 .由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为
A .转化 B .转导 C .转染
D .转座 E .结合
5 .可识别特异 DNA 序列,并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类酶称为
A .限制性核酸外切酶 B .限制性核酸内切酶
C .非限制性核酸外切酶 D .非限制性核酸内切酶    
E . DNA 内切酶
6 . cDNA 是指
A .在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA
B .在体内经转录合成的与 DNA 互补的 DNA
C .在体内经转录合成的与 DNA 互补的 RNA
D .在体外经反转录合成的与 DNA 互补的 DNA
E .在体外经转录合成的与 RNA 互补的 RNA
7 .基因组 DNA 代表一个细胞或生物体的
A .部分遗传信息 B .整套遗传信息
C .可转录基因的遗传信息 D .非转录基因的遗传信息
E .可表达基因的遗传信息
8 .下列有关质粒的描述正确的是
A .质粒分子本身不含有具备复制功能的遗传结构
B .质粒是存在于酵母染色体外的小型环状双链 DNA 分子
C .质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构,能在宿主细胞独立自主进行复制
D .质粒一般不携带遗传信息,不会赋予宿主细胞一些遗传性状
E .以上说法都不正确
9 .重组 DNA 技术常用的限制性核酸内切酶为
A . Ⅰ 类酶 B . Ⅱ 类酶 C . Ⅲ 类酶
D . Ⅳ 类酶 E . Ⅴ 类酶
10 .在重组 DNA 技术中催化形成重组 DNA 分子的酶是
A . DNA 聚合酶 B . RNA 连接酶 C .核酸内切酶
E .反转录酶 E . DNA 连接酶
11 .已知人乳腺来源的某长度为 1.5 kb 的基因序列,获取该目的基因的最方便的方 法是
A .化学合成法 B .基因组文库法 C . c DNA 文库法
D .聚合酶链反应 E .差异显示法
12 .限制性核酸内切酶 Hind Ⅲ 切割 5′-AA GCTT-3′ 后产生
A .平端 B . 5 ′ 突出黏端 C . 3′ 突出黏端
D .钝性末端 E .配伍 黏 末端
13 .构建基因组 DNA 文库时,首先需分离细胞的
A .染色体 DNA B .线粒体 DNA C . mRNA
d . tRNA E . rRNA
14 .以质粒为载体,将外源基因导入受体菌的过程称
A .转化 B .转染 C .感染
D .转导 E .转位
15 .关于 E . coli 表达载体的描述错误的是
A .有大肠杆菌适宜的选择标志
B .有两套复制原点及选择标记,分别在大肠杆菌和真核细胞中起作用
C .具有能调控转录、产生大量 mRNA 的强启动子
D .含有适当的翻译控制序列
E .还有合理设计的多克隆位点
16 . α- 互补筛选法属于
A .抗药性标志筛选 B .酶联免疫筛选 C .标志补救筛选
D .原位杂交筛选 E . Southern 杂交筛选
17 .下列常用于原核表达体系的是
A .酵母细胞 B .昆虫细胞 C .哺乳类细胞
D .真菌 E .大肠杆菌
18 .真核表达载体不含有
A .选择标记 B .启动子 C .转录翻译终止信号
D . mRNA 加 poly A 信号 E . 3′- 加帽信号
19 .就分于结构而论,质粒一般是
A .环状双链 DNA 分子 B .环状单链 DNA 分子
C .环状单链 RNA 分子 D .线状双链 DNA 分子
E .线状单链 DNA 分子
20 .一般不用作基因工程载体的是
A .质粒 DNA B .昆虫病毒 DNA C .基因组 DNA
D .噬菌体 DNA E .逆转录病毒 DNA
21 .用于重组 DNA 的限制性核酸内切酶识别核苷酸序列的
A .正超螺旋结构 B .负超螺旋结构 C . α 螺旋结构
D .回文结构 E .锌指结构
22 .用来鉴定 DNA 的技术是
A . Northern 印迹杂交 B . Western 印迹杂交
C . Southern 印迹杂交 D .离子交换层析 E . SDS-PAGE
23 .建 cDNA 文库时,首先需分离细胞的
A .染色体 DNA B .线粒体 DNA C .总 m RNA
D . t RNA E . r RNA
24 .如果克隆的基因能够在宿主菌中表达,且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补,那我们可以
A .用营养突变菌株进行筛选 B .用营养完全株进行筛选
C .通过 α- 互补进行蓝白筛选 D .免疫组化筛选 E .抗药性标志
25 .限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生
A . 3′- 磷酸基末端和 5′- 羟基末端
B . 5′- 磷酸基末端和 3′- 羟基末端
C . 3′- 磷酸基末端和 5′- 磷酸基末端
D . 5′- 羟基末端和 3′- 羟基末端
E .以上都不是
26 .针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因而设计的筛选方法称
A .非直接选择法 B .直接选择法 C .免疫学方法
D .免疫化学方法 E .酶免检测分析
27 .无性繁殖依赖 DNA 载体的最基本性质是
A .自我转录能力 B .自我表达能力 C .自我复制能力
D .青霉素抗性 E .卡那霉素抗性
28 .分子遗传学领域里的分子克隆是指
A .细菌克隆 B . DNA 克隆 C . RNA 克隆
D .动物克隆 E .植物克隆
29 .重组 DNA 的连接方式不包括
A .平头末端连接 B .黏性末端连接 C .同聚物加尾连接
D .人工接头连接 E .黏性末端和平头末端连接
30 .下列哪种方法不能获得目的基因
A .化学合成法 B .基因组 DNA 文库 C . cDNA 文库
D .物理方法 E . PCR 法
B 型选择题
A .超螺旋结构 B .启动子序列 C . S-D 序列
D .回文序列 E . α - 螺旋结构
1 .限制性核酸内切酶识别的序列通常是
2 .在转录过程中 RNA 聚合酶识别并结合的特异序列是
3 . 16S 核糖体特异结合的特异序列是
4 .属蛋白质二级结构的是
A .基因载体的切割 B .目的基因与载体的连接
C . DNA 重组子导入受体细胞 D .表达目的基因编码的蛋白质
E .筛选、繁殖含有 DNA 重组分子的受体细胞
5 .可以产生重组 DNA 分子的是
6 .需要使用限制性内切酶的是
7 .需要应用转化或转染等技术手段的是
8 .需要选择原核或真核表达体系的是
A .同源重组 B .特异位点重组 C .转座重组
D .人工重组 E .随机重组
9 .在体外将不同来源的 DNA 连接起来称
10 .在两个同源序列间进行 DNA 片段交换称
11 .由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称
A .接合 B .转化 C .转导 D .转座 E .细胞融合
12 .质粒 DNA 从一个细菌转移到另一个细菌称
13 .由噬菌体感染宿主时伴随的基因转移称
14 .自动获取外源 DNA ,使细胞获得新的遗传表型称
A .碱性磷酸酶 B . DNA 连接酶 C . DNA 聚合酶
D .逆转录酶 E .限制性核酸内切酶
15 .能识别特异序列、切割 DNA 的酶是
16 .催化合成 cDNA 的是
17 .来源不同的 DNA 拼接成重组 DNA 分子需
A . 5′ 及 3′ 突出末端 B . 3′ 突出末端 C . 5′ 突出末端
D . 5′ 或 3′ 突出末端 E .平头末端
18 .某识别 6 核苷酸序列的限制性核酸内切酶切割 5′-AGCTAAGCTT-3′ 产生
19 .某识别 6 核苷酸序列的限制性核酸内切酶切割 5′-CTGCAGTCTA-3′ 产生
20 .某识别 6 核苷酸序列的限制性核酸内切酶切割 5′-AGGATATCAC-3′ 产生
X 型选择题
1 . DNA 克隆包括下列哪些基本步骤
A .目的基因的获得 B .选择和构建合适的克隆载体
C .筛选转化菌 D .将重组 DNA 导入受体菌
E .外源基因和载体连接
2 .关于质粒 DNA 的叙述正确的是
A .是真核生物基因组 DNA 的组成部分
B . 具有独立复制功能,能在宿主细胞独立的进行复制
C .不 含有各种抗性筛选标记
D . 含有感兴趣的目的 DNA
E . 具有编码蛋白质的功能
3 .下述操作可能用于 DNA 克隆过程的是
A . PCR 获得目的 DNA B .限制性核酸内切酶切割目的 DNA 和载体
C .核酸分子杂交 D .细菌的生长和繁殖
E . RT-PCR 制备 cDNA
4 .下述序列属于完全回文结构的是
A . 5′-CCTAGG-3′ B . 5′-CCATGG-3′
C . 5′-CCTTGG-3′ D . 5′-CGATCG-3′
E . 5′-CGTTCG-3′
5 .可用作克隆基因载体的 DNA 有
A . 细菌质粒 DNA B . 噬菌体 DNA C . 病毒 DNA
D . 大肠杆菌基因组 DNA E . 真核细胞基因组 DNA
6 .在分子克隆中,目的 DNA 可来自
A .原核细胞染色体 DNA B .基因组 DNA 文库
C .真核细胞 mRNA 反转录获得的 cDNA
D .聚合酶链式反应 E .人工化学合成的 DNA
7 .下列哪些方法可应用于重组体的筛选
A . 抗药性标记筛选 B . 营养突变菌株筛选 C . α- 互补筛选
D . 原位杂交筛选 E . 免疫化学方法筛选
8 .根据重组 DNA 时所采用的载体性质不同,将重组 DNA 分子导入受体细胞的方式有
A . 接合 B . 转化 C .转染 D . 转座 E . 感染
9 .一个典型的插入序列包括
A . 两个分离的反向重复序列
B .一个表达产物能引起转座的转座酶编码基因
C .反向重复序列的侧翼有正向重复序列
D . 抗生素抗性等有用基因
E . 以上都包括
10 .外源基因与载体的连接方式有
A . 黏性末端连接 B .平端连接 C .同聚物加尾连接
D . 人工接头连接 E . 以上都没有
11 .分子医学包括的领域有
A . 疾病基因的发现与克隆 B .基因诊断 C .基因治疗
D . 遗传病的预防 E . 生物制药
12 .在基因工程的中所需的工具酶有
A . 限制性核酸外切酶 B . DNA 连接酶 C .逆转录酶
D . 限制性核酸内切酶 E . 碱性磷酸酶
二、是非题
1 .载体和目的基因只有利用一种限制性核酸内切酶切割,才能进行重组。
2 .来源于真核的外源 DNA 片段只能在真核细胞中表达。
3 .重组 DNA 技术中常用的限制性核酸内切酶为Ⅱ类酶。
4 .通过自动获取或人为地供给外源 DNA ,使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型,这就是转导作用。
5 .所有的限制性核酸内切酶切割 DNA 后均产生 5′ 磷酸基和 3′ 羟基的末端。
6 .可充当克隆载体的 DNA 分子有质粒 DNA 、噬菌体 DNA 、病毒 DNA 和细菌 DNA 。
7 .任何质粒均可通过接合作用从一个细胞(细菌)转移至另一个细胞(细菌)。
8 .免疫球蛋白基因的重排属于同源重组类型。
9 .重组 DNA 技术所采用的宿主菌应为限制酶和重组酶缺陷型。
10 .噬菌体感染宿主时伴随发生的基因转移属转导作用。
11 .质粒是存在于酵母染色体外的小型环状双链 DNA 分子。
12 .有些限制性核酸内切酶识别序列不完全相同,但切割 DNA 后可产生相同类型的黏性末端,且可进行相互连接。
三、填空题
1 . 细菌的基因转移与重组有 ________ 、 ________ 、 ________ 和 ________ 四种方式。
2 . 当噬菌体感染宿主时会有两种结局:一种是 _________ ,另一种是 ________ 。
3 . 转座是由 ________ 和 ________ 介导的基因移位和重排。
4 . 限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生的末端有 ________ 和 ________ 。
5 . 目的 DNA 有两种类型,即 ________ 和 ________ 。
6 . 可充当克隆载体的 DNA 分子有 ________ 、 ________ 和 ________ 。
7 . 蓝白筛选时,若外源基因被插入到载体 lac Z 基因内,那么在含有 X-gal 的培养基上生长时会出现 ________ 色菌落,若在 lac Z 基因内无外源基因的插入,在相同的培养条件下呈现 ________ 色菌落。
8 . 基因操作中的目的基因获取的途径和来源有 ________ 、 ________ 、 ________ 和 ________ 。
9 .根据重组 DNA 时所采用的载体性质不同,将重组体 DNA 导入受体细胞的方式有 ________ 、 ________ 及 ________ 。
10 .重组体的筛选可采取 ________ 法和 ________ 法。
11 .重组体筛选的 直接选择法包括 ________ 、 ________ 及 _______ 。
12 .基因工程的表达系统包括 ________ 和 ________ 。
13 .基因工程的真核表达系统包括 ________ 、 ________ 和 ________ 三类。
14 . 分子医学包含的领域及内容有 ________ 、 ________ 、 ________ 和 ________ 。
15 . DNA 重组包括 ________ 、 ________ 和 ________ 等类型。
四、名词解释
1 . homologous recombination
2 . conjugation
3 . transformation
4 . transduction
5 . site specific recombination
6 . transposition
7 . DNA clone
8 . genetic engineering
9 . restriction endonuclease
10 . compatible end
11 . target gene
12 . gene vector
13 . plasmid
14 . competent cell
五、问答题
1 .获取目的基因的方式有哪些?
2 .试述基因重组的基本过程。
3 . 适用于 E . coli 表达体系 的表达载体必须具备哪些条件?
4 .基因工程的原核表达体系有何优缺点?
5 . 简述基因工程生产胰岛素的基本过程。
一、选择题
(一) A 型选择题
1 . A 2 . D 3 . E 4 . D 5 . B 6 . A 7 . B 8 . C 9 . B 10 . E 11 . D 12 . B 13 . A 14 . A 15 . B 16 . C 17 . E 18 . E 19 . A 20 . C 21 . D 22 . C 23 . C 24 . A 25 . B 26 . B 27 . C 28 . B 29 . E 30 . D
(二) B 型选择题
1 . D 2 . B 3 . C 4 . E 5 . B 6 . A 7 . C 8 . D 9 . D 10 . A 11 . C 12 . A 13 . C 14 . B 15 . E 16 . D 17 . B 18 . C 19 . B 20 . E
(三) X 型选择题
1 . ABCDE 2 . BE 3 . ABCDE 4 . ABD 5 . ABC 6 . ABCDE 7 . ABCDE 8 . BCE 9 . ABC 10 . ABCD 11 . ABCDE 12 . BCDE
二、是非题
1 . B 2 . B 3 . A 4 . B 5 . A 6 . B 7 . B 8 . B 9 . A 10 . A 11 . B 12 . A
三、填空题
1 . 接合 转化 转导 细胞融合
2 . 溶菌生长途径 溶源菌生长途径
3 . 插入序列 转座子
4 . 黏性末端 平头末端
5 . cDNA 基因组 DNA
6 . 质粒 DNA 噬菌体 DNA 病毒 DNA
8 . 化学合成法 基因组 DNA 文库 cDNA 文库 PCR
9 .转化 转染 感染
10 . 直接选择 非直接选择
11 .抗药性标志选择 标志补救 分子杂交法
12 . 原核表达体系 真核表达体系
13 . 酵母 昆虫 哺乳类动物细胞
14 . 疾病基因的发现与克隆 生物制药 基因诊断与治疗 遗传病的预防
15 .同源 重组 特异位点 重组 转座 重组
四、名词解释
1 同源重组,指发生在同源序列间的重组,它通过链的断裂和再连接,在两个 DNA 分子同源序列间进行单链或双链片段的交换,是最基本的 DNA 重组方式,又称基本重组。
2 .接合作用,指当细胞与细胞、或细菌与细菌通过菌毛相互接触时,质粒 DNA 从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)的 DNA 转移。
3 .转化作用,指通过自动获取或人为地供给外源 DNA ,使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。
4 .转导作用,指当病毒从被感染的细胞(供体)释放出来、再次感染另一细胞(受体)时,发生在供体细胞与受体细胞之间的 DNA 转移及基因重组。
5 .位点 特异重组,是由整合酶催化,在两个 DNA 序列的特异位点间发生的整合。
6 . 转座,是由插入序列和转座子介导的基因移位或重排。
7 . DNA 克隆,指应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA )与载体 DNA 结合成一具有自我复制能力的 DNA 分子(复制子),继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增、提取获得大量同一 DNA 分子,也称基因克隆或重组 DNA 。
8 .基因工程,指实现基因克隆所采用的方法及相关的工作,又称重组 DNA 技术或重组 DNA 工艺学。
9 .限制性核酸内切酶,是识别 DNA 的特异序列、 并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类内切酶。
10 .配伍未端,指有些限制性核酸内切酶虽然识别序列不完全相同,但切割 DNA 后,产生相同类型的粘性末端,可进行相互连接。
11 .目的基因,指应用重组 DNA 技术的目的有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或 DNA 序列,或是为获得感兴趣基因的表达产物 ―― 蛋白质。这些感兴趣的基因或 DNA 序列就是目的基因,又称目的 DNA 。
12 .基因载体,又称克隆载体,是为 “ 携带 ” 感兴趣的外源 DNA ,实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些 DNA 分子。
13 .质粒,是存在于细菌染色体外的小型环状双链 DNA 分子,小的 2~3kb ,大的可达数百 kb 。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构,能在宿主细胞独立自主地进行复制,并在细胞分裂时保持恒地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息,所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因此,质粒 DNA 的自我复制功能及所携带的遗传信息在基因重组 DNA 操作中都是极为有用的。
14 .感受态细胞,指细菌经适当的理化方法处理后,处于最适摄取和容忍重组体的状态。
五、问答题
1 .获取目的基因的方式有哪些?
答:获取目的基因大致有如下几种途径或来源:( 1 )化学合成法:如果已知某种基因的核苷酸序列,或根据某种基因产物的氨基酸序列推导出为其编码的核苷酸序列,可以利用 DNA 合成仪通过化学合成法合成目的基因。一般用于小分子活性多肽基因的合成。 ( 2 )基因组 DNA 文库: 利用 限制性核酸内切酶将组织或细胞染色体 DNA 切割后,与适当载体连接后转入受体菌,这些受体菌包含了这个组织或细胞的几乎所有基因组 DNA 信息,也包括我们感兴趣的基因。再采用适当方法从基因组 DNA 文库中筛选出目的基因。( 3 ) cDNA 文库:以 mRNA 为模板,利用反转录酶合成与 mRNA 互补的 DNA ,即单链 cDNA ,再复制成双链 cDNA 片段,与适当载体连接后转入受体菌,这些受体菌包含了这个组织或细胞所表达的各种 mRNA 信息,称 cDNA 文库。然后,采用适当方法从 cDNA 文库中筛选出目的 cDNA 。 ( 4 )聚合酶链反应( PCR ): PCR 是一种在体外利用酶促反应获得特异序列的 基因组 DNA 或 cDNA 的专门技术。要获得目的基因,除 PCR 技术的通用条件外,还必须知道目的基因 5′ 、 3′ 端的各一段核苷酸序列及其它相关条件,以设计出合适的引物。
2 .试述基因重组的基本过程。
答:基因重组的基本过程为:( 1 )分: 分离出目的基因和基因载体的选择、构建。 ( 2 )切:用 限制性核酸内切酶将载体和目的基因切成使二者易连接的状态。 ( 3 )接:用 DNA 连接酶把目的基因和载体连接成重组体。 ( 4 )转:把 重组 DNA 分子转入受体细胞内进行表达。 ( 5 )筛:筛选出含有 重组 DNA 的受体细胞并使其扩增,以获得大量的基因表达产物。
3 .适用于 E . coli 表达体系的表达载体必须具备哪些条件?
答:运用 E . coli 表达有用的蛋白质必须使构建的 表达载体符合下述标准: ① 含大肠杆菌适宜的选择标志; ② 具有能调控转录、产生大量 mRNA 的强启动子,如 lac 、 tac 启动子或其它启动子序列; ③ 含适当的翻译控制序列,如核糖体结合位点和翻译起始点等; ④ 含有合理设计的多接头克隆位点,以确保目的基因按一定方向与载体正确衔接。
4 .基因工程的原核表达体系有何优缺点?
答:原核表达体系 E . coli 是当前采用最多的原核表达体系,其优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产工艺,而且人们运用 E . coli 表达外源基因已经有 20 多年的经验。缺点: ① 由于缺乏转录后加工机制, E . coli 表达体系只能表达克隆的 cDNA ,不宜表达真核基因组 DNA ; ② 由于缺乏适当的翻译后加工机制, E . coli 表达体系表达的真核蛋白质不能形成适当的折叠或进行糖基化修饰; ③ 表达的蛋白质常常形成不溶性的包涵体,欲使其具有活性尚需进行复杂的复性处理; ④ 很难在 E . coli 表达体系表达大量的可溶性蛋白。
5 .简述基因工程生产胰岛素的基本过程。
答:基因工程药物的生产必须首先获得目的基因,例如,用双链法人工合成人胰岛素基因,该基因全部采用人的偏爱密码子,并将 A 链与 B 链用一可以形成典型的β转角的甘 - 甘 - 赖三肽连接起来。然后用限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶将目的基因插入合适的载体质粒或噬菌体中,并转入大肠杆菌或其他宿主菌(细胞),以便大量扩增目的基因,对目的基因要进行测序验证。在获得正确的目的基因之后,就可以使目的基因在原核生物系统或真核生物系统进行表达。选择的基因表达系统要具有高效表达目的蛋白的生物功能,并能获得较高表达量又较易分离纯化。将目的基因与表达载体重组,转入合适的表达系统,经筛选获得高效表达的基因工程菌(或工程细胞)。确立适合目的基因高效表达的发酵工艺,以获得高产量的目的蛋白,并进行表达产物的分离纯化与鉴定 。
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&基因重组是不是不可能发生在原核细胞?
Overload丶唺
是基因重组发生在细胞核,原核细胞没细胞核只有拟核物质,所以基因只能复制不能重组.而且基因重组需要染色体,而原核细胞也没有
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