Western转膜实用技巧，赶紧Get起来！
Western实验中，经过SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜”步骤，从PAGE胶转移到膜上固定，才能用各种方法进行Western
Blot的检测和显示，而且为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散，转膜要尽快进行。转膜是对Western最终结果影响最大的一步，转膜质量的好坏直接决定了实验结果的好坏。下面介绍一些实用技巧，赶紧Get起来吧。
膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑，例如做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的膜是不可取的，因为可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的蛋白含量不确定，从而影响最终结果的可靠性。通常小于20KDa的蛋白选择0.2um的膜，而大于20KDa的蛋白选择0.45um的膜。常见的膜有NC膜和PVDF膜，区别如下：
灵敏度和分辨率
80-110ug/cm2
125-200ug/cm2
干的NC膜易脆
机械强度高
溶剂耐受性
缓冲液润湿，避免气泡
使用前100%甲醇润湿
常规染色，可用放射性和非放射性检测
常规染色，可用考马斯亮蓝染色，
ECL检测，快速免疫检测
2. 转膜条件
不同分子量的蛋白质选择的凝胶浓度和转膜时间也是不同的，原则上高分子量蛋白用低浓度胶，转膜时间较长，而低分子量蛋白用高浓度胶分离，采用较短的转膜时间，下表可供参考：
分子量(kDa)
转膜时间（h)
80---140 
转膜操作注意事项
避免直接接触膜，全程戴手套并使用镊子，手指上的油脂与蛋白会封闭转膜效率并易产生背景污斑；
PVDF膜具有疏水性，使用之前需用甲醇浸泡；
排列三明治时，尽量用干净的玻璃棒或试管赶走胶和膜之间的气泡，避免转膜不均匀；
确认裁剪的膜和滤纸与凝胶尺寸相同，否则会导致电流不能通过膜，从而转膜无效；
鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力，从而产生较高背景，故如果选择鸡来源的抗体，最好使用**纤维素膜（NC膜）。
转膜后丽春红染色
为检测转膜是否成功，可以用丽春红进行染色，将膜放入TBST洗一次，然后置于丽春红染色工作液中，室温下摇动染色5分钟，大量的水洗膜，直至水变清无色，蛋白条带清晰。
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以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。求助，Western-Blot转膜不成功 - 实验交流 - 生物秀
标题: 求助，Western-Blot转膜不成功
摘要: [求助，Western-Blot转膜不成功] 各位虫友，做了两次Western-Blot转膜都不成功，想各位帮我指点一下可能的原因，这些是我做实验的时候的条件细节：目的蛋白大小100kD左右，用的是湿转法，电转缓冲液（5×）的配方是：Glycine 15 1gTris
5g定容至一升，使用前取200mL，再加700mL水和1 关键词:[转膜 甲醇 缓冲液 电泳 分子量 甘氨酸 负极]……
各位朋友，做了两次Western-Blot转膜都不成功，想各位帮我指点一下可能的原因，这些是我做实验的时候的条件细节：
目的蛋白大小100kD左右，用的是湿转法，电转缓冲液（5×）的配方是：
Glycine 15.1g
定容至一升，使用前取200mL，再加700mL水和100mL甲醇，4度备用
滤纸（3mm滤纸用两边各用两层）比膜和胶大比较多，之前看过一些人说滤纸要比膜小，但是好像大多数人都说对于湿转来说没有关系。
膜用的是0.45um的PVDF膜，这个有人说要用0.22um的，是这样吗？
电转于4度冰柜中进行，80V电压，时间2h，用立春红染色，但是什么都没有，我没有用预染Marker。
看大多数人都说湿转是非常容易成功的，我的实验操作哪里有问题吗？请指教，谢谢！回复也有可能是转过头……回复电压低点
怎么不加个预染marker回复我用的是NC膜，一般喜欢用300mA横流转1个小时或者90分钟（大分子），从来没有出过问题。
没用过PVDF膜，所以不知道你的电压条件什么的是不是合适，不过PVDF膜需要先用甲醇活化正电基团，不知道你活化了没有。回复刚刚看了一个应助，还想问一个问题，你的胶和膜的叠放顺序有没有放反？就是胶应该放在负极那面，而膜应该在正极这侧，放反了的话蛋白就转到buffer里去了回复对于上面的问题：
1.正负极是确认过的，膜也在使用前用甲醇活化了
2.不用预染Marker是因为一开始打算用可逆的铜染法进行染色的，所以没有买预染的Marker，但是后来没有染色成功。这也是我想请教的事情，关于铜染法，为什么我染色出来什么都没有啊
继续等待大家回答回复个人觉得转膜置于4度下不行的，我们一般都用冰包被，可能是你反应体系温度过高，导致凝胶溶解回复应该是膜>胶>滤纸
滤纸最大的话，电流会只从滤纸走，相当于短路回复SDS含量过高，降低10倍即可回复有些经验性的东西看看对你能否有用处
SDS-PAGE，首先看你的电泳有没有跑好，将两块胶同样上样电泳，最好是在一个电泳槽里面电泳。伯乐的mini槽蛮好的，又快功能又多，我们一直用。一块用于考马斯亮蓝染色，另一块用于转膜，切记。一定要能在你的对照胶上找到你的蛋白质。
切胶做三明治。PVDF膜在纯甲醇中活化30s（用镊子按到甲醇里），取出放入转移缓存液中备用。切胶尽量大小合适一点，别拿整块胶上去搞，膜与胶大小一致，滤纸小一点即可，千万不能大了，大了绝对是会短路的（因为你是要把它压紧的，湿滤纸接触后电阻小，直接绕过胶了）。整个切胶过程要湿润，切好了胶立即放入转移缓存液中，所有过程戴手套进行，镊子夹取时不能夹到中间。
三明治顺序：负极－滤纸（2－3层）－胶－PVDF膜－滤纸－正极，每一层都要赶走气泡，气泡很容易发现，用玻璃棒擀，一定不要用枪头戳（很容易戳坏滤纸，尤其是胶）
夹紧过程要果断迅速，不然会错位。
转膜。首先，转膜缓冲液要充足，配方要准确，其中涉及到SDS和甲醇的比例，这两者是消长关系。一般认为，如果是小分子量的蛋白比如十几KD，甲醇比例要高（我加了30%的甲醇就彻底没有加SDS），大分子量的则SDS要高，甲醇要低（这是某公司技术总监说的经验）。
其次，是转膜的缓冲液要冷，大家都知道要预冷，可是整个过程产热很严重的，条件差一点的也要放4度冰箱，一般用“冰水浴”（冰水浴传热效果好），伯乐的mini槽都配有冰盒，建议拆掉一包冰袋，把胶状物倒到冰盒里面冻成冰，尤其要注意不能倒太多，容易把冰盒撑变形，最多70%即可（一般冰块很容易就化光了，冰袋持久一些）。
最后，转膜条件。一定要找到最佳的转膜条件，这个能借鉴的很多，根据实际情况自己摸索一下，电压和时间，注意要转完全啊，最好是能带着预染Marker一起，这就方便多了。有个流程上说小于120KD的蛋白250mAmp for 4 hours or 500mAmp for 2 hours，参考一下。
清洗平衡，将PVDF膜放入1X TBST中浸泡5分钟。摇床摇动。这一步很重要，从含有甲醇的有机相中转入水相中的过渡。
封闭，将膜面（载有蛋白的一面）朝上，放入封闭液中，4度过夜封闭。
至此，前半段基本完成，这时就已经很晚了，兄弟，可以回去睡觉了回复同意7楼意见，有可能是过热了，你转膜的时候放冰或者冰袋吗，转完以后冰或者冰袋融化了吗？要是融化了，就可能是过热，要随时观察热了就要放冰。保持温度。回复个人觉得你的蛋白分子量在100KD左右，是可以不用0.22um的PVDF膜的，因为0.22um的膜适用于转20KD左右或以下的蛋白适用，否则就浪费了，呵呵回复
怎么不加个预染marker 用预染marker只要膜上有的话，相应的目的蛋白就转移过克了吗回复不知道你丽春红过期了没有？我试过丽春红没染出来，但仍然能够转膜后做后续后能够显影出来结果的情况。回复甲醇的作用是什么？回复三楼 说的怎么像是EMSA啊回复湿转时间电压不够。建议试试100V 2到2.5h。回复个人觉得是不是转过了，我也用的0.45um的PVDF膜，恒流100mA（开始18V左右，结束时大概25V左右）100kD转一个80min就可以了，还有我的电转缓冲液不如你的浓度高，个人经验而已仅供参考。回复1,你的甘氨酸量有点少，我们做实验的时候1倍的电泳液就加14.4g的甘氨酸。
2，滤纸应该与膜的大小一致，否则滤纸连接在一起是电流就从滤纸穿过，就减少了从膜上穿过的电流，影响转膜效果
3我们在转膜的时候都是恒定电流，120mA, 转3个小时，效果很好，你可以试试。
希望对你的实验有帮助！回复100KD的蛋白我做过，转印Buffer里不用加，另外我用的是100V，60min。你可以试试看。
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Western-blot转膜老是中间转不上去，请教什么原因？
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问题已关闭悬赏丁当:2
1.最近western转膜的时候两边的marker是转上的，但中间的蛋白或者上的marker就是花掉的，电泳跑胶是正常的，最后曝光成的图片就成了下面这样2，我的转膜条件试过300mA，1h30min，转出来膜是凉的，应该不是太热的原因，3，同时转2张膜，就只有一张膜这样4，转膜液是tris 3.03g，gly14.4，甲醇200ml，ddH2O800ml，5，近一个月每次转膜出现这种问题，因为实验是最近做WB的人只有3个人，他们只有几次出现了这个问题，我们也是共用试剂，在线等，请大家帮忙分析，到底是什么原因呢？
不知道邀请谁？试试他们
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要么胶没制好 要么膜和胶之间有气泡
让分离胶多凝一些时间！
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荒诞不鸡要么胶没制好 要么膜和胶之间有气泡
让分离胶多凝一些时间！可是跑完胶中间的marker是好的呀
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亭亭lll 1.最近western转膜的时候两边的marker是转上的，但中间的蛋白或者上的marker就是花掉的，电泳跑胶是正常的，最后曝光成的图片就成了下面这样2，我的转膜条件试过300mA，1h30min，转出来膜是凉的，应该不是太热的原因，3，同时转2张膜，就只有一张膜这样4，转膜液是tris 3.03g，gly14.4，甲醇200ml，ddH2O800ml，5，近一个月每次转膜出现这种问题，因为实验是最近做WB的人只有3个人，他们只有几次出现了这个问题，我们也是共用试剂，在线等，请大家帮忙分析，到底是什么原因呢？有下面几种可能性：1，转膜夹过紧，导致中间的胶压变形，转到膜上就花了。2，仪器问题，接别的实验室转膜设备试试。
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感觉是跑胶没问题，转膜的时候局部没贴上，应该是胶有气泡或者不平……楼上两位说的都挺对的
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cheff0412 edited on
转膜夹太紧的可能性大
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换个转膜仪，夹子，海绵试试。
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关于丁香园& 【求助】我的WB为什么总是转膜不上
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【求助】我的WB为什么总是转膜不上
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【求助】我的WB为什么总是转膜不上
我现在正在做关于脂质代谢酶类蛋白表达的试验，包括CPT-1以及PPARa。在蛋白提取过程中，我用了RIPA强裂解液裂解大鼠肝脏组织，想提取总蛋白，来做CPT-1(它是表达在膜蛋白上的)；然后配置低渗、高渗液提取核蛋白PPARa。在跑SDS-PAGE时每次染胶都非常漂亮，但是用100v,2h转膜却始终转不成功，丽春红染色后都是一片空白，只有溴酚兰印迹。请大家帮我讨论一下，我的问题到底是出在提取还是转膜？另外今天加了TAKARA的高分子量MARKER也没有转上，真是晕。操作应该没有太大问题的。大家帮帮我啊，谢谢了！！
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你的电转条件是湿转还是半干,如果是湿转,试试变换一下转膜条件,注意一下电转液中甲醇的量,因为它是用来洗脱蛋白上结合的SDS的,而SDS多了很可能就转不上膜.一般甲醇量在15%左右.另外PVDF膜要用甲醇浸透,并且平衡时间一定要够.
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谢谢，我用的是湿转。转膜前是用甲醇活化PVDF膜。我得 电转液是5*电移缓冲液200ml，甲醇200ml，600ml蒸馏水。这样还是转不上。
UID 114495
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我们实验室其他人用的同样的电转液都能转上，我得5*电转液的配方是14.65g的甘氨酸，29.1g的Tris碱，1.85g的SDS，加水至1L.
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1。&在跑SDS-PAGE时每次染胶都非常漂亮&，说明电泳没什么问题。
2。“实验室其他人用的同样的电转液都能转上&,说明电转液没问题。
3。“TAKARA的高分子量MARKER也没有转上“，说明问题的确出在转膜上。
4。“100v,2h转膜“，时间、电压都没问题。
4。“转膜前是用甲醇活化PVDF膜“，膜处理没问题。
1。转膜电极反了，我也干过那样的事，当然转不到膜上。
2。转膜是否在低温下进行？
UID 114495
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我们的电极是颜色对应，不会错的。而且是在冰中转膜的。你们认为我的蛋白提取会不会又问题？
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我们实验室现在也出现了这样的问题,小分子量的能转过去,但是大分子量的蛋白转不过去,立春红染色也只能看到电泳泳道,看不到蛋白带,是不是SDS有问题呢?条件和实验操作步骤我认为没有问题,我实在想不出问题出在哪里了,
请问,SDS对整个实验过程影响有多大?
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可用分 3785
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1.是不是电极弄翻了
2.可能是转膜时间有点长
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我倒是觉得你的样品制备出问题了......
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内部短路的话，胶上的marker应该继续存在的吧？？？& 【求助】Western-Blotting全湿转膜
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【求助】Western-Blotting全湿转膜
UID 114509
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【求助】Western-Blotting全湿转膜
我用的是amershem公司的Mini电泳槽,做WB用的是全湿法
缓冲液是25 mM Tris, 192 mM 甘氨酸, 20% (v/v)甲醇 (pH 8.3)；
胶大概是8cm x 7.3 cm，厚度0.75mm。
参数：恒流200mA，2 hours。。ＰＶＤＦ膜
我的目的蛋白有四个：160KD； 125KD ； 68KD ；（内参）43KD；
第一次和第二次实验都是在没什么理性认识的情况下做的，属于处女作，转移的挺好的，
后来的几次，直到现在一直转膜不成功（有了实践经验和理论认识了，反而做不出来了），，郁闷啊！！急啊！！
主要问题是：　转移后，膜用立春红染色没发现蛋白（通过他组实验证明立春红没问题），转移后的胶用考染，也没有蛋白，蛋白跑到哪里去了？？
我在怀疑蛋白漏到缓冲液去了，，但是为什么呢？不明白。。
可以肯定的是条件（比如缓冲液，电流，时间）和做成功的前两次没有变化
我想请问可能原因会有哪些？？我的ＰＡＧＥ可以确定也没问题的，转移缓冲液也每次用新的。而且头两次做的时候转移缓冲液用两次都没关系的。。
我自己分析如下，不知当否：
一，我的ＰＶＤＦ膜没处理好，所以胶上的蛋白转是转走了，但没转到膜上？？　我的ＰＶＤＦ膜处理反复改过几次，记得刚开始时是当开始ＰＡＧＥ时就把ＰＶＤＦ浸泡在甲醇里了，时间很长，后来听别人说泡时间长了不好，而且说明书上说纯甲醇浸泡几秒钟就可以了，然后在缓冲液中平衡，也没说平衡时间，只说平衡至膜在缓冲液中漂起来就可以了。。但是我试了几次，根本就漂不起来啊。。然后请教别人，他们说平衡３０min 的也有，平衡１０min的也有，平衡15min 的也有，到底平衡长了好还是短了好？？是不是这个原因？ＰＶＤＦ膜到底该如何处理？？
第二，膜和胶的大小问题，刚开始那次膜是很大的，两张滤纸比胶大，但是都比膜小，膜可以保证滤纸不短路。。后来为了省膜，改为一样大，没有成功，但是再改回来，也不成功，，到底怎么做才对？？短路指的是什么意思？我发现好多同行都解释不清到底是怎么短路，怎么做才对？我也糊涂了
第三，做的时候，做三名治在电泳夹里做好，还是先做成三名治再放到夹里好？？说明书上是在一个大托盘里盛上缓冲液，把电泳夹放在托盘里，然后海绵滤纸胶滤纸海绵等一层一层做上去的，但是由于缓冲液比较多胶容易漂浮移动，膜也容易漂浮移动，这样做有影响吗？
另外的问题：我们做三名治的专用滤纸没有了，这种滤纸很贵，５０小张就５００多，，听说普通的滤纸就可以，三层效果就好，可以吗？？
转移缓冲液如果用两次的话，第二次加多少甲醇呢？？还和第一次一样加２００ml吗？？
另附上我的protocol,请指教，看看偶的操作有没有问题。。谢谢
提前制冰或冰袋；提前浸泡PVDF膜
1．将电泳缓冲液分倒入一个托盘中一部分，然后将电泳槽夹板，泡末板，滤纸都放入托盘中，夹板的阴极（黑色一半）朝下平放，然后将一块泡末板放在黑色夹板上，用液体浸透赶走气泡，再将滤纸放在泡末板上面，用液体浸透赶走气泡(可用玻棒赶)，再将PAGE凝胶小心铺在滤纸上，用液体浸透赶走气泡，再将膜按照凝胶标记的同处也剪个斜角做标记（为以后好分辨正反面），然后放在缓冲液里，凝胶的上面；用液体浸透赶走气泡，同样的方法再放上滤纸和两层夹板（注意赶气泡，注意阴阳极，凝胶靠阴极，PVDF膜靠阳极）；将夹板的阳极（红色一半）盖上夹紧后插入电泳槽中。
2．电泳槽中的夹板上的电泳液要加满。注意是否漏液。盖好电泳槽盖子；
3．电泳：打开电源，条件：恒流：225m A , 2-2.5小时（最成功一次的转移条件）
4．电泳停止后，将PVDF膜卸下，准备免疫印迹。（为了用于检测，PVDF膜可以先用丽春红染色观察转移效果，也为后面孵育前剪目的蛋白条带提供参考；同时转移后的PAGE凝胶考染检测转移效果）。
还有个版本（最近用的）
转移电泳设备：电泳槽，泡末板，专用滤纸，PVDF膜（提前将PVDF膜剪成8×9cm大小，滤纸剪的和平衡后的PAGE胶（7×8 cm）差不多大小，并剪角做标记（胶切去溴芬蓝外部分，左下剪角标记，膜比胶稍大，滤纸稍小些，并按照胶孔道位置用铅笔在PVDF膜上做标记，有利于下一步剪膜）。
步骤：（切记不要有气泡）
1．将电泳缓冲液分倒入一个托盘中一部分，然后将电泳槽夹板，海绵，滤纸都放入托盘中，夹板的阴极（黑色一半）朝下平放，然后将一块海绵放在黑色夹板上，用液体浸透赶走气泡，再将滤纸放在海绵上面，用液体浸透赶走气泡(可用玻棒赶)，再将PAGE凝胶小心铺在滤纸上（保证一次铺好，不要再移动），用液体浸透赶走气泡(可用玻棒赶)，再将PVDF膜按照与凝胶相同的标记位置（为以后好分辨正反面）放在凝胶的上面（一旦接触胶就不要移动，避免重复移动膜）；用液体浸透赶走气泡，同样的方法再放上滤纸和两层夹板（注意赶气泡，注意阴阳极，凝胶靠阴极，PVDF膜靠阳极）；将夹板的阳极（红色一半）盖上夹紧后插入电泳槽中。红色面向泳槽外。
2．电泳槽中的夹板上的电泳液要加满。注意是否漏液。盖好电泳槽盖子；
3．电泳：打开电源，条件：恒流：225m A , 2.25小时.
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以上的所有问题,可以归结到一个问题上,就是你的理论还没有到一定的高度!
当你完全理解了WESTERN 的每一步的意义后,任何问题你多能解释,也可以随时改变你的条件,只要是你认为合理的(这要在你理论很结实的情况下)
当胶和膜都没有蛋白的话,如果你能保证你的蛋白在没转膜前是有的,那么一定是你在转膜中出现问题了!
可能情况,你电极有没有搞错,你的胶和膜的顺序对吗!
有没有短路,短路是指电流不通过你的胶和膜的公共部分,而直接通过某个部位!也就是你的胶和膜的公共部分的电流是没有的或只有很小的电流!不能抵制由于热运动的力!
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因为我前两次做过是成功的，
蛋白转膜前是有的，因为我用其他实验室的半干转也能转膜成功，我也知道是转移出了问题，
电极不会搞错的，胶和膜的顺序也没错．这些简单原因我已经排除了，谢谢楼上同仁了！！
你所说的短路就是指两张滤纸接触了，对吧？？
仍然郁闷中！！
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考虑一下,如果电极无错,应该是转过了,我跟你做的差不多,歪打正着转成了一次,以后也都不成,而且我的PVDF膜用丽春红染色后,整个膜一片红,洗不干净,也不知道怎么回事.
普通的滤纸可以的,不一定是三层,只要能夹紧就好,没那么教条的.
如果每次转的胶的面积不一样大的话,所用的转移的时间也是不一样的
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原帖由 tangxin_80 于
16:43 发表
考虑一下,如果电极无错,应该是转过了,我跟你做的差不多,歪打正着转成了一次,以后也都不成,而且我的PVDF膜用丽春红染色后,整个膜一片红,洗不干净,也不知道怎么回事.
普通的滤纸可以的,不一定是三层,只要能夹紧就好, ... 也考虑过是转过的原因，但是我把电流降到１５０mA,２小时，仍然不行的啊，还要再降吗？？？我怀疑是漏掉了．．．你遇到过膜　胶都没有的情况吗？？
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主要问题是：　转移后，膜用立春红染色没发现蛋白（通过他组实验证明立春红没问题），转移后的胶用考染，也没有蛋白，蛋白跑到哪里去了？？
我自己分析如下，不知当否：
一，我的ＰＶＤＦ膜没处理好。到底平衡长了好还是短了好？？是不是这个原因？ＰＶＤＦ膜到底该如何处理？？
第二，膜和胶的大小问题，刚开始那次膜是很大的，两张滤纸比胶大，但是都比膜小，膜可以保证滤纸不短路。。后来为了省膜，改为一样大，没有成功，但是再改回来，也不成功，，到底怎么做才对？？短路指的是什么意思？
另外的问题：我们做三名治的专用滤纸没有了，这种滤纸很贵，５０小张就５００多，，听说普通的滤纸就可以，三层效果就好，可以吗？？
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1、PVDF膜并需要怎么处理，放在缓冲液里面5min就足够了。关键是你的pvdf膜质量如何？
2、所谓短路，是指三明治的上层和下层的滤纸搭到一起去了。所以每次修剪的时候，把滤纸剪得比胶和PVDF膜都小，防止上下两层的滤纸搭到一起造成短路。
3、如果条件许可，请使用invitrogen的彩色marker，转膜是否成功，只需要看marker就知道了。转膜成功的话，转到pvdf膜上的marker色彩鲜艳，非常漂亮。
4、我的转膜条件：
转膜缓冲液：同上述。能反复使用达5次以上！
注意：电泳时，放在冰上，电泳仪用冰包围住。并观察电路是否通畅。
转膜条件：260mA，恒流100min。
做了好多次，从来没有听说还有转膜转不上的。
祝你顺利！
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原帖由 tangxin_80 于
16:45 发表
主要问题是：　转移后，膜用立春红染色没发现蛋白（通过他组实验证明立春红没问题），转移后的胶用考染，也没有蛋白，蛋白跑到哪里去了？？
我自己分析如下，不知当否：
一，我的ＰＶＤＦ膜没处理好。到底平衡长了好还是短了好？？是不是这个原因？ＰＶＤＦ膜到底该 ... 1.我用的PVDF膜和去年11月份用的是一批,而且我说了前两次转的效果也不错..所以PVDF膜质量应该没问题,而且最近我让其他实验室用这种膜做过半干转,也没问题,效果很好啊.
2.如果是指这个,那短路的问题在我这里是不存在的
3.预染MARKER,我用过,也是前两次转时都可以转过来,可这几次MARKER也转不过来,,哈哈，我要哭了
4.转移电泳加冰降温,我也做到了.哈哈,没用的,,
是的，仁兄,这种情况许多高人都说不可能,但就是在我这里发生了。....哈哈啊
你的转膜条件：260mA，恒流100min。请问你的protein分子量多大???用的是什么电泳仪,和我的一样吗??
信誉分 100
可用分 6353
阅读权限 255
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我们转移的protein从15KD到65KD，都没有问题。
还有一个最笨的方法：让其他同学或其他实验室同学同时帮忙做个平行对照。
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哦,谢谢,那我的蛋白是160KD,而我用的电流是200mA,其实最近我150,200,225,250mA恒流都用过的,都不行,而最初的两次200和225都可以转过来
你们用的是什么牌子的转移装置??我最近发现我的转移槽的三明知很松,转移槽卡不牢了，可能是因为海绵用久了薄了,,和这个有关系吗??
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我们转移的protein从15KD到65KD，都没有问题。
还有一个最笨的方法：让其他同学或其他实验室同学同时帮忙做个平行对照。
我们的装置是biorad的，呵呵。
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一面红,一面黑的那中迷你电泳装置,对吗??
那我的160KD,你建议条件是什么,电流是否应该加大??还是说200MA可以适用大部分蛋白???