在真核，原核生物中，MPF和SPF分别如何发挥作用？
细胞周期运转的调控因子
（1）促S期因子（相关信息F）
SPF是促成DNA合成的启动因子，仅出现在S期细胞质中，由细胞融合实验证明（实验见习题）
（2）早熟染色体凝聚现象（premature chromosome condensation，PCC）
以M期的Hela细胞与G1期、S期、G2期的细胞相互融合，发现那些原来不会出现形态的间期细胞，核居然多现提早凝集的染色体，形态各异，由此揭示M期细胞中具有诱导染色质凝集的活性因子，称为成熟促进因子（MPF）
PCC现象不受物种分类所限制，如:人、牛、马、鸡、鱼、昆虫的细胞之间都能诱导PCC，因此，MPF在真核细胞中普遍存在。
（3）MPF的分化本质和功能——CDK激酶
现在已知从酵母到人类的所有真核细胞的M期启动是受同一机制调控，即MPF，其生化本质是蛋白激酶，可催化若干种蛋白发生磷酸化，而因子这些蛋白的结构和功能状态的改变，从而导致细胞内代谢活动的变化，有活性的MPF实质是由p34CDK2和Cyclin两部分组成，p34CDK2 是cdc2基因的产...
细胞周期运转的调控因子
（1）促S期因子（相关信息F）
SPF是促成DNA合成的启动因子，仅出现在S期细胞质中，由细胞融合实验证明（实验见习题）
（2）早熟染色体凝聚现象（premature chromosome condensation，PCC）
以M期的Hela细胞与G1期、S期、G2期的细胞相互融合，发现那些原来不会出现形态的间期细胞，核居然多现提早凝集的染色体，形态各异，由此揭示M期细胞中具有诱导染色质凝集的活性因子，称为成熟促进因子（MPF）
PCC现象不受物种分类所限制，如:人、牛、马、鸡、鱼、昆虫的细胞之间都能诱导PCC，因此，MPF在真核细胞中普遍存在。
（3）MPF的分化本质和功能——CDK激酶
现在已知从酵母到人类的所有真核细胞的M期启动是受同一机制调控，即MPF，其生化本质是蛋白激酶，可催化若干种蛋白发生磷酸化，而因子这些蛋白的结构和功能状态的改变，从而导致细胞内代谢活动的变化，有活性的MPF实质是由p34CDK2和Cyclin两部分组成，p34CDK2 是cdc2基因的产物p34CDK2蛋白，其单独存在时无激酶活性，当进入M期与细胞周期蛋白cyclin结合形成复合体，然后由week/mik1激酶和CDK激酶催化CDK上的Tyr14（第14位苏氨酸）、Tyr15、Tyr161磷酸化，随后在磷酸化酶Cdc25c的催化下，使前两者发生去磷酸化，使前两者发生去磷酸化，从而表现出活性，但到分裂分裂中期后，由于Cyclin的迅速脱离，经后期促进因子APC作用，泛素化途径降解，导致其激酶活性丧失，所以p34CDK2是MPF的催化单位（？？），而cyclin则是MPF的调节亚单位。
深入研究已知，这类蛋白激酶复合体对细胞周期运行有重要作用，被喻为细胞周期运转的引擎，细胞周期蛋白cyclin现已知有A B C D E F G H等多种，其共同特点是细胞周期中呈现含量增长与消失的周期性变化规律，而且在不同阶段其为主的类型也不同。
P34CDK2激酶类型又称为周期蛋白依赖性激酶CDK，现在已知11种编码CDK的基因，各种CDK蛋白的作用时期不同，它们在细胞周期中含量不出现波动，仅发生去磷酸化瘀磷酸化的周期性变化的规律改变，故使得CDK激酶活性出现周期变化，从而导致了细胞中一系列事件发生。现认为促S期因子SPFCyclin+CDK2促M期因子=cyclinB/A+CDC(??)
现在还探清了细胞周期中DNA复制仅发生一次的原因，已知orc,cdc6,cdc45和Ncm等蛋白质参与DNA的起始调控作用，后者是DNA复制执照因子（？？）的主要成分:仅在G，S期存在，以及与CyclinE-CK2激酶活性有关。
其他答案（共1个回答）
的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器、用品：同常规细胞培养
2、试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液
三、操作步骤
1、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10μg/ml。 ...
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时相关信息的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器、用品：同常规细胞培养
2、试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液
三、操作步骤
1、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10μg/ml。
2、44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。
3、48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。
4、常规染色体制片（见第三部分：染色体技术）。
5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。
6、弃去2×SSC液，流水冲洗。
7、Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。
8、镜检100个分裂相，计第一、二、三、四细胞期分裂指数。
细胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小时）
附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十双蒸水10ml 4℃下避光保存。
（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，柠檬酸三钠·2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。
还有其它具体相关的你自己上
去看，上面很多专家的，一般24小时以内都会有很多朋友网友的提问
参考资料：
例如用在二倍体植株上,花药离体培养得到单倍体的植株
秋水仙素得到四倍体植株.
细胞内cAMP浓度增加对细胞增殖有抑制作用，凡能使细胞内cAMP增高的因素都能抑制细胞的增殖，降低细胞生长速度；反之，凡能使细胞内cAMP含量下降的因素都能促进...
阻碍着丝粒的分裂和纺锤体的形成。作用于中期，
具体描述：
秋水仙素是诱导多倍体效果最好的药剂之一。它的作用机理是：当细胞进行分裂时，一方面能...
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【求助】请问测细胞周期做流式前期一定要酒精固定吗？
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这个帖子发布于2年零79天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:10
我看了下BD 的试剂盒，它的步骤是细胞悬液离心收集，然后有试剂A（胰酶）作用10 min（这步说明书上说是破坏细胞骨架和细胞膜），试剂B（胰酶抑制剂+RNA酶）作用十分钟，最后PI液作用 10min（3小时内4度）BD没有说到酒精固定，我有点疑问。酒精固定的作用是增加细胞通透性，如果我前期做固定，是不是可以省去试剂A（胰酶）这步，请高手指教，谢谢
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你好，我再请教下细节的问题，固定的时候你是先配好75%酒精，然后将细胞悬液用枪头打进去？还是用吸管缓慢滴入细胞悬液中边滴变摇匀的？
另外 考虑到细胞悬液有一定的体积，如果事先配75%酒精，最后酒精浓度就达不到75%了，我上次配83.3%的酒精，枪头500微升打进去的 。
酒精浓度有讲究吗？ 有些帖子说85%，甚至还有95%的？
此外你是细胞悬液和酒精混合后直接方放-20度吗？酒精需要事先预冷吗？
谢谢指教看出兄弟是摸索过周期试验的人了。我说下我自己的一些经验。1、跟凋亡相比，周期操作相对简单，但是结果往往不是那么好看。2、周期的关键点是两个，一来细胞状态一定要好。二来固定这一步非常重要。当然试剂盒也要好。比如BD就一个盒子的那个试剂盒，大概500多元做100次，足够很多人用很久了。3、说起固定，先加1ml预冷的PBS把细胞重悬，吹散成单细胞悬液，这一步很重要。然后再将3ml的预冷的无水乙醇逐滴加入到里面。然后混匀，可以在灯光下看到分散的小颗粒。然后放在冰箱里即可。4、规范是这样的，但是，不用预冷的PBS和无水乙醇，问题也不大，我做过对照。另外，pbs把细胞吹散这一步一定要有。后面无水乙醇不一定逐滴加，毕竟有3ml，逐滴加要加到何时，毕竟一般要同时做好几个组。我都是慢慢用滴管加进去。这个逐滴就是为了怕一下子一团无水酒精加入会让细胞结块，可一开始已经用pbs吹散细胞了。希望有帮助。
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还是严格按照试剂盒说明书操作比较好，否则可能会出现不可预期或者难以解释的现象或者结果！
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请严格按照说明书进行操作。如果要修改，需要进行预试验。
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BD的酶应该特殊处理过，所以不需要再通透了
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cheff0412 edited on
用酒精的的话，不是用来固定的，是脱水用的，脱水后是要放100%的乙醇中冻与-20度的。固定是用4%的4度过夜。你想保存细胞的话收集后离心，用PBS洗一次，去血清，再离心，去上清，将沉淀保存液氮中，或是直接冻到-80度就可以了
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lsj1988 BD的酶应该特殊处理过，所以不需要再通透了确实是这样，我省去酒精固定这一步，也能做出来
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wangyan888sdo 用酒精的的话，不是用来固定的，是脱水用的，脱水后是要放100%的乙醇中冻与-20度的。固定是用4%的4度过夜。你想保存细胞的话收集后离心，用PBS洗一次，去血清，再离心，去上清，将沉淀保存液氮中，或是直接冻到-80度就可以了 你好，做周期固定不多把，另外我想请教一下，酒精脱水的目的是什么？
直接放到-80或液氮会不会对细胞损伤很大对后面结果有影响？我看过BD说明书，他说放到99%乙醇及干冰混合液中，再放到-80，谢谢指教
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你好，做周期固定不多把，另外我想请教一下，酒精脱水的目的是什么？
直接放到-80或液氮会不会对细胞损伤很大对后面结果有影响？我看过BD说明书，他说放到99%乙醇及干冰混合液中，再放到-80，谢谢指教周期中，75%的酒精作用就是起到固定。一般固定放在-4或者-20里面，如果短时间，那么前者，如果要放几个月，那最好放在-20. 曾尝试2个月后用-20固定的做周期，效果还是很好。另外，BD试剂盒的周期，我们买的都是一个瓶子，到时候固定好后直接加就行，更方便。
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hengyuanxiang 周期中，75%的酒精作用就是起到固定。一般固定放在-4或者-20里面，如果短时间，那么前者，如果要放几个月，那最好放在-20. 曾尝试2个月后用-20固定的做周期，效果还是很好。另外，BD试剂盒的周期，我们买的都是一个瓶子，到时候固定好后直接加就行，更方便。 你好，我再请教下细节的问题，固定的时候你是先配好75%酒精，然后将细胞悬液用枪头打进去？还是用吸管缓慢滴入细胞悬液中边滴变摇匀的？
另外 考虑到细胞悬液有一定的体积，如果事先配75%酒精，最后酒精浓度就达不到75%了，我上次配83.3%的酒精，枪头500微升打进去的 。
酒精浓度有讲究吗？ 有些帖子说85%，甚至还有95%的？
此外你是细胞悬液和酒精混合后直接方放-20度吗？酒精需要事先预冷吗？
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请问下你买的细胞周期试剂盒需要多少钱？我也准备做呢，谢谢啦
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豆豆家家 请问下你买的细胞周期试剂盒需要多少钱？我也准备做呢，谢谢啦 货号340242
BD测周期试剂盒，当时价格忘了，貌似2000左右，可以做40 tests，质量应该没的说，光看包装就知道
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另外 考虑到细胞悬液有一定的体积，如果事先配75%酒精，最后酒精浓度就达不到75%了，我上次配83.3%的酒精，枪头500微升打进去的 。
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此外你是细胞悬液和酒精混合后直接方放-20度吗？酒精需要事先预冷吗？
谢谢指教看出兄弟是摸索过周期试验的人了。我说下我自己的一些经验。1、跟凋亡相比，周期操作相对简单，但是结果往往不是那么好看。2、周期的关键点是两个，一来细胞状态一定要好。二来固定这一步非常重要。当然试剂盒也要好。比如BD就一个盒子的那个试剂盒，大概500多元做100次，足够很多人用很久了。3、说起固定，先加1ml预冷的PBS把细胞重悬，吹散成单细胞悬液，这一步很重要。然后再将3ml的预冷的无水乙醇逐滴加入到里面。然后混匀，可以在灯光下看到分散的小颗粒。然后放在冰箱里即可。4、规范是这样的，但是，不用预冷的PBS和无水乙醇，问题也不大，我做过对照。另外，pbs把细胞吹散这一步一定要有。后面无水乙醇不一定逐滴加，毕竟有3ml，逐滴加要加到何时，毕竟一般要同时做好几个组。我都是慢慢用滴管加进去。这个逐滴就是为了怕一下子一团无水酒精加入会让细胞结块，可一开始已经用pbs吹散细胞了。希望有帮助。
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hengyuanxiang 看出兄弟是摸索过周期试验的人了。我说下我自己的一些经验。1、跟凋亡相比，周期操作相对简单，但是结果往往不是那么好看。2、周期的关键点是两个，一来细胞状态一定要好。二来固定这一步非常重要。当然试剂盒也要好。比如BD就一个盒子的那个试剂盒，大概500多元做100次，足够很多人用很久了。3、说起固定，先加1ml预冷的PBS把细胞重悬，吹散成单细胞悬液，这一步很重要。然后再将3ml的预冷的无水乙醇逐滴加入到里面。然后混匀，可以在灯光下看到分散的小颗粒。然后放在冰箱里即可。4、规范是这样的，但是，不用预冷的PBS和无水乙醇，问题也不大，我做过对照。另外，pbs把细胞吹散这一步一定要有。后面无水乙醇不一定逐滴加，毕竟有3ml，逐滴加要加到何时，毕竟一般要同时做好几个组。我都是慢慢用滴管加进去。这个逐滴就是为了怕一下子一团无水酒精加入会让细胞结块，可一开始已经用pbs吹散细胞了。希望有帮助。谢谢战友的经验，对我这方面的知识有很多长进
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请问前辈，既然在用乙醇固定时目的主要是脱水，那么脱水的目的又是什么呢，对以后的实验操作有什么必要的影响么
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yj1984ren edited on
我买的是BD货号550825的试剂盒，里面包含了PI和RNA A混合试剂，做起来很方便，下面是中文说明书，给有需要的战友
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小红赛确实是这样，我省去酒精固定这一步，也能做出来真的吗？
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