做小鼠实验,分子生物学实验仪器里面的Ad是什么意思

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小鼠SNP遗传检测方法的建立及生化标记位点的分子生物学研究
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【中文摘要】:
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【中文摘要】遗传检测技术是遗传质量控制的重要手段之一,现有的检测方法不能满足科学发展的需要。近年来,随着人类基因组研究的不断深入,有关SNP的研究越来越受到重视,但小鼠SNP研究,特别是将SNP应用于近交系小鼠遗传检测的研究比较少。为此,我们建立小鼠SNP遗传检测方法,并对SNP与生化标记位点多态性的关联性进行研究,进一步完善我国实验动物遗传检测技术,提高检测水平。
本研究分为两个部分:(1)小鼠SNP遗传检测方法的建立
采用单管双向等位基因专一性扩增(single-tube bi-directional allele specific amplification,SB-ASA)方法,首先对5个国外品系的近交系小鼠的16个SNP位点进行了检测,并进行测序验证,同时设计双盲实验验证该方法的可靠性。结果5个小鼠品系的16个SNP位点都成功地进行了分型,与测序的结果完全一致。双盲实验通过3个SNP位点综合分析,可以准确地鉴别这5个小鼠品系。此外,我们对国内培育的4个品系的近交系小鼠也进行了检测,最终确定了4个品系的16个SNP位点等位基因,而且还绘制了9个品系小鼠的16个SNP位点的等位基因图谱。这些研究不仅为各小鼠品系的遗传鉴定和品系间的鉴别提供了实验依据,而且还为近交系小鼠遗传检测提供了新方法。
(2)生化标记位点的分子生物学研究
本实验尝试从分子生物学水平去探索近交系小鼠生化标记位点多态性的机理,以及与SNP的关联性。我们选择了Car2、Gpi1和Hbb3个生化遗传检测位点,分别从生化电泳、DNA、RNA和翻译蛋白4个方面进行了分析研究。结果发现Car2基因第38位Gin/His之间的转换是引起所有小鼠品系形成Car2~a和Car2~b两种电泳表型的原因;Gpi1基因的第247位氨基酸残基Phe/Leu之间的转换可能是形成Gpi1~a和Gpi1~b不同等位基因的原因;Hbb基因的第13、20和139位氨基酸残基Cys/Gly、Ser/Ala和Thr/Ala之间的转换是形成Hbb~d和Hbb~s两种电泳表型的原因。
通过以上研究,建立了近交系小鼠的SNP遗传质量检测方法,确定了国内4个品系的16个SNP位点等位基因,绘制了9个品系小鼠的SNP位点等位基因图谱。同时,通过分子生物学手段对生化标记位点多态性的形成机制进行研究,初步阐明三个生化位点多态的形成机理。本研究对提高我国实验动物遗传检测技术水平,促进生命科学发展具有重要意义。
【简要目录】:
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即送15丁当
这个基因敲除小鼠能做什么分子生物学实验设计??愁死了。
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这个帖子发布于11年零301天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
从国外带来的基因敲除小鼠,这个基因不是什么转录因子,不知道它下游会有什么基因。敲除鼠的心脏有表型异常。就是研究这种异常发生的原因。国外的相关文献都是从形态学水平做,把各种基因敲除,然后观察表型,所以各种基因对应自己的表型。好像要说明问题,发育生物学需要这样的设计路线。但是我想从细胞到分子水平上做些东西。真的不知道怎么设计,愁死了。发育生物学不是疾病模型,它需要时空概念来验证,所以我自己都觉得这个试验设计作不成或者不能tell a good story,大家帮帮我。
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1.首先,你得到了基因敲除的小鼠,不知道你是否知道这是什么基因?(一般打靶在基因组上研究得很透,先把基因克隆到载体上,在分子水平上研究其表达调控,看其表达什么蛋白;再转染细胞,在细胞水平上研究蛋白对细胞的影响;最后,才看在组织和个体上的影响)建议你再把这个基因敲除小鼠的研究背景搞到,比如paper什么的,如果有关系,作者可能会给你详细解释其思路等。2.正如你所说的一样,基因是时空表达的。很难做到像一般的疾病模型那样看到明显的表型,一般在组织切片上看微小的变化。3.一般做基因敲除小鼠都会有paper的,猜想你是想用基因敲除的小鼠来做疾病模型,来研究某种单基因疾病的发病机理及其基因治疗的吧!!!(等待你的详细介绍)
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schorr edited on
首先我同意楼上关于一定有这个基因前期工作文献的看法。一定可以从中得到启发。根据你的这些信息我提两点,因为你谈得不具体,而且在网上,所以我就泛泛而谈了,见谅。可以提取KO mouse的心肌细胞 -- 假设是心肌细胞有异常,跟正常细胞作功能上和基因表达上的比较。可以用siRNA下调在正常细胞中下调该基因,与control比较,前面的这些指标。还可以把该基因转染或病毒转导到心肌细胞--这方面研究还不少呢。这是有关表型的细胞水平的研究。还可以从干细胞分化到心肌细胞然后做。关于机制,可以用HeLa或鼠胚胎成纤维细胞(MEF)做与上面类似的研究。祝好运!
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freeduck30,您说这个小鼠本身心脏是有异常表型的不是吗?在了解了该转基因小鼠被敲除基因的背景文献后,可以从小鼠的表型角度入手,看看形态学的和病理的改变都有什么,然后:1,看看此鼠的表型是否对应某种已知的人类疾病,然后查阅相关文献,从该疾病的病因学方面思考;2,观察到的组织病理学表现,以及电镜下的细胞结构变化,这些变化所对应的分子通路变化。在不知该基因的上下游分子的情况下,通过这些,看看能否把问题收缩在某种相关的疾病或细胞病理改变上,然后再检查与这种改变相关的分子是否与您的目的基因有关系。
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要谢谢大家,给了我很好的建议。tbg谈到的哪些设计,我在前期也都想过,但是老板是做心脏发育研究的,所以我认为一种细胞平面的培养不能很好说明问题。你们有谁知道共培养的操作吗?tbg提到小鼠胚胎成纤维细胞,不知道你是否了解胚胎间充质细胞?再次打扰,多谢。
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If you have gene knock out mouse ,you can do a lot of research.
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The mothed of Co-culture please read this paper
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freeduck, 你是说mesenchymal cells吗?我不熟悉。我说到MEF,原因是对某个蛋白/基因的机制研究,可以用最基础的最一般 generalized的细胞。
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太谢谢大家了。那个基因芯片的做法我也想到了,现在有好多国内文章都是这样做的,但是继续往下就没想法了。测出来就只是测出来了。因为很多测出来的基因和你的敲除的基因并没有什么关系。或者大家在一个网络中互相影响。另外我还想问一句,genechip如果有异常就能说明那些是下游基因吗,总觉得有点牵强。谢谢大家。
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