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老外给我们馈赠的质粒，并不是纯质粒，不是点在滤纸上的质粒，而是用个1.5ml的EP管装了大约1ml的东西，于是我高度怀疑是菌液，怎么验证这个东西是菌液而不是质粒？？是直接把老外给的这个菌液直接涂布在LB板上吗？？还是还需要做转化？？还是需要重新活化菌？？具体怎么操作？？
如果是重新活化菌，我只听说按照1ul菌：1000ulLB加。但是具体步骤应该怎么做呢？？首先这个LB应该是含有相应抗生素的吧，然后直接放在摇床上摇吗？？要摇多少个小时？？摇完以后做什么？？？是直接提质粒吗？？还是摇完以后再去找感受态做转化？？
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生物秀贵宾
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感觉应该是质粒，菌液是不太好运输的。你问一下人家肯定会告诉你的。再说抗性都不知道没法做的
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问一下好了，这样效率最高。。
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你跑个电泳，质粒可以看出来，不过，建议还是问一下。
该用户从未签到
如果你要摇菌，最好先活化一下，就是涂在抗性平板上，然后在液体LB（抗性）摇菌，液体的体积不要超过试管三分之一，我们一般是过夜，12-14H，有时10H也可以要出来，不要超过16小时！
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回复 1-楼 的帖子
既然是别人馈赠的质粒，那肯定不会不知道是什么质粒。既然知道质粒，那质粒的性质就是知道的，如果不知道也可以问或者查。
可以同时检测，当他给的是质粒，电泳检测；
也可以当他给当是菌液，活化后提取质粒，抗性根据质粒可以知道。
但是我个人意见，应该是菌液，很少看见有人质粒溶1ml的，除非是打算给你们用很久很久的量：）
该用户从未签到
回复: 馈赠的不是纯质粒而是菌液，怎么从中提？
1.菌液应该是浑浊的, 质粒与水无异.
2.如果是质粒需要做转化, 一般是转入DH5a中, 但一定要清楚质粒的抗性.
3.最快的鉴别方法, 是使用分光光度计,我想你会用.
4.如果是菌液, 长途运输可能加有一定量的甘油, 应该是粘稠的.
另外菌液的活化, 用10微升的接种物加入1-2ML的LB中好了,每必要用1000ML的LB.也可先涂板,但知道抗药基因是必要的.
秀基因 +10
该用户从未签到
楼主你好 我想问问你是怎么向老外要质粒的 能不能介绍一下具体流程呀 我是新手 多谢帮忙呀
我的QQ：&&多谢帮忙呀 呵呵
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菌是浑浊的，质粒溶在水里和TE里是无色的，如果你不相信是质粒，你可以涂在LB上检测啊！向老外要东西你要把自己说成是这方面的专家，并且并简要的说一下你的研究，如果你说你是学生谁会给你，他们的眼光都向上看的。
秀基因 +10
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&&产品介绍
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系统中，目的基因被克隆到pET质粒载体上，受强噬菌体T7转录及翻译信号控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。T7 RNA聚合酶机制十分有效：充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时，目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。尽管该系统极为强大，却仍能很容易地通过改变诱导物的浓度来降低表达水平。降低表达水平常用以提高某些目的蛋白的可溶部分产量。该系统的另一个重要优点是在非诱导条件下，可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录。用不含有T7 RNA聚合酶的宿主菌克隆目的基因，即可解决免因目的蛋白表达对宿主细胞的毒性造成的质粒不稳定难题。两种T7启动子以及多种拥有不同抑制本底表达水平的宿主细胞共同构成了一个极为灵活而有效的系统，使各种目的蛋白都能得以最优化表达。
&&可选质粒
最经典的pET-28a, pET-30a和pET-32a质粒，应用最广，参考文献最多。
下表列出三个经典系列载体主要特性。其中命名后带有(+)的载体含有f1复制区，可以制备单链DNA，适合突变及测序等应用。
: T7lac启动子，高效及严谨型控制表达水平；N端 His.Tag/T7.Tag融合标签，可利用His.Tag进行金属离子螯合层析纯化表达蛋白，也可利用T7.Tag融合标签进行基于抗体结合的亲和纯化；含凝血酶（Thrombin）蛋白酶切位点；
：T7lac启动子；N端 His.Tag/S.Tag融合标签，可利用His.Tag进行金属离子螯合层析纯化表达蛋白，也可利用S.Tag融合标签进行亲和纯化及高灵敏度定量检测；含凝血酶（Thrombin）及肠激酶（Enterokinase）蛋白酶切位点；
：T7lac启动子；Trx融合蛋白表达载体，帮助表达蛋白形成二硫键，增加蛋白溶解性及活性；His.Tag/S.Tag融合标签。
注：T7?Tag11 = 11aa融合标签T7?Tag260 = 260aa融合标签
signal seq. = 用于细胞周质定位信号序列
I = 内部标签N = N-端标签C = 可选的C-端标签
蛋白酶酶切位点： T = 凝血酶E = 肠激酶X = Xa因子
&&pET系统构建操作流程
&&重组质粒和菌株的保存建议
在实验室里保存重组菌株的时候，为了挑菌和传代方便，我们常用LB平板保存在4℃冰箱中，需要提质粒和表达接种的时候，就直接从平板上挑菌，但是这种方法对于重组质粒的稳定性不利，容易出现质粒丢失、表达水平不稳定、菌株退化乃至发生污染等情况。我们建议：
1、长期存放菌株和pET重组子应该存在甘油里，－70℃存放。但是要注意高浓度甘油(& 10%)会导致质粒不稳定。请尽量保持甘油浓度8％。
2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株（带DE3的大肠杆菌）中，请尽量使用不能表达T7 RNA聚合酶的大肠杆菌菌株（非DE3的大肠杆菌），大提质粒也请选用非表达型菌株进行。
Novagen-the Gold Standard in Protein Expression
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【分享】海外赠送质粒等如何顺利过海关
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这个帖子发布于9年零227天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
前段时间，美国赠送给我一个质粒，经联邦快递到达深圳海关，公司通知我要根据货物情况到相关行政职能部门办理入境申请，或者是省卫生厅科学教育处办理《人体物质出入境申请表》或《科研样品出入境申请表》 和《医用特殊物品准出入境证明》，或者是农业厅检疫处办理相关入境申请，然后报送深圳海关，再由海关办理其他清关手续（海关还要请专家审查，非常麻烦）。
听起来很简单，等我请本单位出函给卫生厅，卫生厅说不是医学用品不归他们管，到农业厅，农业厅说我们只作植物苗木的检疫，质粒不予受理，屡次受挫我不得不征求本省出入境检验检疫局的帮忙，省出入境检疫局申请从深圳调到本省还需要上级批准，层层关口让我焦头烂额，一晃1个月过去了，没有一点音信。
无奈之下，我到处搜索相关信息，发现一个好政策，使我顺利通过，当天清关，现分享如下。在国家质检总局主页http://www./上搜索“国质检卫函〔”，出现如下政策（http://wsjyjgs./ywzl/jycy/.htm）。==============================================
关于对《出入境特殊物品卫生检疫管理规定》（83号令）的 补充通知 急件
国质检卫函〔号各直属检验检疫局：
《出入境特殊物品卫生检疫管理规定》（83号令）已于日开始实施，鉴于目前部分直属局对生物制品卫生检疫审批工作尺度掌握不一，为进一步规范此项工作，现通知如下：一、《出入境特殊物品卫生检疫管理规定》第十条已明确规定：申请办理生物制品、血液制品的卫生检疫审批手续的，货主或者其代理人应当提供以下材料：（一）用于治疗、预防、诊断的入境生物制品、血液制品，应当提供国家药品监督管理部门出具的进口注册证明；（二）用于治疗、预防、诊断的出境生物制品、血液制品，应当提供药品监督管理部门出具的《药品销售证明》或生产批件；（三）用于其他领域的出入境生物制品、血液制品，应当提供相关主管部门出具的进出口批件。二、对因无相关主管部门而无法出具有效进出口批件的生物制品，分为“低风险生物制品”和“高风险生物制品”二类管理。（一）低风险生物制品是指不含任何病原微生物，不含任何毒素，不含人体组织、细胞、血液及其成分的人体外使用的生物制品。如用基因工程或人工合成技术生产的抗原、抗体，及其它蛋白质；所有经纯化的酶及其试剂；经纯化的DNA、RNA和其相关产品如质粒、引物、cDNA文库等。对属于低风险的生物制品，各直属局无需索要进出口批件即可受理卫生检疫审批。（二）高风险生物制品是指不能归类为药品管理，也不能归类为低风险管理的生物制品。对属于高风险的生物制品，各直属局需凭“技术分析报告书”受理卫生检疫审批。三、目前指定北京、上海、广东三局组建“高风险生物制品技术分析专家委员会”开展对高风险生物制品技术分析工作，并出具“技术分析报告书”。有关对“技术分析专家委员会”组成人员的要求，以及“高风险生物制品技术分析规程”将另行规定。四、用做预防或治疗的自用血液制品或生物制品（仅限于药品或疫苗），携带人或代理人需出示医院的有关证明，允许携带的数量以医生处方或产品说明书一个疗程为限，经口岸现场检疫人员核查后方可放行。特此通知。
二00六年四月五日======================================================
预祝各位顺利通关。
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呵呵，太麻烦了，干脆让老外直接以信件的方式寄过来，质粒液体滴在滤纸上，寄来了重新溶一下就可以了。
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呵呵,我麻烦外国友人比较多,从美国寄来过五次质粒(三个不同的教授),从德国寄来过一次,从法国寄过一次菌(三种菌,就是三个一次性平板,还是机会致病菌!).都从来没有事的~
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是啊,同意梦见爱琴海的说法.我们有次也是收到一个这样的质粒,被海关扣押了,我们只好让海外教授重新寄了一次,就是质粒点在滤纸上,以信件方式寄,很快就到了.海外寄质粒到国内基本都这样寄的.
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