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这是一个重定向条目，共享了的内容。为方便阅读，下文中的虎红平板凝集试验已经自动替换为RBPT，可点此恢复原貌，或使用备注方式展现目录1 概述布氏引起，是一种人畜共患疾病。布氏杆菌有羊布氏杆菌、牛布氏杆菌、猪布氏杆菌等。我国流行的主要是羊布氏杆菌病，其次为牛布氏杆菌病。2 RBPT的别名虎红平板凝集试验3 检查名称
4 分类学 & 试验5 化验取材6 RBPT的原理将定量的菌液与不同稀释度的病人血清混合，在玻片上做凝集实验。7 试剂布鲁菌常见菌型为牛、羊、猪3型，均含M和A 2种，但各型菌M和A的比例有所不同，一般以牛布鲁菌制备凝集抗原。由研究所供应。8 操作方法（1）在洁净玻片上划6个4cm的方格，并标上待测血清号。按表1各种物。
（2）用小玻棒从高稀释度开始，将抗原与待测血清混合，将玻片置上加温，不断摇动，使温度达37℃左右。3～5min后判定结果。9 正常值。10 化验结果临床意义（50%）凝集：诊断布氏杆菌病符合率为95.92%。11 附注患、、、流感、等急性者，亦可出现低度阳性反应。12 相关疾病伤寒、疟疾相关文献浏览本页的人还关注了以下词条:
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布病特异性血清学检测技术应用概述_刘志国
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内科病例：不可忽略的接触史，你考虑到了吗？
作者：易可&&&来源：医客
【一般资料】男，55岁。
【主诉】因腹胀、少尿、食欲缺乏2周，加重伴发热3天入院。
【现病史】入院前2周患者因劳累出现腹胀、少尿、食欲缺乏，伴关节酸痛，自服复方氨酚烷胺胶囊效果差，后就诊于当地县医院。当地医院查肝功能示丙氨酸转氨酶( ALT) 381．2 U/L，天冬氨酸转氨酶( AST)216．5 U/L，总胆红素( TBiL) 42．4μmol /L，白蛋白( ALB) 34．6 g /L，腹部超声检查提示脾大、腹腔积液，以肝硬化、腹腔积液住当地县医院消化内科，给予保肝、利尿等治疗，症状无明显好转，遂来我院就诊。
【既往史】：身体健康，否认肝病、结核病史，无饮酒史。
【查体】体温38．3℃，&br&脉搏78 /min，呼吸20 /min，血压115 /75 mmHg。精神差。肝掌、蜘蛛痣( － ) ，皮肤、巩膜轻度黄染。心、肺检查无异常; 腹部隆起，全腹压痛、反跳痛( + ) ，腹壁肌张力高，肝脾未触及，移动性浊音阳性; 双下肢无水肿; 神经系统检查未发现阳性体征。
以下是群内医生们的初步诊断
“自身免疫性肝病”
“肾功能不全”
“肝功能不全”
“刚功能损害“
“有发热和腹膜炎表现，急性肝炎”
“自发性腹膜炎”
“急性病毒性肝炎”
“药物性肝损害”
“肝硬化腹水”
“肝硬化”
【入院后检查】查血ALT 472．2 U/L，AST 287．4 U/L，TBiL58．1μmol /L，DBiL 29.6μmol /L，ALB 36．8 g /L，前白蛋白( PA )76．8 mg /L; 凝血酶原时间( PT) 13．6 肾功能、电解质检查未发现异常。各种嗜肝病毒、自身免疫抗体及肿瘤标志物检测均( － ) ，结核菌素纯蛋白衍生物( PPD) 试验( － ) 。腹腔积液检测: 蛋白( + ) ，白细胞512 × 106 /L。腹部超声检查: 肝脏呈弥漫性损害、脾大，大量腹腔积液。
【初步诊治】肝硬化( 病因不明) ，腹腔积液，腹腔感染。给予谷胱甘肽1．2 g，异甘草酸镁100 mg，每日1 次静脉滴注; 左氧氟沙星0．2 g 每日2次静脉滴注。入院第8天患者腹腔积液消退不明显，仍间断发热，复查腹腔积液: 蛋白( + ) ，白细胞425 × 106 /L。腹部CT 检查示脾大、腹腔积液。胃镜检查示慢性非萎缩性胃炎。
以下是群内医生们的进一步诊断
“肝硬化肝小结节”
“肾损害”
“硬化并发急性腹膜炎”
“感染性腹膜炎”
“血吸，肝包虫”
“布氏病”
“布鲁菌病”
【进一步诊治】追问病史：有家畜密切接触史。入院第9天患者于内蒙古地方病研究所检测布鲁杆菌: 琥红平板试验( RBPT) ( ++++) ，凝集试验( SAT) 1∶ 100，布鲁杆菌IgM 39．15 U/L、IgG 86．94 U/L。
【最终诊断】
布鲁杆菌病急性期
【治疗】加用头孢地嗪1 g 每日2 次静脉滴注，多西环素0．1 g 每日2 次口服，泼尼松10 mg 每日1 次口服。1 周后患者发热消失，腹胀缓解，腹腔积液明显消退。患者共住院31 d 出院，出院时复查肝功能恢复正常，超声检查示腹腔积液消失。随访12 个月，无复发。
【病例分析】布鲁杆菌病是一种多器官损害疾病，肝脏是布鲁杆菌最易侵犯的器官之一。有文献报道布鲁杆菌病引起的肝脏损害为49．5% ～ 72．8%，表现为肝细胞损伤或坏死、肝脏化脓性炎症和肉芽肿性炎症等多种形式，其中以ALT、AST 升高为主的肝损害最为常见。本例多次检测肝功能ALT、AST 均升高，符合布鲁杆菌病所致的肝损害特点。分析本例肝损害、腹腔积液形成的原因，布鲁杆菌侵犯肝脏，导致肝细胞损害，出现ALT、AST 升高，PA、ALB 合成低下，诱发低蛋白血症，使血浆渗透压降低，造成腹腔积液形成和布鲁杆菌感染腹膜，而腹腔积液形成和布鲁杆菌感染腹膜又可诱发腹膜变态反应，致腹膜渗出液增加。此外，低蛋白血症易诱发肠道细菌移位，使腹膜炎性渗出增加，加重腹腔积液，从而使患者出现了肝损害、腹腔积液及腹腔感染表现。
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发热原因入院，入院时就需要筛查布病
的确学习了
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布病检测方法
布病的检测方法
虎红平板凝集试验（RBPT）：
实验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集实验。由于所用的抗原是酸性（PH3.6&3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。 器材与试剂：虎红平板凝集抗原、载玻片、移液器、枪头
方法：在载玻片上加抗原30&l，加入30&l被检血清，混匀。在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。
试管凝集试验（SAT）：
实验原理：布鲁氏菌侵入机体后，会刺激机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合，在电介质作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。
器材与试剂：布病试管凝集抗原、生理盐水、试管、移液管、移液器、小烧杯、枪头、试管架
方法：1.准备试管：取9支试管放在试管架中编号。1号管为血清对照管，2&8号为试验管，9号为抗原对照管。
2.血清稀释：1号管加入2.3ml生理盐水，2号不加，3号&9号各加入0.5ml生理盐水。1号管加入0.2ml被检血清，混匀后各吸0.5ml加入2、3号管。从3号开始做倍比稀释，8号吸0.5ml弃去。
3.加入抗原：10倍稀释抗原（用烧杯，1ml抗原9ml生理盐水），从2号开始每支加0.5ml稀释后抗原，从2号开始，血清被稀释浓度为1：25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600
4.凝集试验标准比浊管的配制（判定透明程度的依据）：取5支试管，编号，取稀释后的抗原再做2倍稀释。
管号 抗原稀释液盐水(ml) 清亮度 标记
1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++
4 0.75 0.25 25% +
5 1.00 0.00 0% &
充分混匀，将所有试管放入温箱中37℃培养20&22小时取出，在室温下放置1&2小时后观察结果。
5.结果判定：1号管清亮透明，9号管均匀浑浊（对比）
假如试验管包括6号之前都透明，取出6号管比较，若其与2号比较管相近，则被检血清结果为1:400，+++
牛血清凝集价在1:100以上时，该血清样品为布病阳性，血清凝集价在1:50时，该血清样品为疑似反应，经3&4周后须再做一次检查，扔为疑似反应者判为阳性，凝集价在1:50以下则为阴性反应。
羊和猪血清在1:25凝集为可疑，在1:50或以上凝集为阳性。
总结：RBPT在使用时操作方便、快捷，适用于大规模的筛选检疫，但易出现假阳性。SAT特异性高，检测比较准确，但操作麻烦，费时费力，不适用于大规模的筛选检测，不能区分人工免疫和自然感染。先用RBPT筛选，阳性样品再用SAT复核以做出比较准确的判断。
布病检测标准
动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T
本标准规定了动物布鲁氏菌病的诊断技术。
本标准规定的虎红平板凝集试验、乳牛全乳环状试验适用于家畜布病田间筛选试验和乳牛场布病的监测及诊断泌乳母牛布病的初筛试验；试管凝集试验和补体结合试验适用于诊断羊种、牛种和猪种布病感染的家畜。
本标准规定的试管凝集试验不适用于犬种和绵羊副睾种布病感染家畜的检疫。 2 虎红平板凝集试验
2.1 材料准备
2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm2的方格。
2.1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03mL。
2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。
2.2 操作方法
2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03mL。
2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03mL。
2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。
2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(&)。
3 乳牛布病全乳环状试验
3.1 材料准备
3.1.1 布病全乳环状抗原
由制标单位提供，按说明书使用。
3.1.2 乳样
3.1.2.1 受检乳样须为新鲜的全乳。
3.1.2.2 采乳样时应将母畜的乳房用温水洗净、擦干，然后将乳液挤入洁净的器皿中。
3.1.2.3 采集的乳样夏季时应于当日内检查；保存于2℃时，7d内仍可使用。
3.2 操作方法
3.2.1 取乳样lml，加于灭菌凝集试验管内。
3.2.2 取充分振荡混合均匀的全乳环状抗原1滴(约50ul)加人乳样中充分混匀。
3.2.3 置37℃一38℃水浴中60min。
3.2.4 加温后取出试管勿使振荡，立即进行判定。
标准分为：
a)强阳性反应(+++)，乳柱上层乳脂形成明显红色的环带，乳柱白色，临界分明；&&&& b)阳性反应(++)，乳脂层的环带呈红色，但不显著，乳柱略带颜色；
c)弱阳性反应(+)，乳脂层的环带颜色较浅，但比乳柱颜色略深；
d)疑似反应(&)，乳脂层的环带颜色不明显，与乳柱分界不清，乳柱不褪色；&&&& e)阴性反应(&)，乳柱上层无任何变化，乳柱颜色均匀。
4 动物布病试管凝集试验
4.1 材料准备
4.1.1 稀释液
0.5%石炭酸生理盐水。检验羊血清时用含0.5%石炭酸的10%盐溶液，如果血清稀释用含0.5%石炭酸的10%盐溶液，抗原的稀释应用含0.5%石炭酸的10%盐溶液。
4.1.2 抗原、阳性血清和阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
4.1.3 凝集试验管(三分管)、试管架、吸管及温箱。
4.2 操作方法
4.2.1 按常规方法采血分离血清。
4.2.2 运送和保存血清样品时防止冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，按每9mL血清加1ml 5%石炭酸生理盐水(徐徐加入)防腐，也可用冷藏方法运送血清。
4.2.3 受检血清的稀释
以羊和猪为例，每份血清用4支凝集试管。
4.2.3.1 第一管标记检验编码后加1.15mL稀释液。
4.2.3.2 第2&4管各加入0.5mL稀释液。
4.2.3.3 然后用1ml吸管取被检血清0.1mL；加入第1管内，并混合均匀。混合方法是将该试管中的混合液吸人吸管内，再沿试管壁吹入试管中，如此吸入、吹出3&4次，充分混匀后以该吸管吸混合液0.25ml弃去，
4.2.3.4 取0.5mL混合液加入第2管，用该吸管如前述方法混合。
4.2.3.5 再吸第2管混合液0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去混匀液0.5mL。
4.2.3.6 稀释完毕，从第1至第4管的血清稀释度分别为1：12.5、1：25、1：50和1：100。
4.2.3.7 牛、马、鹿、骆驼血清稀释法与上述基本一致，差异是第一管加1.2mL稀释液和0.05mL被检血清。
4.2.3.8 将0.5mL20倍稀释的抗原加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，羊和猪的血清稀释则依次变为1：25、1：50、1：100和1：200，牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1：50、1：100、1：200和1：400。
大规模检疫时也可只用2个稀释度，即牛、马、鹿、骆驼用1：50和1：100，猪、山羊、绵羊和狗用1：25和1：50。
4.2.3.9& 置37℃&40℃温箱24h，取出检查并记录结果。
4.2.3.10 每次试验均应设阳性血清、阴性血清和抗原对照，即
a)阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方法与受检血清同。
b)阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有滴度，加抗原的方法与受检血清同。
c)抗原对照：1：20稀释抗原液0.5mL，再加0.5mL稀释液，观察抗原是否有自凝现象。
4.3.1 供判定参照比浊管制备方法见附录E(提示的附录)。
4.3.2 结果判定
4.3.2.1 凝集反应程度分为：
参照比浊管，按各试管上层液体清亮度判读
a)++++菌体完全凝集，100％下沉，上层液体100％清亮；
b)+++菌体几乎完全凝集，上层液体75％清亮；
c)十十菌体凝集显著，液体50％清亮；
d)+凝集物有沉淀，液体25％清亮；
e)&凝集物无沉淀，液体均匀混浊。
4.3.2.2 牛、马、鹿和骆驼1：100血清稀释，猪、山羊、绵羊和狗1：50血清稀释，出现
&++&以上凝集现象时，受检血清判定为阳性。
4.3.2.3 牛、马、鹿、骆驼1：50血清稀释，猪、山羊、绵羊、狗1：25血清稀释，出现&++&以上凝集现象时，受检血清判定为可疑反应。
可疑反应家畜经3周一4周后重检，如果仍为可疑，该牛、羊判为阳性。猪和马经重检仍保持可疑水平，而农场的牲畜没有临床症状和大批阳性患畜出现，该畜被判为阴性。&&&& 猪血清偶有非特异性反应，须结合流行病学调查判定，必要时应配合补体结合试验和鉴别诊断，排除耶森氏菌交叉凝集反应。 5 动物布病补体结合试验 5.1 材料准备
5.1.1 稀释液：0.85％生理盐水按常规方法配制。
5.1.2 绵羊红细胞悬液：采取成年公绵羊血，按常规方法脱纤、洗涤、离心，用稀释液洗涤3&4次，最后二次以2000r/min离心沉淀l0min，取下沉的红细胞泥，以稀释液配制成2.5％红细胞悬液。
5.1.3& 抗原、标准阳性血清、阴性血清、溶血素由制标单位提供，按说明书使用。 5.1.4&&&&&&& 受检血清：收集和处理见附录A(标准的附录)。 5.1.5&&&&&&& 溶血素：效价测定见附录B(标准的附录)。
5.1.6&&&&&&& 补体：采集及其效价测定方法见附录C(标准的附录)。 5.1.7&&&&&&& 抗原：效价测定见附录D(标准的附录)。 5.2 操作方法
5.1.7.1&&&&&&&&&&& 将1：10稀释经灭能(见附录A)的受检血清加入2支三分管内，每管0.5mL。 5.1.7.2&&& 其中一管加工作量抗原0.5mL，另一管加稀释液0.5mL。 5.1.7.3&&&&&&&&&&& 上述2管均加工作量补体，每管0.5mL，振荡混匀。
5.1.7.4&&&&&&&&&&& 置37℃一38℃水浴20min，取出放于室温(22℃一25℃)。
5.1.7.5&&&&&&&&&&& 每管各加2单位的溶血素0.5mL和2.5％红细胞悬液0.5mL。充分振荡混匀。 5.1.7.6&&&&&&&&&&& 再置37℃一38℃水浴20min，之后取出立即进行第一次判定。
5.1.7.7&&&&&&&&&&& 每次试验需设阳性血清、阴性血清、抗原、溶血素和补体对照。主试验各要素添加量和顺序如表1。
表1 布鲁氏菌病补体结合试验的主试验&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& mL
5.1.7.8&&&&&&&&&&& 第一次判定，要求不加抗原的阳性血清对照管，不加或加抗原的阴性血清对照
管，抗原对照管呈完全溶血反应。
5.1.7.9&&&&&&&&&&& 初判后静置12h作第二次判定，第二次判定时要求溶血素对照管，补体对照管呈完全抑制溶血。
5.1.7.10&&&&&&& 对照正确无误即可对受检血清进行判定，受检血清加抗原管的判定参照标准比色管记录结果。标准比色管的制备方法见附录F(提示的附录)。 5.1.7.11&&&&&&& 判定标准：
0&40%溶血判为阳性反应；&&&& 50%一90%溶血判为可疑反应；&&&& 100%溶血判为阴性反应。
牛、羊和猪补体结合反应判定标准均相同。
（标准的附录）
受检血清的采集和处理
以常规方法采血和分离血清。用稀释液（5.1.1）将血清作1：10稀释，按表B1规定的水浴灭能。
表A1&& 各种被检动物血清的灭能温度和时间
（标准的附录） 溶血素效价测定 B1 稀释溶血素
取0.2ml含等量甘油防腐的溶血素，加9.8mL稀释液配成1：100的基础稀释液，按表B1方法作进一步稀释。
表B1& 溶血素稀释法&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& ml
B2& 按表B2加入各成份，而后37℃&38℃水浴20min。 B3& 溶血素效价
从水浴中取出，立即判定结果，用1：20补体0.5mL，在37℃&38℃水浴20min，能使2.5%红细胞液0.5mL完全溶血的最小量溶血素为溶血素效价或称一单位溶血素。以表B2为例，对照管均不溶血，1&6管完全溶血，测定溶血素效价为3000倍。
在主试验时溶血素的工作效价为滴定效价的倍量或称二单位溶血素，则工作效价为1500
倍稀释。&&& 效价测定后，2&3个月内可按此效价使用，不必重测。
（规范性附录）
补体采集及其效价测定 C.1 补体采集
选择健康豚鼠3&5只，于使用前一天早晨饲喂前或停食后6h从心脏采血，分离血清后混合保存于普通冰箱中，也可从兽医生物药品厂购买冻干补体，使用前加稀释液恢复原量后使用。
C.2 补体效价测定
每次补体结合试验，应于当日测定补体效价。 C.2.1 稀释补体并加各种成份&&&& 用稀释液配制1:20稀释补体，按表C1加入各种成份后，前后经37℃&38℃20min水浴2次。
C.2.2 补体效价
经过2次水浴，在2单位溶血素存在情况下，阳性血清加抗原的试管完全不溶血，而在阳性血清未加抗原及阴性血清无论有无抗原的试管发生完全溶血所需最小补体量，就是所测得的补体效价。以表C1为例，第6管1：20稀释的补体0.25mL即为一个补体单位。
C.3 原补体使用时应稀释倍数的计算
原补体使用时应稀释倍数按式（C1）计算：&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 补体稀释倍数
原补体稀释倍数=&&&&&&& &使用时每管加入量&&&&&&& （C1）&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 测得效价&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 20
以表C1为例，按公式计算& &0.5=40倍。&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.25
即此例补体应作40倍稀释，每管加0.5Ml，即为一个补体单位。考虑补体性质不稳定，操作过程中效价会降低，正式试验时使用浓度比补体效价要大10%左右，本例补体工作单位作1：36稀释，每管使用0.5mL。
（规范性附录） 抗原效价测定
一般按照兽医制药厂产品说明书的效价使用。在初次使用或过久等其他原因需要测定时按下述步骤进行。
D.1 须取用两份阳性血清（分别为强阳性和弱阳性血清）和一份阴性血清来测定抗原效价。 D.2 阴性血清和阳性血清稀释
用稀释液对阴性对照血清仅作1：10稀释，阳性血清稀释成1：10、1：25、1：50、1：75和1：100，5个稀释度。 D.3 稀释抗原
用稀释液将抗原稀释成1：10、1：50、1：75、1：100、1：150、1：200、1：300、1：400和1：500等稀释度。
D.4 按表D1加入各种成份，并经37℃&38℃20min水浴2次。 表D1& 布鲁氏菌补体结合抗原效价测定&&&&&&&&&&&&&&& ML
D.5 记录抗原测定结果
从水浴中取出反应管，观察溶血百分数，记录结果。&&&& 例举范例如表D2
抗原对阴性血清应完全溶血。对两份阳性血清各稀释度发生抑制溶血最强的抗原最高稀释度为抗原效价。
在正式试验时，抗原的稀释度应比测定的效价浓25%。以表D2为例，其效价为1：150，正式试验时按1：112.5稀释使用。 附 录 E
（规范性附录）
试管凝集试验参照比浊管的制备
每次试验须配比浊管，作为判定凝集反应程度的依据，先将20倍稀释抗原用等量稀释液作对倍稀释，然后按表E1配制比浊管。 表E1 参照比浊管的配制 （规范性附录）
溶血程度的标准比色管的配制
配制方法如表F1，牛、羊和猪补体结合反应判定标准均相同。
表F1&& 标准比色管的配制方法及反应判定标准
(作者：佚名
编辑：pxny)
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2种方法检测布氏杆菌病血清抗体的比较
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