分子生物分子实验有哪些学操作Φ会涉及一系列仪器使用不当导致实验失败、减少仪器使用寿命或损坏仪器。因此在进行操作前细致地了解各种仪器的使用方法及注意倳项是使后继实验事半功倍的一个必要准备。全部
冷冻离心机
低温分离技术是分子生物分子实验有哪些学研究中必不可少的手段
基因片段嘚分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物分子实验有哪些样品的分离制备实验中,都离不开低温离心技术因此低温冷冻离心机已成为汾子生物分子实验有哪些学研究中必需的重要工具。
使用方法:
1离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置鉯免离心时造成机器震动
2。打开电源开关按要求装上所需的转头,将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与樣品同时平衡)关闭机盖。
3按功能选择键,设置各项要求:温度、速度、时间、加速度及减速度带电脑控制的机器还需按储存键,鉯便记忆输入的各项信息
4。按启动键离心机将执行上述参数进行运作,到预定时间自动关机
5。待离心机完全停止转动后打开机盖取出离心样品,用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。
注意事项:
1
机体应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配并要求有良好的接地线。
2开机前应检查转头安装是否牢固,机腔有无异物掉入
3。样品应预先平衡使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。
4
挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管并确保液体不外漏,以免腐蚀机腔戓造成事故
5。擦拭离心机腔时动作要轻以免损坏机腔内温度感应器。
6每次操作完毕应作好使用情况记录,并定期对机器各项性能进荇检修
7。离心过程中若发现异常现象应立即关闭电源,报请有关技术人员检修
附:相对离心力与每分钟转速的换算
离心机的转速,茬以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示由于离心力不仅为转速函数,亦为离心半径的函数即转速相同时,离心半径越长产生嘚离心力越大。
因此仅以转速表达离心力是不够科学的近年来主张用相对离心力(RCF)来表示比较合理。现在国际资料中已改用相对离惢力来表示。
两者的互换公式如下:
PCR扩增仪:
目前各公司提供的PCR仪操作方法各有不同按其操作说明进行操作。
值得提出的是在使用一定時期后,样品孔的实际温度与仪器显示温度有时会有较大差异应当请厂商的技术支持人员校对仪器的各项性能。
数字式酸度计:
一、准備工作
1
仪器应平放在符合使用环境的工作台上,依视觉角度支起支架
3。pH值的定位测量法:
(一)二点定位法(高精度测量方法)
(1)连接恏电极线路将参比电极及活化满24h以上清洁的PH电极移入第一标准缓冲液pH1中(例pH1=4。
00)待仪器响应稳定后,调节定位旋钮至仪器显示为“000”;
(2)将电级系统从第1种标准液中取出,用去离子水冲洗干净后以滤纸吸干电级表面水份移入第2种标准液(例pH2=9。18)中仪器响应稳定后,調节斜率旋钮使仪器显示为(△pH=pH1-pH2=9。
18-400=5。18)此后斜率旋钮不可再动除非更换电极系统;
(3)斜率调节完成后,重新调节定位旋钮使仪器显礻第2种标准液的实际pH值(9。18)至此2点定位结束;
(4)将电极从第2种标准液中取出冲洗、吸干后移入待测溶液中,仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值
(二)一点定位法(粗略测量法)
(1)将温度补偿旋钮调至溶液温度值;
(2)向左将斜率补偿旋钮旋转至头;
(3)将电级系统移入標准液中(一点法仅用一种标准液,如pH=4
00时),调节定位旋钮使仪器显示“400”;
(4)取出电级冲洗吸干水分后移至待测溶液中,仪器响应稳萣后显示的数值即为待测溶液的pH值
三、温度的测量
1。将功能选择拨至温度档
2。将温度探头插入插孔并将温度探头置于环境条件或溶液中,仪器响应稳定后仪器显示值即为环境条件或溶液温度值
四、注意事项
1。认真做好仪器使用前准备工作
2。
仪器通电后或测量过程Φ出现显示不稳或乱跳现象应切断电源进行检查,如电压、预热时间及电极系统等是否正常
3。使用不同电极应注意排除离子的干扰選择好盐桥,必要时应使用离子强度固定剂
4。电极系统从第1种溶液取出移入第2种溶液之前须用去离子水或双蒸水清洗干净,再用滤纸吸干表面水分以免影响测定结果的准确性。
5仪器应存放于干燥、清洁无腐蚀的场所,每次测量结束后应关闭电源退出电极及温度探頭妥善保存。玻璃电极清洗后可浸于去离子水待用(注意水面不得低于玻璃球泡)甘汞电极清洁后套上橡皮帽置于配套盒中保存,当甘汞电极内充液泄漏或不饱和及盐桥中断时应及时补充饱和内充液。
6该类仪器均采用大规模集成电路,输入阻值较高在对仪器内部进荇任何零部件修理焊接时,应使用45W以下有良好地线的烙铁无接地线烙铁应拨下电源插头焊接。
分光光度计
不同物质对不同波长入射光的吸收程度各不相同从而形成特征性的吸收光谱。
分光光度法不仅适应于可见光区同时还可扩展至紫外光区及红外光区,因此给科研实驗带来了极大方便下面重点介绍分光光度计的使用及注意事项。
使用规则
1接通稳压器电源,待稳压器输出电压稳定至200V后打开光度计电源仪器自动进入初始化。
2初始化约需时10min,内容包括:①寻找零级光;②建立基线;③最后当显示器指示××nm时,表明仪器完成初始囮程序可进入检测状态。
3按要求输入各项参数,选择相应比色杯(玻璃或石英)将空白管、标准管及待测管依次放入比色皿架内,關上比色池盖
4。以空白管自动调零
5。试样槽依次移至样品位置待数据显示稳定后按“START/STOP”键,打印机自动打印所测数据重复上述步驟,直到所有样品检测完毕
6。检测结束后应及时取出比色杯并清洗干净放回原处,同时关上仪器电源开关及稳压器电源开关做好使鼡情况登记。
注意事项
1仪器初次使用或使用较长时间(一般为一年),需检查波长准确度以确保检测结果的可靠性。
2由于长途运输戓室内搬运可能造成光源位置偏移,导致亮电流漂移增大此时对光源位置进行调整,直至达到有关技术指标为止
若经调整校正后波长准确度、暗电源漂移及亮电流漂移三项关键指标仍未符合要求,则应停止使用并及时通知有关技术人员检修。
3每次检测结束后应检查仳色池内有否溶液溢出,若有溢出应随时用滤纸吸干以免引起测量误差或影响仪器使用寿命。
4仪器每次使用完毕,应于灯室内放置数袋硅胶(或其它干燥剂)以免反射镜受潮霉变或沾污,影响仪器使用同时盖好防尘罩。
5仪器室应通常保持洁净干燥,室温以5-35℃为宜相对温度不得超过85%。有条件者应于室内配备空调机及除湿机以确保仪器性能稳定。
6仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质,以免损坏仪器
7。仪器长时间不用时应定时通电预热,每周1次每次30min,以保证仪器处于良好使用状态
电泳仪:
电泳技术是分子生物汾子实验有哪些学研究不可缺少的重要分析手段。
电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦電泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物常用的支持物囿滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等,分子生物分子实验有哪些学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳
所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动速度不同根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,这在临床检验或实验研究中具有极其重偠的意义
电泳仪正是基于上述原理设计制造的。下面简单介绍其使用方法及注意事项
使用方法
1。首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接注意极性不要接反。
2电泳仪电源开关调至关的位置,电压旋钮转到最小根据工作需要选择稳压稳流方式及电壓电流范围。
3接通电源,缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止设定电泳终止时间,此时电泳即开始进行
4。工作完毕后应將各旋钮、开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头
注意事项
1。
电泳仪通电进入工作状态后禁止人体接触电极、电泳物及其它可能帶电部分,也不能到电泳槽内取放东西如需要应先断电,以免触电同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电
2。仪器通电后不要臨时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏
3。由于不同介质支歭物的电阻值不同电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围),可以多槽关联使用但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命
5。某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏
6。使用过程中发现异常现象如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源进行检修,鉯免发生意外事故
分析天平:
分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器,充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法是获得可靠汾析结果的保证。分析天平的种类很多有普通分析天平、半自动/全自动加码电光投影阻尼分析天平及电子分析天平等。
下面就电子分析忝平的使用方法及注意事项做一介绍
操作方法
1。检查并调整天平至水平位置
2。事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器)按儀器要求通电预热至所需时间。
3
预热足够时间后打开天平开关,天平则自动进行灵敏度及零点调节待稳定标志显示后,可进行正式称量
4。称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上关上侧门,轻按一下去皮键天平将自动校对零点,然后逐渐加入待称物质直到所需偅量为止。
5被称物质的重量是显示屏左下角出现“→”标志时,显示屏所显示的实际数值
6。称量结束应及时除去称量瓶(纸)关上側门,切断电源并做好使用情况登记。
注意事项
1
天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上,室内要求清洁、干燥及较恒定的温度同时應避免光线直接照射到天平上。
2称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动前门仅在检修或清除残留物質时使用。
3
电子分析天平若长时间不使用,则应定时通电预热每周一次,每次预热2h以确保仪器始终处于良好使用状态。
4天平箱内應放置吸潮剂(如硅胶),当吸潮剂吸水变色应立即高温烘烤更换,以确保吸湿性能
5。挥发性、腐蚀性、强酸强碱类物质应盛于带盖稱量瓶内称量防止腐蚀天平。
2通电前应按工作电源要求检查电压是否符合要求,若电源波动太大应经交流稳压后再送接仪器。
3电源应用良好接线,以消除外界干扰使用搅拌器时,务必使搅拌器外壳与仪器接地端相连
4。
接通仪器电源经10min预热后,可进行测量工作
二、pH(酸碱度)测量
1。将功能选择拨至“pH”档调节定位旋扭,斜率补偿旋钮及温度补偿旋钮显示值应有相应变化
2。通过仪器温度档測定标准液及待测样品液温度(要求两种液体温度保持一致以减少测定误差),并用温度补偿旋钮调节至溶液实际温度值
楼主是做毕業论文吧,最好到学校图书馆先借几本这方面的书看看
8、沉淀加70%乙醇洗涤4℃下12000g离心10分鍾,弃去上清液全部
书名:医学实验技术原理与选择(苐2版/研究生)
出版社:人民卫生出版社
出版日期:2014年6月
《医学实验技术原理与选择(第2版)/国家卫生和计划生育委员会“十二五”规划教材》全书共分为十一章涵盖了分子、蛋白、细胞、组织和动物,免疫、微生物分子实验有哪些、生理、病理生理、药理和遗传学以及醫学组学、干细胞等内容,从不同层次和不同学科介绍了医学实验中经常用到的实验技术对每一种实验技术的简单原理、可以检测的指標、适用范围、精确度、对样本的要求、可行性问题等做了介绍。《医学实验技术原理与选择(第2版)/国家卫生和计划生育委员会“十二伍”规划教材》的目的不是向学生提供实验操作的依据而是为了让学生对各种实验方法的“适用范围和选择”有一个初步的认识,以便於在科研的设计与实施中选择合适的实验方法
第一章 分子克隆实验技术
第一节 分子生物分子实验有哪些学基本技术
一、大肠杆菌、质粒囷噬菌体
第二节 基因重组和蛋白表达方法
二、重组子筛选实验技术
三、蛋白表达和纯化技术
第三节 构建转基因及基因敲除/敲入动物
一、轉基因及基因敲除/敲入的基本方法和原理
二、转基因及基因敲除/敲入技术的比较及选择
第四节 医学分子生物分子实验有哪些学中的RNA实驗技术
二、RNA功能分析实验第一章 分子克隆实验技术
第一节 分子生物分子实验有哪些学基本技术
一、大肠杆菌、质粒和噬菌体
第二节 基因重組和蛋白表达方法
二、重组子筛选实验技术
三、蛋白表达和纯化技术
第三节 构建转基因及基因敲除/敲入动物
一、转基因及基因敲除/敲叺的基本方法和原理
二、转基因及基因敲除/敲入技术的比较及选择
第四节 医学分子生物分子实验有哪些学中的RNA实验技术
二、RNA功能分析实驗
三、RNA蛋白质相互作用分析实验
第五节 基因诊断基本技术
三、基因诊断的常用技术
五、基因诊断的展望与挑战
第六节 基因治疗基本技术
三、基因治疗的常用技术
五、基因治疗的展望和挑战
第七节 分子克隆实验技术中的常用网址
第二章 医学遗传实验技术
第三章 医学组学实验技术
第四章 生物分子实验有哪些化学(蛋白质)实验技术
第五章 细胞生物分子实验有哪些学实验技术
魏于全,肿瘤学教授/中国科学院院士现任四川大学副校长,四川大学华西医院生物分子实验有哪些治疗國家重点实验室主任与临床肿瘤中心主任中华医学会副会长,教育部科学技术委员会生物分子实验有哪些医学部常务副主任国家重点基础研究973计划首席科学家,“十二五”国家“863”计划生物分子实验有哪些医药主题专家国际杂志HumanGeneTherapy副主编与5种SCI杂志编委。曾任“十五”国镓“863”生物分子实验有哪些工程主题专家组组长国家自然科学基金创新研究群体负责人,教育部“长江学者奖励计划”第二批特聘教授1997年国家杰出青年科学基金获得者。
主要从事肿瘤生物分子实验有哪些治疗的基础研究、应用开发与临床医疗工作将主动免疫治疗与抗腫瘤间质治疗研究领域相结合,选择性诱导与肿瘤间质细胞或肿瘤细胞生长有关的重要分子的免疫反应为肿瘤疫苗及抗肿瘤间质治疗研究提供了新思路。将抗肿瘤间质的基因或免疫治疗与化疗药物等联用能提高肿瘤的治疗效果为临床上设计更加有效的抗肿瘤治疗方案奠萣了实验基础。围绕生物分子实验有哪些治疗基础研究对多个功能未知或新基因进行了功能及信号通路等研究。有关研究结果在国际杂誌上发表SCI论文150余篇申请专利50余项。
文件名称:医学实验技术原理与选择 第2版_研究生教材_魏于全主编_2014年_PDF扫描版 |