江苏农业科学 2011年第 1期 周 俊秦爱建，高勤学等．半半定量65到25RT—PCR检测PER mRNA在姜 曲海猪不同器官与组织中的表达 [J：．江苏农业科学，2011(1)：39—41 半半定量65到25 RT—PCR检测 朋 mRNA在姜曲海猪 不同器官与组织中的表达 周 俊 一秦爱建 ，高勤学 周春宝 ，谈永松 陶 勇 (1．扬州大学兽医学院，江苏扬 I'l225009；2．江苏畜牧兽医职业技术学院，江蘇察州I．上海市农业科学院畜牧研究所上海 201106) 摘要：猪 内源性反转录病毒 (PERV)为反转录病毒科哺乳动物 C型反转录病毒属成贝， 以前病毒 DNA的形式 整合进猪细胞基因组中并随细胞染色体复制而复制。本试验利用半半定量65到25 RT—PCR方法分析姜曲海猪的肝、心、胰 、 脾 、肺 、胆、腿肌等器官与组织中PE尺 基因3种亚型的mRNA；戋达情 兑『结果表明：在昕榆测的器官 了卜组织中，PERV — A在肝中表达丰度最高胰中表达丰度最低 ；PERV—B和PERV—C均在腿肌中表达丰度最高，脾中表达卡度最低 关键词：姜曲海猪 ；器官与组织；PERV；半半定量65到25RT—PCR；基因表达 中图分类号：$828．890．1 文献标志碼 ：A 文章编号：1002——0039—03 猪基因组携带有猪内源性逆转录病毒 (PERV)前病毒序 (DEPC)、TaqDNA聚合酶购 自普洛麦格 (北京)生物技术有 列，其拷贝数达 2～50个且种类繁多。Patience等将 口的已 限公司 经发现的P R 基因分为 2类，即 类 ( 至 )和p类 (p 1．3 RNA的制备及含量测定 至p)，其中 又根据其外壳蛋 白基因(env)的不同分为 3 按Trizol试剂盒說明提取总RNA取5 L并按一定的倍 个亚型，即PER —A、PERV—B、尸肼 —c 目前仅发现 数稀释 ，以紫外分光光度计检洲总 RNA纯 度和半定量65到25 总 型PERV对人细胞具有感染性，其他类型PERV病毒基因组 RNA含量 =(D： X核酸稀释倍数 X40)／1000 位为 是否具有感染性还不清楚。Clemenceau等研究无特异性病原 I将提取的总 RNA储存于 一70℃備用。RNA制备过 猪(SPF)各种器官与组织中不同PERV基因序列 mRNA的表 程如下：(1)将样品组织住液氮中磨成粉末后每 50～100nag 达，发现猪各种器官与组织负载 基因序列的表达存在明 组织加入 lmLTrizol液研磨样 品总体积不超过所用 Trizol 显差异，并认为这可能是影响异种移植过程 中PERV传播的潜 体积的1O％；(2)研磨液审温放置 5min每 lmL的Trizol液 在危险的一个因素 。但我国有关猪基因组 p|职 生物学特 加入0．2mL氯仿 盖紧离心管，}H手剧烈摇荡离心管 15S； 性的报道极少本试验應用半半定量65到25 RT—PCR对姜 曲海猪的各 (3)取上层水相 于一新 的离心管，每 1mL的 Trizol液加 种器官与组织PERV基因序列 mRNA的丰度进行检测了解 0．5mL异丙醇，室温放置 10n／inl2000g离心 10ndn；(4) PER 在姜 曲海猪各种组织与器官中的表达情况，以期为该猪 弃去上清液每 1mL的Trizol液加入至少 lmL75％乙醇，涡 种 的PERV生物学研究及进一步开發利用奠定基础 旋混匀，4℃下7500g离心5rain；(5)小心弃去上清液然后 室温或真字干燥 5～10rain，不能f燥过分否则会 降低 RNA 1 材料与方法 的溶解度 。然后将 RNA溶于水 中必要时可 以在55～60℃ 1．1 检 测样 品
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嗯可能是，我上月也是到了卵泡成熟的阶段才0.9后来过几天长到1.5*1.6就不长了，用半半定量65到25也是20多再快来DYM时变3.5的囊肿叻，不过月经正常这个月吃中药调理就正常了。 查看原帖>>
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