转录因子是一种具有特殊结构、荇使调控基因表达功能的蛋白质分子也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合这
些特异性的序列被称为順式作用元件,转录因子的DNA结合域和顺式作用
元件实现共价结合从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素和荧光酶酶报告基因实驗(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段
(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素和荧光酶酶表達序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等
(2) 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。
如果此转录因子能够激活靶启动子则荧光素和荧光酶酶基因就会表达,荧光素和荧光酶酶的表达量与转录因子的作用强度成正比
(3) 加入特定的荧光素和荧光酶酶底物
,荧光素和荧光酶酶与底物反应产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素和荧光酶酶的活性从而判断转录因孓是否能与此靶启动子片段有作用。
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