植物学硕博毕业论文 - 拟南芥植株再生体系和悬浮细胞系的建立及超声生物学效..
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拟南芥植株再生体系和悬浮细胞系的建立及超声生物学效应的研究
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【doc】水稻悬浮细胞系的建立
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3秒自动关闭窗口三岛柴胡悬浮细胞系的获得及培养条件的优化--《齐齐哈尔大学》2012年硕士论文
三岛柴胡悬浮细胞系的获得及培养条件的优化
【摘要】：本研究主要是根据三岛柴胡愈伤组织的特性,探讨了不同的基本培养基、激素组合及其它因素对愈伤组织培养条件的影响,从而优化出适合三岛柴胡愈伤组织生长发育的培养基,为大规模细胞培养探索出有力的条件。采用正交统计法,优化出三岛柴胡愈伤组织生长的最佳培养基和三岛柴胡愈伤组织次级代谢产物积累最多的培养基。通过植物细胞培养技术,建立了三岛柴胡悬浮细胞系,在此基础上,利用混合正交和均匀正交法,分析筛选出适合三岛柴胡细胞悬浮生长的培养基。
采用细胞鲜重增长量为生长指标,筛选出适合三岛柴胡愈伤组织生长的最佳培养基配方为：N6+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+pH值5.6+30g/L蔗糖；以培养周期结束后的柴胡皂苷总含量为参考指标,适合细胞次生代谢产物积累的最佳实验配方为：1/2MS+pH值5.6+1mg/L6-BA+1.5mg/LNAA+1.0mg/L2,4-D+30g/L蔗糖。
三岛柴胡愈伤组织生长的最佳培养基筛选实验中,对实验影响最大的是基本培养基,pH值、2,4-D的含量、NAA的含量次之,影响因素最小的是6-BA的含量。在三岛柴胡愈伤组织次生代谢产物积累的最佳培养基筛选实验中,对实验影响最大的是基本培养基,NAA的含量、6-BA的含量、2,4-D的含量次之,影响最小的因素是pH值。
以三岛柴胡细胞悬浮生长的最终鲜重为参考指标,采用混合正交得出的最佳基本培养基为N6,最佳pH值为6.0,最佳实验材料为叶愈伤组织；均匀正交得出的最优激素组合为在N6培养基上附加0.5mg/L NAA、0.75mg/L6-BA、1.5mg/LKT,因此结合两次正交实验得出最佳培养基条件为：N6+NAAO.5mg/L+6-BA0.75mg/L+KT1.5mg/L+pH值6.0+叶愈伤组织+30g/L蔗糖。
三岛柴胡愈伤组织和三岛柴胡悬浮细胞的生长,均呈现出“S”型。三岛柴胡愈伤组织生长的最终鲜重增长倍数为13.14倍；三岛柴胡悬浮细胞生长的最终的鲜重增长倍数为15.56倍且三岛柴胡细胞悬浮培养的过程中,电导率变化与细胞干重呈镜像关系。
【关键词】：
【学位授予单位】：齐齐哈尔大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2012【分类号】：S567.79【目录】：
摘要5-6Abstract6-101 绪论10-24 1.1 植物组织与细胞培养技术10-12
1.1.1 植物组织与细胞培养技术的发展历程10-11
1.1.2 植物组织与细胞培养的方法11
1.1.3 培养基及激素的选择11-12 1.2 植物愈伤组织培养12-13
1.2.1 植物愈伤组织的形态结构12-13
1.2.2 植物愈伤组织的形成过程13 1.3 植物细胞悬浮培养13-15
1.3.1 悬浮细胞的生长13-14
1.3.2 细胞培养物的保持14
1.3.3 悬浮培养细胞的测定14-15
1.3.4 影响植物细胞悬浮培养的因子15 1.4 植物次生代谢物15-18
1.4.1 植物次生代谢物的主要类型15-16
1.4.2 植物组织与细胞培养生产次生代谢物16-17
1.4.3 影响细胞培养次生代谢的因素及方法17-18 1.5 药用植物细胞培养的研究概况18-19
1.5.1 国外药用植物细胞培养的发展概况18
1.5.2 国内药用植物细胞培养的发展概况18-19 1.6 三岛柴胡简介19-24
1.6.1 三岛柴胡有效成分19-20
1.6.2 柴胡属药理作用20-21
1.6.3 柴胡属研究动态21-23
1.6.4 药用植物细胞培养面临的问题23-242 三岛柴胡愈伤组织条件优化24-35 2.1 实验材料和主要试剂、设备24
2.1.1 实验材料24
2.1.2 主要试剂24
2.1.3 主要设备24 2.2 实验方法24-27
2.2.1 三岛柴胡愈伤组织的条件优化24-25
2.2.2 增长量的测定25
2.2.3 三岛柴胡愈伤组织皂苷含量的测定25-27 2.3 结果与分析27-33
2.3.1 不同因素对三岛柴胡愈伤组织细胞生物量积累的影响27-32
2.3.2 不同因素对三岛柴胡愈伤组织细胞柴胡皂苷含量的影响32-33 2.4 讨论33-34 2.5 本章小结34-353 三岛柴胡固体培养生理指标测定35-42 3.1 实验材料和主要试剂、设备35
3.1.1 实验材料35
3.1.2 主要试剂35
3.1.3 主要设备35 3.2 实验方法35-37
3.2.1 三岛柴胡细胞不同培养基培养35
3.2.2 三岛柴胡愈伤组织的生长特性35
3.2.3 过氧化氢酶的测定35-36
3.2.4 过氧化物酶的测定36
3.2.5 可溶性总糖的测定36-37 3.3 结果与分析37-41
3.3.1 三岛柴胡愈伤组织生长规律37-38
3.3.2 两种不同培养基中三岛柴胡愈伤组织柴胡皂苷含量的比较38-39
3.3.3 两种不同培养基中三岛柴胡愈伤组织过氧化氢酶的比较39-40
3.3.4 两种不同培养基中三岛柴胡愈伤组织过氧化物酶的比较40
3.3.5 两种不同培养基中三岛柴胡愈伤组织可溶性总糖的比较40-41 3.4 本章小结41-424 三岛柴胡悬浮培养条件的优化42-55 4.1 实验材料和主要试剂、设备42
4.1.1 实验材料42
4.1.2 主要试剂42
4.1.3 主要设备42 4.2 实验方法42-44
4.2.1 三岛柴胡悬浮培养系的建立42
4.2.2 三岛柴胡悬浮培养条件优化42-44
4.2.3 悬浮培养中细胞鲜、干重的测定44 4.3 结果与分析44-53
4.3.1 悬浮培养基本培养基、pH值和不同来源愈伤组织的筛选44-50
4.3.2 悬浮培养激素条件优化50-53 4.4 讨论53-54 4.5 本章小结54-555 三岛柴胡悬浮培养中生理指标的测定55-62 5.1 实验材料和主要试剂、设备55
5.1.1 实验材料55
5.1.2 主要试剂55
5.1.3 主要设备55 5.2 实验方法55-56
5.2.1 三岛柴胡稳定悬浮系的获得55
5.2.2 三岛柴胡悬浮培养中生理指标的测定55-56 5.3 结果与分析56-61
5.3.1 三岛柴胡愈伤组织悬浮细胞生长规律56
5.3.2 pH变化曲线的绘制56-57
5.3.3 电导率变化曲线的绘制57-58
5.3.4 细胞生长与电导率变化的关系58-59
5.3.5 pH的变化与电导率变化的关系59
5.3.6 蔗糖消耗曲线的绘制59-60
5.3.7 培养物与蔗糖消耗的关系曲线60-61 5.4 本章小结61-62结论62-63参考文献63-69附录A 相关图片69-71攻读硕士学位期间发表学术论文情况71-72致谢72-73
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