溶液的配制教案方法?

MTT溶液的配制方法是什么?
通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住.需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数.在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内.MTT一般最好现用现配,过滤后4℃避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解.我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了.MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.……详细资料请参考:on
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如何配制标准溶液?
标准溶液配置的直接配置法和标定法两种。 (1) 直接配制法 在分析天平上准确称取一定量已干燥的基准物溶于水后,转入已校正的容量瓶中用水稀释至刻度,摇匀,即可算出其准确浓度。 (2) 标定法
很多物质不符合基准物生物条件,不能直接配制标准溶液。一般先将这些物质配成近似所需浓度溶液,再用基准物测定其准确浓度。标定的方法有直接标定和间接标定两种,间接标定的系统误差比直接标定要大些。 标准溶液的配制和标定有两种标准,分别是SH/T0079《石油产品试验用试剂溶液配制方法》和GB/T601-2002《化学试剂标准滴定溶液的制备》。我们目前采用的是SH/T0079.配制标准溶液应注意一下几点: (1) 溶液配制中所用的水,在没有注明其它要求时,应符合GB6683中三级水规格。所用乙醇是指95%乙醇。 (2) 标定溶液和配制基准溶液所用试剂为容量分析基准试剂。配制一般溶液所用试剂纯度不低于分析纯。 (3) 溶液配制中使用的分析天平的砝码、滴定管、容量瓶及移液管等需按计量检定规程要求定期检定。 (4) 配制溶液所称取的试剂质量,应在所规定的质量±10%以内。 (5) 标定标准滴定溶液浓度时,单次标定的浓度值与算术平均值之差不应大于算术平均值的0.2%。至少取三次标定结果的算术平均值作为标准滴定溶液的实际浓度。 (6) 标准滴定溶液和基准溶液的浓度取四位有效数字。 (7) 所配制的标准滴定溶液的浓度值与所规定的浓度值之差不应大于规定浓度值的±5%。 (8) 用标定和比较两种方法标定溶液浓度时,如有争议应以标定法为准。
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在液面快达到刻度线时,摇匀,至液面最低处与刻度线相切,将液体倒入容量瓶中.6gKOH。用玻璃棒引流.6g天平取5.1=5,改用胶头滴管。盖上瓶盖,用蒸馏水溶解.1*1=0,将溶液倒入容量瓶(1L)中。用蒸馏水冲洗烧杯数次.1mol
m=M*n=(39+16+1)*0,溶解在烧杯内n=c*v=0
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p>不同标准溶液有不同的标准.hiphotos.baidu.hiphotos.jpg" target="_blank" title="点击查看大图" class="ikqb_img_alink"><img class="ikqb_img" src="/zhidao/pic/item/b738dcea6a03bb51bb051f819ec3f.baidu,配置时建议先查找相应的标准文献://h.com/zhidao/wh%3D450%2C600/sign=6be21e6dedf81a4c2667e4cde21a4c6f/b738dcea6a03bb51bb051f819ec3f,化学试剂标准滴定溶液的制备 》中氢氧化钾标准溶液的配置(见下图)<a href="/zhidao/wh%3D600%2C800/sign=95ce1cc7c0/b738dcea6a03bb51bb051f819ec3f.baidu.jpg" esrc="http://h://h。
例如,然后根据标准配置.hiphotos:《GB/T601-2002
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出门在外也不愁LPS溶液的配制方法(配制,高压灭菌,细胞培养) - 细胞实验 - 生物秀
标题: LPS溶液的配制方法(配制,高压灭菌,细胞培养)
摘要: [LPS溶液的配制方法(配制,高压灭菌,细胞培养)] 我是新手啊,要配LPS溶液(用于细胞培养),问下使用PBS还是水来溶解,溶剂得先高压灭菌吗?溶液配完后用过滤或者高压灭菌吗?配成多大浓度的比较合适?谢谢啦 关键词:[配制 高压灭菌 细胞培养]……
我是新手啊,要配LPS溶液(用于细胞培养),问下使用PBS还是水来溶解,溶剂得先高压灭菌吗?溶液配完后用过滤或者高压灭菌吗?配成多大浓度的比较合适?谢谢啦
回复先用水溶解,一次性滤菌器(0.22um)过滤后分装于小管内,-20度冻存,临用前用培养液稀释。至于终浓度,要看你的试验目的了。回复谢谢啦回复先用水溶解,一次性滤菌器(0.22um)过滤后分装于小管内,-20度冻存,临用前用培养液稀释。至于终浓度,要看你的试验目的了。麻烦问下,里有人说LPS配出来是悬浊液,过滤影响使用吗?回复我以前用的那个LPS(忘了是哪个公司的)没有浑浊的现象,可能是配制得比较稀(用双蒸水配制成浓度为400 μg/mL的溶液),刚才查了下SIGMA的说明书,确实说有浑浊现象,我把配制和贮存部分贴在下面:Lipopolysaccharidesfrom Escherichia coli O111:B4Catalog Number L2630Storage Temperature 2–8 °CSynonym: LPSPreparation InstructionsThe product is soluble in water (5 mg/ml) or cell culture medium (1 mg/ml) yielding a hazy, faint yellow solution. A more concentrated, though still hazy, solution (20 mg/ml) has been achieved in aqueous saline after vortexing and warming to 70–80 °C. Lipopolysaccharides are molecules that form micelles in every solvent. Hazy solutions are observed in water and phosphate buffered saline. Organic solvents do not give clearer solutions. Methanol yields a turbid suspension with floaters, while water yields a homogeneously hazy solution. For cell culture use, LPS should be reconstituted by adding 1 ml of sterile balanced salt solution or cell culture medium to a vial (1 mg) and swirling gently until the powder dissolves. Solutions can be further diluted to the desired working concentration with additional sterile balanced salt solution or cell culture medium.Storage/StabilitySolutions at 1 mg/ml in buffer or culture medium are stable for ~1 month at 2–8 °C. Frozen aliquots can be stored up to 2 years. Repeated freeze/thaw cycles are not recommended. Solutions should be stored in silanized containers, since LPS can bind to plastics and certain types of glass (especially at concentrations of 1 mg/ml, adsorption to the sides of the vial is negligible. If glass containers are used, solutions should be vortexed for at least 30 minutes to redissolve the adsorbed product.做试验不差钱的话当然是SIGMA的比较可靠,我用双蒸水配制成浓度为400 μg/mL的溶液,过滤除菌,-20℃保存;临用前用RPMI 1640培养液稀释10倍(细胞孔内终浓度是20 μg/mL)。按说明书上来看,配成1 mg/ml比较合适,可以忽略粘附在管壁上的量,也不用过滤,用前以培养基稀释就可以了。回复万分感谢回复今天发现SIGMA提供"gamma-irradiated"的LPS,就是射线照过除菌的,说明上也写着适用于。货号是L2654、L6529、L4391、L4516(这些是从E coli 提取的)、L7770、L4641(这两个是从Salmonella minnesota 提取的),还有很多不同来源的。L2654现在就卖270元/mg。回复配置LPS应该用灭菌过的双蒸水或者是PBS。想请教一下楼主,你配的LPS母液终浓度是多少,是什么颜色,我买的10mg的分装的sigma的LPS,配成2mg/ml的储备液,可是无色透明的,感觉问题,想请教一下各位前辈这个是什么原因。而且根据说明书上说的,应该是混悬液,成淡黄色才对。万分感谢啊!回复配置LPS应该用灭菌过的双蒸水或者是PBS。想请教一下楼主,你配的LPS母液终浓度是多少,是什么颜色,我买的10mg的分装的sigma的LPS,配成2mg/ml的储备液,可是无色透明的,感觉问题,想请教一下各位前辈这个是什么原因。而且根据说明书上说的,应该是混悬液,成淡黄色才对。万分感谢啊!我配的是1.0mg/ml的母液,是无色透明的回复我配的是1.0mg/ml的母液,是无色透明的请问溶解时用的容器也需要硅烷化的吗?还是用一般容器就好,保存时用硅烷化EP保存。另外溶解后可以用滤器滤吗,因为是用于细胞实验?回复请问溶解时用的容器也需要硅烷化的吗?还是用一般容器就好,保存时用硅烷化EP保存。另外溶解后可以用滤器滤吗,因为是用于细胞实验?我就用的普通的EP管,因为配制1.0mg/ml的浓度时,贴壁的LPS可以忽略不计的,因为我只配了1ml,没法过滤了,你可是直接买用于细胞试验的LPS,直接用无菌PBS溶解就行了。回复LZ实验效果如何买个哪个货号的LPS?谢谢
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电话:021-您现在的位置:&&>&&>&&>&&>&正文
一、常规溶液
(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)
甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液
Na2HPO4 &&&&&&&&&&&&&&&&&& 9.465g
蒸馏水&&&&&&&&& &&&&&&&&&&加至1000ml
乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液
KH2P04&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 9.07g
蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至1000m1
分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:
&&& (二)0.3%台盼兰染液
&&& 称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
&&& (三)0.5%酚红指示剂
&&& 酚红&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.5g
0.1N(0.4%)NaOH&&&&&&&&&& 15ml
&&& 双蒸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 85ml
&&& 将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
&&& (四)5.6%NaHCO3溶液
&&& 称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)
&&& (五)10μg/ml秋水仙素
&&& 秋水仙素&&&&&&&&&&&&&&&&&&& lOmg
生理盐水&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
&&& (六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液
&&& 将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
&&& (七)2%柠檬酸钠
&&& 称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
&& (八)0.2%次甲基兰染液
&&& 称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
&&& (九)0.5%醋酸洋红(Aceio Carmine)染液
&&& 洋红&&&&&&&&&&&&&&&&&&& lg
&&& 醋酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 90ml
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&& &&&&&&110ml
&&& 将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸,然后将火焰移去,立即加入1克洋红,使之迅速冷却过滤,加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好,室温保存。
&&& (十)1%甲苯胺兰(Toluidine blue)
&&& 称取甲苯胺兰1克,加蒸馏水lOOml。
&&& (十一)1/3000中性红染液
&&& 取中性红(Neutral red)0.1克,加蒸馏水300ml。室温保存。
&&& (十二)Giemsa染液
&&& 1.贮备液
Giemsa粉&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1g
&&&&&&& 纯甘油&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 66ml
&&&&&&& 甲醇&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 66ml
&&& 先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油,充分研磨,呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入,放入56℃温箱中2小时,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。
&&& 2.工作液
&&& 临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。
&&& (十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液
&&& 苏木精&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1.0g
&&& 乙醇&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 50ml
&&& 醋酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 5ml
&&& 甘油&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 50ml
&&& 硫酸铝钾&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 5g
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 50ml
&&& 将苏木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。
&&& 二、细胞化学和细胞组分分离溶液
&&& (一)M一缓冲液
&&& 眯唑(Imidazole)&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 3.404g
&&& KCI&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&3.7g
&&& MgCl2?6H2O&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&101.65mg
&&& ECTA&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 380.35mg
&&& EDTA&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 29.224mg
&&& 巯基乙醇&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.07ml
&&& 甘油&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 297ml
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至1000ml
&& &用lNHCl调pH至7.2室温保存。
&&& (二)2%Triton X一100溶液
&&& 量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M缓冲液98ml即可。
&& (三)0.2%考马斯亮兰R-250染液
&&& 甲醇&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 46.5ml
&&& 醋酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 7.0ml
&&& 考马斯亮兰&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.2g
蒸馏水&&&&&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&加至100ml
(四)A.0.1%碱性固绿染液(pH8.0~8.5)
&&& 1.0.1%固绿水溶液
&&& 固绿(Fast green)&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.1g
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
&&& 2.0.05%Na2C03溶液
&&& Na2C03&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 50mg
蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
用时按1:1体积混合即可。
&&& B.0.1%酸性固绿染液(pH2.2)
&&& 1.0.1%固绿水溶液。
&&& 2.mol/L×75盐酸液
&&& 盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml
&&& 用时按l:1混合。
&&& (五)甲基绿一哌咯宁染液
&&& 1.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):
&&&&&&& (1)醋酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 17ml
&&&&&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至200ml
&&& &&&&(2)醋酸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 13.5g
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至lOOml
用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
&&& 2.甲基绿一哌咯宁(methyl green―Pyrcnln)
&&& &&&&5%哌咯宁水溶液&&&&&&&&&&&&&&&& 6ml
&&& &&&&2%甲基绿水溶液&& &&&&&&&&&&&&&&6ml
&&& &&&&蒸馏水&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&16ml
&&& &&&&lmol/L醋酸缓冲液&&&&&&&&&&&&&& 16ml
&&& lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
&&& (六)Schiff
&&& 将碱性品红0.5克加入lOOml沸水,持续煮沸5分钟,并随时搅拌,待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中,加1N HC11O毫升,冷却至25℃时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡,避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。
&&& (七)联苯胺混合液
&&& 联苯胺(4.4 Diamino benzidine)&&&&&& 0.2g
&&& 95%乙醇&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& lOOml
&&& 3%过氧化氢&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2滴
&&& 此液临用时配制。
&&& (八)l%番红水溶液
&&& 番红(Safranin)&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1.0g
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
&&& (九)1%SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)
&&& SDS&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 10g
&&& 45%乙醇&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
&&& (十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8
&&& Tris&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 12.114g
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&lOOml
&&& 先将Tris溶于少量蒸馏水,用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml
& (十一)Ringer Solution
氯化钠(冷血动物用0.65克)&&&&&&&&&& 0.9克
氯化钾&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.042克
氯化钙&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.025克
蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
(十二)淀粉肉汤培养基
蛋白&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&2g
淀粉&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 6g
牛肉汤&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
用10%NaHCO3调pH至7.0~7.2
(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液
蔗糖&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 85.5g
氯化钙&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.33g
蒸馏水&&&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&1000ml
(十四)1%詹纳斯绿B染液
取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml
(十五)1%刚果红染液
刚果红&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1g
蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
(十六)Gomori硝酸铅作用液
0.05mol/L醋酸缓冲液(pH5)&&&&&&&&& lOOml
0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其&&&&&&&& 42ml
醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml,取其158ml共200ml
B-甘油磷酸钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2g
醋酸铅&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2g
5%氯化镁&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 5ml
以上作用液在临用时配制,最终在pH5~5.2,过滤使用。
(王世藩& 汇编)
三、和细胞融合溶液
(一)0.01mol/LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline,PBS)pH7.2。
0.2mol/L磷酸氢二钠液(甲液):&
NaH2PO4?12H2O&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 35.814g
双蒸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至500ml
0.2mol/L磷酸二氢钠液(乙液):
&&& NaH2PO4?12H2O&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 15.601g
&&& 双蒸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至500ml
&&& 取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克,加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装,经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
&&& (二)50%PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)
&&& 称取0.5克PEG,用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化,加入等量37℃予热的MEM培养液,混匀,保温在37℃水浴中待用。
&&& (三)MEM培养液(含10%小牛血清)
&&& MEM培养液(日本株式会社)&&&&&&& 9.4g
&&& 双蒸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1000ml
&&& NaHCO3&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& &&&&&&&&&1.5g
&&& 谷氨酰胺(L-glutamin)&& &&&&&&&&&&&&0.292g
&&& 56℃灭活30分钟的小牛血清110ml
&&& MEM粉末加水溶解后,用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2~0.3),然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺,待完全溶解后,立即用G6抽滤除菌,分装,置4℃冰箱保存备用。
&&& (四)0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液
&&& 胰蛋白酶(Trypsin)粉&&&&&&&&&&&&&&&& 0.25g
&&& EDTA粉&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 20.0mg
&&& 0.01mol/L PBS&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
&&& 先用少量PBS溶解胰蛋白酶,然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合,置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解,液体呈透明为止),用G5抽滤,分装置4℃冰箱中保存。
&&& (五)Hanks液
&&& 1.原液甲
&&& NaCl&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 160g
&&& KCl&&&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&8g
&&& MgSO4?7H2O&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2g
&&& MgCI2?6H2O&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2g
&&& 溶于800ml馏水中。
&&& CaCl2(无水)&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2.8g
&&& 溶于100ml蒸馏水中。
&&& 将两种液体混合后,加水至1000ml用滤纸滤过,再加2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
&&& 原液乙
&&& Na2HPO4?12H2O&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&3.04g
&&& KH2PO4&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1.2g
&&& 葡萄糖&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 20.0g
&&& 溶于800ml蒸馏水中,用滤纸过滤,然后加0.5%酚红80ml,再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
&&& 2.使用液
&&& 甲乙两液各1份,双蒸水18份,混匀分装包扎好瓶口,经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。
&&& (六)1640培养液(含lO%小牛血清)
&&& RPMI-1640粉&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 10.39g
&&& 双蒸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至1000ml
&&& 通入适量的C02气体,边通入CO2边慢慢搅拌,使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO31.5克调pH值到7.2。
&&& 双抗1万u/ml&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&10ml
&&& 灭活小牛血清&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 110ml
&&& 混匀上述液体,立即用G6抽滤除菌分装,置4℃冰箱备用。
&&& (七)青、链霉素溶液
&&& 青霉素钠盐(40万u/瓶)&&&&&&&&&&&&&&&& 5瓶
链霉素(100万u/瓶)&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2瓶
将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水,分装小瓶,-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
&&& (八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4%。
&&& (九)BrdU溶液(200ug/m1)
&&& 用无菌青霉素瓶,在室温下称取1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml,溶解,混匀,用黑纸包严,避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。
& &&(十)2×SSC溶液
用分析称取氯化钠17.53克,柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中,加蒸馏水至1000毫升。
& (十一)3%琼脂:
取琼脂粉3克,加入双蒸水到100毫升,搅匀,高压消毒后(15磅20分钟),冷藏备用,使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。
四、制备电镜标本的溶液
(一)2.5%戊二醛溶液
25%戊二醛&&&&&&&&&&&&&&&&&&& lOml
&&& 0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液
&&& 装入茶色瓶中,保存于4℃冰箱备用。
&&& (二)0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液
&&& 二甲砷酸钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 10.70g
&&& 蒸馏水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 500ml
&&& 将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中,先加水约400ml,震荡使其溶解,用HCl调pH到7.4,加入剩余蒸馏水,4℃冰箱保存。
&&& (三)包埋剂
环氧树脂Epon812&&&&&&&&&&&&&&& 56.30g&&
DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic
&&& anhydride,DDSA)&&&&&&&&&&&&&&& 14.60g
&&& MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)
&&& anhydride,MNA&&&&&&&&&&&&&&&&& 29.00g
&&& 混合上述三种包埋剂成分,搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2,4,6-tridimethyl aminomethylphenol,DMP-30)1.5ml,继续搅拌30分钟,置于干燥罐中(室温)备用。
&&& (四)2%单宁酸
&&& 单宁酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 2g
&&& 双蒸水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 100ml
溶解后过滤装茶色瓶中,4℃冰箱保存。
(五)高锰酸钾固定剂
柠檬酸三钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 60mmol/L
氯化钾&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 25mmol/L
氯化镁&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&35mmol/L
&&& 高锰酸钾&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 125mmol/L
pH为7.4-7.8,装茶色瓶中,4℃冰箱中保存,有效期2个月左右。
(六)1%OsO4溶液
&OsO4&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 0.5g
&0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。&&&&& 50ml
&&&& OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装,配制时剥去商标,用自来水洗净,放洗涤液中泡4~12小时后用水冲洗,在安瓶上划痕,用蒸馏水洗净,投入茶色瓶中,加缓冲液,用玻璃棒在瓶中捣碎,轻轻摇动放冰箱中,48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用,用时特别小心,在通风橱内操作。
五、显影、定影溶液
(一)D-72显影液&&&&&&&&&&&&&&&&&
温水(52℃)&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 750ml
米吐尔&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 3g
无水亚硫酸钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 45g
对苯二酚&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 12g
无水碳酸钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 67.5g
溴化钾&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 19g
&&& 水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 加至1000ml
&&& D-72显影液为通用显影液,既能显影胶片又能用于相纸显影。
&&& 使用原液,20℃显影时间1~2分钟可得高反差。
&&& 加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20℃时显影时间3~4分钟可得正常反差。
&&& (二)SB-1停显液配方
&&& 水&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&1000ml
28%醋酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 48ml
&&& 停显时间lO秒左右。
(三)F-5酸性坚膜定影液
水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 750ml
硫代硫酸钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 240g
无水亚硫酸钠&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 15g
28%醋酸&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 48ml
硼酸&&&&&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&&&&7.5g
钾矾&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 15g
水&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1000ml
定影时,药液温度应保持在18~20℃定影时间10~15分钟。
&&& 配药原则
&&& 配制时先取容量3/4的清水,水温50℃左右,按配方的顺序,把称好的药逐一加入,只有前一药品溶解后,方可放入第二种药品,并继续溶解下去,最后将清水加至全量。
&&& 配完后要经12小时,待各种药品充分作用后才能使用。
&&& 上述各种溶液配制好后,匀应贴瓶签,注明名称,浓度及配制日期,并按规定方法保存,用前检查有无变质或污染现象后,方可使用。
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