52综述Δ肝细胞癌血管生成的免疫组织化学研究及影像学表现
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52综述Δ肝细胞癌血管生成的免疫组织化学研究及影像学表现
临床放射学杂志2005年第24卷第8期；?741?；?综述Δ；肝细胞癌血管生成的免疫组织化学研究及影像学表现；燕综述；闵鹏秋审校；［6，7，10］；无规律；血管生成（angiogenesis）对于肿瘤发生；［1，2］；及抗肿瘤治疗方面都有较重要的影响，故近年来一直是；脉密度有明显的差异，与血管造影结果明显相关，但与；［11］；组织病理学因素间，如门脉受侵、肝
临床放射学杂志2005年第24卷第8期?741??综述Δ肝细胞癌血管生成的免疫组织化学研究及影像学表现刘燕综述闵鹏秋审校［6，7，10］无规律。不同分化程度的HCC中，瘤体内部异常小动血管生成（angiogenesis）对于肿瘤发生、发展、转移、预后［1，2］及抗肿瘤治疗方面都有较重要的影响，故近年来一直是脉密度有明显的差异，与血管造影结果明显相关，但与其他［11］组织病理学因素间，如门脉受侵、肝内转移等无关。肿瘤研究的热点。多种影像学检查技术，尤其是CT、MRI及DSA都可在活体情况下良好地反映肿瘤血供并进行诊断［3，4］。随着医学的迅猛发展，肿瘤早期诊断以及影像医学从形态学向功能成像转变已成为当今主流和趋势。有关影像学病理基础的研究，单纯的组织病理学检查已不能满足这一要求，因而有必要将其更推进一步，即与免疫组织化学联系起来。因为后者通过特异性的抗原、抗体反应，可对肿瘤血供进行更准确、清晰、详尽的研究并获得更深入的信息，例如，通过微血管密度（microvesseldensity，MVD）测定判断肿瘤预后等［5］。肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是富血供的恶性肿瘤之一。影像学对于临床HCC的诊断及治疗起重要作用。为顺应上述趋势，笔者复习近年来关于HCC血管生成免疫组织化学及其与影像学相关性方面的文献，从HCC实质、假包膜及其他方面综述如下。1HCC实质血管生成、免疫组织化学及其影像HCC血管生成包括两个过程：新生血管生成（neoangio-genesis）及血窦毛细血管化（capillarizationofsinusoids）［6］。1.1新生血管生成HCC癌实质多为动脉供血。评价HCC癌动脉化主要是对“不成对动脉”（unpairedarteries）的评价，后者是HCC癌实质中存在的一种小动脉［6］，其特点是周围不伴有明显的结缔组织、门静脉或胆管，有学者称之为肿瘤内小动脉（intratu-moralarterioles）［7］。不成对动脉管径小，约10～50μm［7］，常规HE染色发现困难，因而也常被忽略［7，8］。1994年Himeno［7］等采用免疫组织化学的方法确定了HCC中的这些肿瘤小动脉，从而解释了血管造影HCC富血供的征象。他们使用针对平滑肌素的特异性单克隆抗体（anti-smoothmuscleactin，ASMA），通过对不成对动脉壁中较厚的肌性成分染色，即中肌层显示强阳性，从而使之易于确定，并可进行计数定量研究。后来一些学者也多采用这种方法［6，8～11］。不成对动脉不出现于正常肝脏中；于慢性肝硬化结节中偶有出现（10个100倍视野内其数目不超过5）［6］；而从低度异常增生结节、高度异常增生结节到HCC，其数目则有上升的趋势［6，9～10］，与血管造影发现相符合［10］。大多数HCC内（52%），不成对动脉数目明显升高（&36支动脉/10个100倍视野），且分布作者单位：200025上海第二医科大学附属瑞金医院放射科（刘燕）；610041四川大学华西医院放射科（闵鹏秋）在对小肝癌的研究中，Terada等［9］运用ASMA免疫组织化学研究发现小肝癌比临界肝细胞结节中存在更多的动脉成分，他们因此认为血管生成开始出现于临界肝细胞结节中，并随着这些结节向小肝癌发展而逐渐增多。Ikrda等［8］对小肝癌进行免疫组织化学分析，并与影像学检查进行相关性研究，发现癌组织中有两种不同形态的ASMA阳性的非汇管区血管：Ⅰ型为卵圆形、细胞核小、薄壁血管；Ⅱ型为细长形、细胞核大、厚壁血管；两型可同时存在。而在对肿瘤大小、数目、组织学类型、门脉侵犯、ASMA阳性血管数目及形态等众多因素中，多元回归分析发现仅ASMA阳性血管形态与小肝癌影像学表现富血供呈单独相关，且后者与Ⅱ型血管紧密相关。1.2血窦毛细血管化HCC中，与新生血管生成相伴行的还存在另一个过程，被称作“血窦毛细血管化”［6］。其改变主要包括血窦内皮细胞间孔隙减少，细胞-细胞间及细胞-基质间连结改变，基底膜形成，缺乏血窦巨噬细胞，即出现毛细血管和前毛细血管的特征［6，12，13］。而正常肝窦衬有一层不连续的内皮细胞（彼此之间存在间距和空隙），与肝细胞板之间以窦周间隙间隔，且无形态学可确定的基底膜出现［12］。这些都是为了适应肝窦与内皮下间隙之间自由交换液体和小颗粒的功能以及肝窦内皮细胞内吞运动增多的需要。HCC则缺少这些特殊分化的正常肝窦形态及其相应功能。HCC血窦毛细血管化曾被认为与HCC中动脉供血为主有关［14］，或者是动脉血供超过门脉血供的一种结果，但也有作者认为它似乎并不是血管动力学改变后的一种功能适应结果［6］。伴随上述从正常肝窦到HCC血窦毛细血管化等一系列形态和功能的改变，血窦内皮细胞所表达的细胞-细胞及细胞-基质连结蛋白的情况也相应改变而且截然不同。这方面研究主要针对于以下4组指标：（1）内皮细胞-细胞粘附蛋白。包括PECAM（CD31）和CD34；（2）细胞-基质粘附蛋白。包括1、β3、和β4整和素、CD36和CD44；（3）细胞外基质成分。包括胶原Ⅳ、胶原Ⅵ、板层素、Ⅷ因子相关抗原等；（4）血窦内皮细胞特征性标记物。包括CD4蛋白，免疫球蛋白Fc片段的受体Ⅱ和受体Ⅲ，胺肽酶N（CD13），脂多糖结合蛋白受体CD14蛋白）等。正常肝窦内皮对上述蛋白的表达是十分有限的，而出现毛细血管化时，其表达则有十分显著的改变。下面仅对较常用或涉及功能的某些指标进行详细介绍。β（?742?（Ⅷrelatedantigen，vonWillebrandfactor，Ⅷ因子相关抗原：正常肝脏仅小叶间血管表达Ⅷ因子阳性，肝窦内皮vWF：Ag）［12］［12］表达阴性或轻度表达。Yamamoto等在对鼠的研究中发临床放射学杂志2005年第24卷第8期手术切除后复发情况的研究中进行了CD34免疫组织化学染色，在≤5cm的HCC病灶中，则提示术后早期复MVD较高，［22］发。Ohmori等认为丙型肝炎（HCV）相关慢性肝病中CD34现，随着肝组织从异常增生到HCC形成的不同阶段，Ⅷ因子表达频率增加。他们还发现以动脉供血的HCC组织Ⅷ因子表达均阳性，Ⅷ因子表达阴性的区域可为动脉和门脉双重供血，而无动脉供血的区域则Ⅷ因子表达阴性，故他们认为HCC动脉化出现于血窦内皮Ⅷ因子相关抗原表达阳性之前。许多作者对肿瘤组织进行Ⅷ因子相关抗原染色从而计算肿［15］瘤MVD。El-Assal等的研究发现，微血管在HCC内部是不血窦内皮高度表达是发生HCC的一个危险因素。板层素（laminins）：正常肝窦周间隙不表达板层素免疫组织化学阳性（相应正常内皮细胞缺乏板层素受体，即α21、β，而血窦毛细血管化时，则31、61和α64整和素的表达）ααβββ可于窦周基质中发现有大量板层素沉着，同时也伴有窦壁Ⅷ因子相关抗原表达的增加。抗平滑肌素（anti-smoothmuscleactin，：ASMA）ASMA免疫均匀分布的，一般来讲，接近HCC周边或包膜的组织其MVD值最大。而且MVD与HCC包膜形成有明显相关性。相对于无包膜形成的HCC而言，有包膜形成的HCC其MVD数更高。HCC大小也与MVD数相关，小HCC（直径&2cm）肿瘤组织中的MVD明显低于中等大小的HCC。MVD与包膜形成、血管侵犯、肝内转移或分化程度、血管造影显示的HCC血供程度之间均无明显相关性。荆豆血凝素（Ulexeuropaeuslectin，UEA1）：UEA1是与左旋岩藻糖残基（L-fucoseresidues）结合的一种植物血凝素。因其较Ⅷ因子相关抗原有更强的阳性结果，所以是一个较好的血管内皮细胞标记物。UEA1在正常肝窦不表达，在纤维化、硬化及异常增生的肝组织中表达阳性，而HCC组织阳性表达则更加强烈。不同类型的HCC表达UEA1阳性强度彼此之间无统计学显著性差异，但似乎存在分化越高，其表达越弱的趋势［16］。Li等［17］对51例HCC术后标本分别进行UEA1免疫组织化学计算MVD及血管内皮生长因子（vascularen-dothelialgrowthfactor，VEGF）逆转录多聚酶链反应研究，发现二者之间有明显相关性。CD34：CD34（造血干细胞和内皮细胞的标记物）被认为是一种比Ⅷ因子相关抗原更加敏感的反映新生血管的标记物，血窦内皮CD34阳性表达与其他内皮标记物表达也可是不相一致的［18］。正常肝窦内皮不出现CD34阳性染色［6］。肝硬化结节及非异常增生大结节中也没有CD34的表达［19］。随着低度异常增生结节、高度异常增生结节的顺序，CD34表达逐渐增加。而HCC有较高度异常增生结节更加弥漫性的CD34表达［6，10］，但CD34表达在不同分化程度的HCC中无明显差异［10］，且表达区域与不成对动脉出现区域无相关性增加［6］。Maeda等［20］对小肝癌的研究发现，肿瘤分化越差，其CD34表达阳性区域则越广，而血管造影显示富血供。他们认为HCC从高到中等分化的过程中，血窦出现了毛细血管和前毛细血管的特征，而于血管造影上则显示富血供，即血窦毛细血管化过程与HCC逐步进展相关。在他们的研究中，有9例HCC血管造影无发现，其中7例CD34表达阴性；而5例出现门脉侵犯的病例均表达CD34弥漫阳性。近年来，较多文献通过CD34免疫组织化学研究来评价HCC预后情况［18，21，22］。Salizzoni等［21］用CD34免疫组织化学染色显示HCC中显微镜下血管侵犯情况，并认为后者是HCC肝移植治疗后复发的高危因素。Poon等［18］在评价HCC活性可出现于人肝组织窦周细胞（包括Ito细胞、脂肪储存细胞或星形细胞）以及由窦周细胞衍生来的肌纤维母细胞。窦周细胞被认为可调节血窦微循环，并对细胞外基质蛋白形成有一定作用［9］。用ASMA抗体进行免疫组织化学染色发现：正常肝、慢性肝炎、硬化肝及大再生结节中少有ASMA阳性表达窦周细胞，临界异常增生结节和HCC中则有大量阳性表达，而后者阳性数目更多［9］。Park等［6］对HCC的免疫组织化学研究发现，ASMA阳性的星形细胞分布区域与CD34表达阳性区域经常重叠，尽管后者总是超出前者的范围，即二者似乎有一定相关性。溶菌酶（lysozyme）：免疫组织化学检测溶菌酶的表达是用来研究枯否细胞（Kupffercells）或类似巨噬细胞的方法，并可随机选择光镜下10个高倍视野对溶菌酶表达阳性的巨噬细胞计数［16］。巨噬细胞或枯否细胞主要位于血窦腔内，对血窦内衬层形成也有一定作用。Haratake等［16］发现虽然HCC中的溶菌酶阳性的巨噬细胞数目低于正常肝组织，但在所有HCC（30例）组织中都可发现有一些巨噬细胞存在；较小梁型和致密型而言，硬化型和纤维板层型HCC组织中溶菌酶阳性细胞更少，而硬化肝组织中阳性数目接近甚至超过正常肝阳性数。HCC中出现巨噬细胞的功能还不清楚，但在Haratake等［16］的研究中发现脂滴小体周有多核巨噬细胞，提示至少有一定程度的吞噬活动，这对抗肿瘤药物的靶向性可能比较重要。免疫球蛋白Fc片段的受体（FcRs）：肝窦内皮细胞被认为是摄取各种可溶性大分子的部位，它主要是通过特异性受体介导的胞饮活动来吞噬大量大分子。FcRs是位于内皮细胞的一种可特异结合免疫球蛋白G（IgG）的Fc部分，后者像枯否细胞一样内吞IgG-IC3的降解产物。Muro等［23］使用抗FcRs的抗体进行免疫组织化学研究发现，正常肝组织中，肝窦壁呈连续性的FcRs阳性表达，但在门脉区域周外围无表达；而具有血窦毛细血管化改变的区域，则FcRs阳性表达减少或缺如。随之Muro等［23］推测毛细血管化的血窦其FcRs中介的代谢能力将可能降低。2HCC假包膜血管、免疫组织化学与影像假包膜的出现是HCC大体病理特征之一。磁共振成像MRI），尤其是动态GE序列，被认为是显示假包膜最可靠的检查技术。虽然Morinaga等［11］认为肿瘤内异常小动脉与（临床放射学杂志2005年第24卷第8期［24］对37个HCC病灶进HCC假包膜形成无关。但Grazioli等?743?78etal.HithertounrecognizedarteriolesHimenoH，EnzanH，SaibaraT，217withinhepatocellularcarcinoma.JPathol：IkrdaK，SaitohS，SuzukiY，etal.Relationshipofangiographicfindingwithneovascularstructuredetectedbyimmunohistochemicalstainingofα-smoothmuscleactininsmallhepatocellularcarcinoma.JGastro.&1266Hepato，TeradaT，NakanumaY.Arterialelementsandperisinusoidalcellsinbor-derlinehepatocellularnodulesandsmallhepatocellularcarcinomas.：行UEA1、并与MRI动态CD34及板层素免疫组织化学染色，扫描进行相关性分析发现：假包膜于静脉期内，即动脉期而这种强化是因为假包膜HCC肿瘤自身强化之后出现强化，中自身有新生血管结构（特点为缺少肌性成分，CD34、UEA1染色阳性）的出现；假包膜于静脉期出现强化的早晚不同，而这种速率的差异主要依赖于假包膜内血管的数目而非血管腔的大小，即假包膜的强化行为与其血管数目之间呈良好的正相关关系。3其他方面介入治疗是一种较重要的治疗HCC的方法。而治疗前了解肿瘤血供则是十分重要的。使用免疫组织化学的方法可帮助研究抗肿瘤药物于体内的代谢过程，到达肿瘤的部位及肿瘤的血供来源等。溴脱氧尿嘧啶核苷（Bromod-eoxyuridine，BrdU）是胸腺嘧啶（Thymidine）的竞争性类似物，S期细胞会结合它，后通过使用抗BrdU单克隆抗体免疫组织化学技术则可使其显色。使用这种方法，就可能于显微镜下直接看到作用于DNA合成的抗代谢剂所到达的区域。有学者［25］用BrdU替代氟脱氧尿嘧啶核苷（fluorodeoxyuridine）或5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil）通过不同途径注射入HCC患者体内，后切除肿瘤，对其进行抗BrdU抗体免疫组织化学染色，发现肿瘤细胞核有阳性反应；而通过动脉和门静脉途径分别注射BrdU，肿瘤细胞核也有阳性表现，提示HCC为动脉和门脉双重血供。因为目前HCC实际单位时间血流及其血循环功能特点还不明确，故未来HCC血管生成研究应重在研究小肝癌和早期肝癌血流动力学的病理生理方面。而影像学在显示、研究肿瘤血供形态、功能方面是很好的工具之一，且有很大潜力。于此同时，探讨影像与其更精细、更深入的病理基础之间的相关性则是极端重要的。参考文献1FolkmanJ，WatsonK，IngberD，etal.Inductionofangiogenesisduringthetransitionfromhyperplasiatoneoplasia.Nature：582KinoshitaS，HiraiR，YamanoT，etal.AngiogenesisinhibitorTNP-470cansuppresshepatocellularcarcinomagrowthwithoutretardingliverre-generationafterpartialhepatectomy.SurgToday，3LuJP，WangJ，WangT，etal.Microvesseldensityofmalignantandbe-nignhepaticlesionsandMRIevaluation.WorldJGastroenterol，304ChenWX，MinPQ，SongB，etal.Single-leveldynamicspiralCTofhepatocellularcarcinoma：correlationbetweenimagingfeaturesandden-sityoftumormicrovessels.WorldJGastroenterol，5NanashimaA，YanoH，YamaguchiH，etal.Immunohistochemicalanalysisoftumorbiologicalfactorsinhe-patocellularcarcinoma：rela-tionshiptoclinicopathologicalfactorsandprognosisafterhepaticresec-tion.JGastroenterol，86ParkNY，YangCP，FernandezGJ，etal.Neoangiogenesisandsinu-soidal“capillarization”indysplasticnodulesoftheliver.AmJSurgPathol，610ParkYN，KimYB，YangKM，etal.Increasedexpressionofvascularendothelialgrowthfactorandangiogenesisintheearlystageofmultistephepatocarcinogenesis.ArchPatholLabMed，：106111MorinagaS，ImadaT，ShimizuA，etal.Angiogenesisinhepatocellularcarcinomaasevaluatedbyalphasmoothmuscleactinimmunohistoche-mistry.Hepatogastroenterology，412YamamotoT，KanedaK，HirohashiK，etal.Sinusiodalcapillarizationandarterialbloodsupplycontinuouslyproceedwiththeadvanceofthestagesofhepatocarcinogenesisintherat.JpnJCancerRes，213YamamotoT，HirohashiK，KanedaK，etal.Relationshipofthemi-crovasculartypetothetumorsize，arterializationanddedifferentiationofhumanhepatocellularcarcinoma.JpnJCancerRes，0714RuckP，XiaoJC，KaiserlingE.Immunoreactivityofsinusoidsinhepatocellularcarcinoma.AnimmunohistochemicalstudyusinglectinUEA-1andantibodiesagainstendothelialmarkers.ArchPatholLabMed，：17315El-AssalON，YamanoiA，SodaY，etal.Clinicalsignificanceofmi-crovesseldensityandvascularendothelialgrowthfactorexpressioninhepatocellularcarcinomaandsurroundingliver：possibleinvolvementofvascularendothelialgrowthfactorintheangiogenesisofcirrhoticliver.Hepatology，5416HaratakeJ，ScheuerPJ.Animmunohistochemicalandultrastructuralstudyofthesinusiodsofhepatocellularcarcinoma.Cancer，8517LiXM，TangZY，QinLX，etal.Serumvascularendothelialgrowthfac-torisapredictorofinvasionandmetastasisinhepatocellularcarcinoma.JExpClinCancerRes，118PoonRT，NgIO，LauC，etal.Tumormicrovesseldensityasapredictorofrecurrenceafterresectionofhepatocellularcarcinoma：Aprospectivestudy.JClinOncol，7519FrachonS，GouysseG，DumortierJ，etal.Endothelialcellmarkerex-pressionindysplasticlesionsoftheliver：animmunohistochemicalstudy.JHepatol，020MaedaT，AdachiE，KajiyamaK，etat.CD34expressioninendothelialcellsofsmallhepatocellularcarcinoma：itscorrelationwithtumourpro-gressionandangiographicfindings.JGastro&Hepato，021SalizzoniM，RomagnoliR，LupoF，etal.Microscopicvascularinvasiondetectedbyanti-CD34immunohistochemistryasapredictorofrecurrenceofhepatocellularcarcinomaafterlivertransplantation.Transplantation，422OhmoriS，ShirakiK，SugimotoK，etal.HighexpressionofCD34-positivesinusoidalendothelialcellsisariskfactorforhepatocellularcar-?744?cinomainpatientswithHCV-associatedchronicliverdiseases.HumPathol，6323MuroH，ShirasawaH，KosugiI，etal.DefectofFcreceptorsandphe-notypicalchangesinsinusoidalendothelialcellsinhumanlivercirrhosis.AmJPathol，：1052524临床放射学杂志2005年第24卷第8期GrazioliL，OlivettiL，FugazzolaC，etal.Thepseudocapsuleinhepato-cellularcarcinoma：correlationbetweendynomicMRimagingandpathol-ogy.EurRadiol，TaniguchiH，DaidohT，ShioakiY，etal.Bloodsupplyanddrugdeliv-erytoprimaryandsecondaryhumanlivercancersstudiedwithinvivobromodeoxyuridinelabeling.Cancer，（收稿：修回：）?病例报告Δ卵巢纤维泡膜细胞瘤二例马立公，马占龙，鲍海华，吴有森卵巢纤维泡膜细胞瘤（fibrothecomasoftheovary）是女性卵巢肿瘤中罕见的良性肿瘤，据北京协和医院总结1802例卵［1］巢肿瘤中仅有2例（0.1%）。我院遇到2例，报告如下。等量腹水，平扫盆腔内一大小约9.9cm×15.6cm椭圆形软组织肿块影，边缘光滑锐利，其内密度不均，部分坏死区呈低密度影，增强后实质部分有中度强化，囊变CT值11～21HU，部分未强化，前缘达前腹CT值12～47HU。周围肠管受压，壁（图2、。CT拟诊：右卵巢恶性占位。术中所见：肿块位3）于右侧卵巢，为实质性，蒂扭转3周，大小约16cm×18cm×与大网膜、腹膜及肠管粘连，但易分离，肿18cm。包膜完整，块表面呈坏死状。病理诊断：右卵巢纤维泡膜细胞瘤。讨论卵巢纤维泡膜细胞瘤是卵巢性索间质瘤（sex的一种，良性生物学行为，预后好。性索cord-stromaltumors）间质瘤起源于卵巢特殊间叶组织，反应了性索从原始未分化期到成熟期性腺各阶段的发育过程，包括颗粒细胞、卵泡膜细胞、支持细胞等。卵巢纤维泡膜细胞瘤占卵巢肿瘤的绝大部分发生于绝经后，青春期前很少见，单0.5%～1.0%，［2］侧多见。本病大多表现为单个边缘清楚的椭圆形实性肿［3］回顾性分析了25例手术病理证实的卵巢泡膜块。Bazot等例117岁。1年前无明显诱因出现右下腹绞痛，20d前下腹部胀满不适，进食后加重，双下肢水肿。体检：中下腹偏右触及一大小约20cm×25cm的肿块，质中等硬度，触痛阳性，边界不清，表面欠光滑，无反跳痛，移动性浊音阳性。大量腹水，平扫下腹部一大小约15.2cm×18.1cmCT表现：的软组织密度影，边缘光滑锐利，内部密度不均，大部分为呈片状和分隔状的实性肿瘤，部分坏死囊变区CTCT值45HU，值为12HU（图1）。CT拟诊为卵巢恶性占位。术中所见：腹腔及盆腔内充满大量淡黄色清亮腹水，约500ml，肿块位于右侧卵巢，大小约20cm×19cm×22cm，表面光滑，质地较硬，占据整个盆腔，蒂扭转360o，腹膜充血明显。病理诊断：卵巢纤维泡膜细胞瘤伴有出血坏死。例257岁。1周前无意中扪及下腹部一儿头大小肿块，无明显自觉症状。体检：下腹偏右可触及一大小约质硬，活动度差，有压痛。CT表现：中12cm×18cm的包块，细胞瘤的CT表现，发现79%表现为实性占位，并伴有CT强化（CT值&10HU），约13%的病例伴有部分囊变，其中2例伴有扭转。本组1例为17岁少女，更为罕见。由于本病发现率低，临床表现又不典型，加之本组2例均有蒂扭转而产生大量腹水及坏死，故手术前均误诊为卵巢恶性占位。本病确诊要依靠病理检查。发生于单侧卵巢的伴有囊变的境界清楚的实质性肿块要想到本病的可能。卵巢泡膜细胞瘤在病理上大部分合并不同程度的纤维成分，卵巢纤维泡膜细胞瘤和卵巢泡膜细胞瘤为同一病种。纤维泡膜细胞瘤一般伴有内分泌功能，但本组2例并无明显内分泌增高的临床表现，术前也未做相关实验室检查。参考文献123连利娟，刘彤华，刘织明，主编.林巧稚妇科肿瘤学.北京：人民卫生出版社，刘复生，刘彤华，主编.肿瘤病理学.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，BazotM，GhossainMA，BuyJN，etal.Fibrothecomasoftheovary：CTandUSfindings.JCoputAssistTomogr，4（收稿：修回：）图1例1。大量腹水，CT平扫见一椭圆形软组织密度影，边缘光滑，其内密度不均，可见片状和分隔状的实质影和水样密度影图2、3例2。图2为平扫，图3为增强。中等量腹水，盆腔内见椭圆形软组织密度影，实质部分呈片状软组织影，其余为囊状密度影，增强后实质部分中度强化作者单位：810001西宁，青海医学院附属医院影像中心包含各类专业文献、专业论文、高等教育、幼儿教育、小学教育、应用写作文书、文学作品欣赏、行业资料、生活休闲娱乐、各类资格考试、外语学习资料、52综述Δ肝细胞癌血管生成的免疫组织化学研究及影像学表现等内容。
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19免疫组织化学和细胞化学技术-8
组化染色的标准化还需包括试剂、染色程序以及读片评；2．AR的作用机理目前尚无定论；36；本节抗原修复部分参考文献；1.LarssonL-I.Immunocytoc；.；2.HuangS-N.Immunohistoch；3.TaylorCR，CoteRJ.Immuno；4.ShiS-R，GoodmanML，BhanA；5.Fraenkel
　组化染色的标准化还需包括试剂、染色程序以及读片评估等的标准化。为达到目的，尚需结合实际临床随访资料的对比研究以求得合适的阳性阈值而准确反映临床预后和治疗方案的选择。此外，应建立标准对照材料，如阳、阴性细胞株。组成一个完整的对照体系：包括细胞株的冰冻切片、常规甲醛固定石蜡切片以及相关的免疫蛋白电泳定量资料等。2．AR的作用机理目前尚无定论。作者等根据一些实验结果及文献资料，提出加热水解蛋白质交联产物的学说。一般认为甲醛固定引起的蛋白质交联产物可以造成遮蔽抗原结构而丧失抗原抗体反应。AR加热水解蛋白质交联产物可以恢复其反应性，从而取得优良的免疫组化染色效果。一个最简单的实验证据就是：将石蜡切片浸泡于纯甘油中煮沸10min，没有任何AR效果；如在甘油中加入少量水（5%），则可能得到满意的免疫组化染色效果。在此假说基础上的进一步研究，可能有助于AR的标准化以及发展更有效的AR方法。（石善溶）36本节抗原修复部分参考文献1.LarssonL-I.Immunocytochemistry:TheoryandPractice.BocaRaton，.2.HuangS-N.ImmunohistochemicaldemonstrationofhepatitisBcoreandsurfaceantigensinparaffinsections.LabInvest-95.3.TaylorCR，CoteRJ.Immunomicroscopy:ADiagnosticToolfortheSurgicalPathologist.Philadelphia，London，Toronto，Montreal，Sydney，Tokyo.W.B.SaundersCompany1994.4.ShiS-R，GoodmanML，BhanAK，PilchBZ，ChenLB，SunT-T.Immunohistochemicalstudyofnasopharyngealcarcinomausingmonoclonalkeratinantibodies.AmJPathol-63.5.Fraenkel-ConratH，BrandonBA，OlcottHS.Thereactionofformaldehydewithproteins.IV.Participationofindolegroups.JBiolChem-118.6.Fraenkel-ConratH，OlcottHS.Reactionofformaldehydewithproteins.VI.Cross-linkingofaminogroupswithphenol，imidazole，orindolegroups.JBiolChem-843.7.ShiSR，KeyME，KalraKL.Antigenretrievalinformalin-fixed，paraffin-embeddedtissues:anenhancementmethodforimmunohistochemicalstainingbasedonmicrowaveovenheatingoftissuesections.JHistochemCytochem-748.8.ShiSR，CoteC，KalraKL，TaylorCR，TandonAK.Atechniqueforretrievingantigensinformalin-fixed，routinelyacid-decalcified，celloidin-embeddedhumantemporalbonesectionsforimmunohistochemistry.JHistochemCytochem-792.9.BoonME，KokLP.Breakthroughinpathologyduetoantigenretrieval.Mal.JMedLabSci-9.10.GownAM，deWeverN，BattiforaH.Microwave-basedantigenicunmasking.ACRCPress.revolutionarynewtechniqueforroutineimmunohistochemistry.ApplImmunohistochem-266.11.ShiS-R，CoteRJ，TaylorCR.Antigenretrievalimmunohistochemistryandmolecularmorphologyintheyear2001.ApplImmunohistochemMolMorphol（AIMM）-116.12.石砚综述，李甘地，刘卫平审校，加热法修复抗原的方法和应用进展。临床与实验病理学杂志，-267.13.熊正文综述，免疫组织化学技术中抗原修复的研究进展。中华病理学杂志，-126.14.ShiS-R，GuJ，TaylorCR.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularMorphology.Natick，Massachusetts.EatonPublishing.2000.15.TaylorCR，ShiS-R，GuJ.Overview:Theantigenretrievaltechniqueforimmunohistochemistry:“thinksimple“.InShiS-R，GuJ，TaylorCR，eds.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularMorphology.Natick，Massachusetts.EatonPublishing..16.王荣光，火棉胶包埋颞骨切片免疫组织化学技术。姜泗长主编，耳解剖学与颞骨组织病理学。北京，人民军医出版社。.17.ShiSR，CoteRJ，TaylorCR.Antigenretrievalimmunohistochemistry:past，present，andfuture.JHistochemCytochem-343.18.NortonAJ，JordanS，YeomansP.Brief，high-temperatureheatdenaturation（pressurecooking）:asimpleandeffectivemethodofantigenretrievalforroutinelyprocessedtissues.JPathol-379.19.TaylorCR，ShiSR，ChenC，YoungL，YangC，parativestudyofantigenretrievalheatingmethods:microwave，microwaveandpressurecooker，autoclave，andsteamer.BiotechHistochem-270.20.ShiS-R，CoteRJ，ChaiwunB，YoungLL，ShiY，HawesD，T.C，TaylorCR.Standardizationofimmunohistochemistrybasedonantigenretrievaltechniqueforroutineformalin-fixedtissuesections.ApplImmunohistochem-96.21.ShiSR，ImamSA，YoungL，CoteRJ，TaylorCR.AntigenretrievalimmunohistochemistryundertheinfluenceofpHusingmonoclonalantibodies.JHistochemCytochem-201.22.StirlingJW.Antigenretrievalandunmaskingforimmunoelectronmicroscopy.InShiS-R，GuJ，TaylorCR，eds.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularmorphology.Natick，Massachusetts..23.ShiSR，CoteRJ，TaylorCR.Antigenretrievalimmunohistochemistryusedforroutinelyprocessedcelloidin-embeddedhumantemporalbonesections:standardizationanddevelopment.AurisNasusLarynx-443.24.LanHY，Nikolic-PatersonDJ.Multipleimmunoenzymestaining.InShiS-R，GuJ，TaylorCR，eds.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularMorphology.Natick，Massachusetts.EatonPublishing..25.ShiS-R，CoteRJ，ShiY，TaylorCR.Antigenretrievaltechnique.InShiS-R，GuJ，TaylorCR，eds.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularMorphology.Natick，Massachusetts.EatonPublishing..26.ShiS-R，GuJ，TurrensF，CoteRJ，TaylorCR.Developmentoftheantigenretrievaltechnique:philosophyandtheoreticalbase.InShiS-R，GuJ，TaylorCR，eds.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularMorphology.Natick，Massachusetts.EatonPublishing..第三节免疫荧光组织化学技术一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述免疫荧光组织化学（immunofluorescinhistochemistry）是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事（1941）建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与亲和素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器（fluorescinactivatedcellsorter，FACS）的应用，激光共聚焦显微镜的问世，使免疫荧光细胞技术发展到更高的阶段，开创了免疫荧光技术的新领域。细胞显微分光光度计与图像分析仪的结合使免疫荧光组织化学的定量检测更加准确。80年代到90年代相继又有新的荧光素出现如R-藻红朊、B-藻红朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5、cy7均在流式细胞仪和激光共聚焦显微镜中广泛应用。由于免疫荧光组织化学的特异性，快速性和在细胞水平定位的准确性，已在免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等许多方面得到广泛应用，日益发挥重要的作用。二、免疫荧光组织化学的原理免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，荧光素受激发光的照射，由低能态进入高能态，而高能态的电子是不稳定的，以辐射光量子的形式释放能量后，再回到原来的低能态，这时发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术测定含量（图3-8）。包含各类专业文献、中学教育、生活休闲娱乐、各类资格考试、专业论文、外语学习资料、行业资料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