您好,请问您的那个问题" 巴斯德毕赤酵母母发酵...

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-21 05:38 标签： 巴斯德毕赤酵母
请教毕赤酵母发酵培养基_作业帮
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请教毕赤酵母发酵培养基
请教毕赤酵母发酵培养基
若想拿酿酒酵母进行扩繁生产而最终要获取活性干酵母的话,培养基自然是以糖蜜类为主的液态培养基了.若要通过酵母发酵得到某种预期的代谢产物,则需要有针对性的设计培养基.摘要: 研究了不同培养条件下, 树干毕赤酵母(PICHIA STIPITIS) P2 ..
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不同培养条件对树干毕赤酵母戊糖发酵的影响
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3秒自动关闭窗口毕赤酵母发酵(发酵,毕赤酵母,消泡剂,配制)
15:37:42&&&来源：&&&评论：&&
[毕赤酵母发酵(发酵,毕赤酵母,消泡剂,配制)] 问题:1.PTM1溶液是否是蓝绿色的?在配制的过程中有沉淀,过滤后可除去.
2.发酵培养基在PH=5时能溶解,无色透明状,但加入PTM1后成乳白色混浊状,并有沉淀存在.怎么回事,有没有影响?
3.PTM1加到100%的甲醇中也出现棕色的浑浊,而加到50%甘油中没有此现象?
4.接种酵母后,溶氧一直在90%左右.下不来.
5.消泡剂我用的是豆油 关键词:[发酵 毕赤酵母 消泡剂 配制 发酵培养基 酵母 甘油]…
问题:1.PTM1溶液是否是蓝绿色的?在配制的过程中有沉淀,过滤后可除去.
2.发酵培养基在PH=5时能溶解,无色透明状,但加入PTM1后成乳白色混浊状,并有沉淀存在.怎么回事,有没有影响?
3.PTM1加到100%的甲醇中也出现棕色的浑浊,而加到50%甘油中没有此现象?
4.接种酵母后,溶氧一直在90%左右.下不来.
5.消泡剂我用的是豆油,可能对后续纯化不利,不知道还有没有更好用的消泡剂?我是发酵新手,望不吝赐教!谢谢
回复PTM1溶液配制好后是带点蓝绿色的，您讲的配制的过程中有沉淀，可能是您配制时没有将一个成分溶解完全就加入了另一个成分，还有是否过期失效了，事实上按照PROTOCOL我们从来没有出现过问题，发酵培养基在PH大于6.5时会产生乳白色混浊状,所以发酵时PH控制在6以下,如果产生沉淀,用磷酸调节就行了。第三个问题我还是认为您的PTM1没有配制好，因为我做了3年多PICHIA，一开始也有发生您的问题，后来就不再发生过。第四问题是否是DO电极没有标定好？我们用上海生工的，还好回复非常感谢wongxh2003 回答,我的PH是5.0,超过5.0就白色浑浊,配好后加入PTM1又会出现白色浑浊,实在没办法啊.您的什么名字,或者货号是什么?我去生工买,他们不知道什么东西!回复商品名称：泡敌 化学名称：聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚回复白色沉淀为镁离子发生双水解反应面产生的，Pichia对PH值的适应范围较广，可适当降低PH。回复如果沉淀不多的话可以不予理会，随着发酵的进行会逐渐溶解，且对实验的影响不大
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【求助】请教毕赤酵母发酵时的遇到的一系列问题?谢谢!
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这个帖子发布于7年零101天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
毕赤酵母菌株是MUT+,载体PPIC9K,这几天做了第一次发酵,目前仍在进行中,但已经基本要放弃了.因为没诱导出酶活,在发酵中遇到了一些问题,请大家帮我分析,好为下一罐做好准备,谢谢!1.我最初的甘油低料是3.5L,用氨水调完PH为5.5后,还要加入PTM1,当时为了减少污染把该加入的PTM1与种子混合后(混合种子和PTM1,菌一下到一个高盐环境会不会被毒害?),一起加入了底料中发现有大量白色沉淀,培养基一下子变浑了,是不是我的PH不是5,形成了磷酸钙的沉淀?还有最初接种的BMGY培养基中的磷酸盐缓冲液中的磷酸根也会和PTM1形成沉淀啊?2.延滞期太长.菌接入时的种子OD=8,10%接种,接种后OD=0.8,延滞期有8小时, 到31小时才出现标志着甘油消耗完的溶氧迅速上升,为什么我的延滞期那么长呢?大家有过吗?3.发酵过程中,在甘油底料消耗中的溶氧特别小很小,尤其是过了延滞期,溶氧很快从最初接完种的85%,降到10%一下,继续下降一直在0.5-1%,对数生长期就是这样度过的,(7.5L罐的通气转速都到最大),很奇怪没满足20%DO菌为什么还可以很好的生长?当甘油消耗完,DO迅速上升是最大也就是50%,是不是我们当时标定的不准啊?4.补加50%甘油,完全按照INVITROGEN手册的速度,4小时补完,期间做过DO spike,从没看到过30S,上升10%的情况,没管这个只是补完后饥饿一小时后补加甲醇.但是在开始流加甲醇的7小时后,溶氧又一次上升到了50%,难道这个表明流加的甘油刚刚用完吗?大家都是怎么做的啊?5,当溶氧又一次上升到了50%时,最初以为甲醇不够就快速流加了些甲醇,然后溶氧慢慢又下到10%以下,且最小到过3%,然后自从这以后OD就没再长过,镜检酵母仍有出芽,但是这样维持8个小时后溶氧开始慢慢上升,而且OD有些许下降,会不会是菌被一直积累的甲醇毒害到了,现在已经开始衰退了啊?如果4的推论是正确的话.请大家帮我分析一下吧.谢谢!
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如果你要求不是特别高,不需要优化的话,其实很简单的,浑浊是有的,PTM1盐一加进去,就会浑浊,这很正常,对结果也没有影响,磷酸根和二价,三价阳离子形成沉淀,随着无机盐的消耗,会逐渐溶解的.但你为什么要把种子和PTM1盐混合?甘油一般在24小时左右就会消耗完,你的那么慢,肯定不好,是不是缺少成分?甘油消耗后期,溶氧一般很低,我以前也这样,但结果很好.补加的甘油,4小时加完,是没有问题的.只是补完了应该等甘油耗尽,再饥饿1小时,我个人经验是:甲醇滴加后,溶氧会快速下降,然后快速上升,然后再滴加,就这样循环下去,平均溶氧在30%左右,结果不错,如果滴加甲醇后,溶氧没有反应,结果一般不好,可能发酵罐不一样,我的这个经验也不一定准确.
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我把PTM1与种子混合是为了就开一次罐口就好了，加之前没想清楚，加了以后我才意识到可能有毒害才赶快接种了。
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我的要求不是很高，因为摇瓶的酶量太少，所以我要用罐子提高一下酶量然后多收点可以做下一步的试验。我的这罐已经下了，以失败告终，发现后期流加的甘油怎么消耗的那么慢阿？12个小时才用完，OD由原来的50长到88，因为这个时候才发现溶氧又一次上升。我当时看的INVITROGEN的手册上，以为又继续流加的50%甘油是很有限的碳源，加入后就马上被消耗了，也就是4小时加完也就消耗完了，因此我加完后饥饿了一个小时就开始流加甲醇了，也就是在溶氧又一次上升的7个小时前。但是发现在流加甲醇后的几个小时都没有检测到酶活，直到刚才说的溶氧再次上升后的三个小时才检测到少的可怜的酶活，也就是从溶氧又一次上升时，菌的OD没有继续生长，后来溶氧开始以1%的速度上升，直到我停止培养是溶氧是70%。酶活还是就那么一丁丁点，不再升高。整个过程中没有被污染。培养液上清离心后淡黄色。我的推测如下，大家帮我看看对吗？50%的甘油补加完后再12个小时才用完，也就是溶氧再次上升的时候，但是我却没有确定甘油用完了，就开始甲醇诱导了，在溶氧再次上升时甲醇累计的浓度约为2%，然后菌突然受到毒害，在后期就DO就不长了。溶氧上升了。所以下罐了。不过我在摇瓶上加过2%甲醇菌一点事都没有，呼呼地长，为什么在罐上会被抑制呢？请大家指教，谢谢，罗罗嗦嗦写了那么多，不知道有没有表达清楚。
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