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血浆线粒体偶联因子-6在不同类型的心绞痛患者冠脉循环血浆中的变化
作者：马　健，庞继恩&&&&作者单位：青岛解放军第401医院，山东 青岛　266071　
目的：研究冠心病(CHD)患者稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛、以及急性心肌梗死患者血浆线粒体偶联因子-6(CF-6)浓度在冠脉循环中的变化。方法：用放免方法分别测定不同类型心绞痛的冠心病患者与对照组外周、冠状静脉窦与主动脉根部血浆中CF-6浓度，利用冠状静脉窦-主动脉根部差值求出经冠脉循环后心脏局部分泌并释放的CF-6浓度。结果：不同类型心绞痛患者外周血浆中CF-6浓度与对照比差异非常显著(P<0.01)，冠心病组冠状静脉窦CF-6浓度较主动脉根部及外周循环比有统计学意义(P<0.01); 冠心病组心脏局部CF-6浓度比对照组高，差异显著(P<0.01)。结论：冠心病患者血浆CF-6浓度明显增高，经冠脉循环后心脏局部有CF-6的产生。提示CF-6参与了冠心病的病理生理过程，在冠心病的病程发展过程中有可能是一种较为重要的血管活性物质。
【关键词】& 冠心病;线粒体偶联因子-6;冠脉循环;心绞痛
　　Abstract：Objective：To investigate the levels of mitochondril coupling factor 6(CF-6)in patients with coronary heart disease and the changes after coronary circulation in patients with coronary heart disease.Methods：The 64 patients with coronary heart disease were studied.The 16 patients with AMI， 20 patients with UA， 18 patients with SA and 20 patients excluding coronary heart disease (control) were studied.Blood samples were collected during percutaneous coronary intervention (PCI)from peripheral circulation、aortic root (Ao) and coronary sinus (CS)， and the concentrations of CF-6 were measured respectively.The sino-arterial (CS-Ao) difference was measured as cardiac CF-6.Results：The concentration of CF-6 in patients with CHD increase significantly in peripheral circulation and coronary sinus， and the concentration of CF-6 in coronary sinus were higher than peripheral circulation and aorta (P<0.01)， There was remarkable statistic difference among UA、AMI and SA、control groups (P<0.01)， and so between AMI and UA group (P<0.01) in peripheral circulation and coronary sinus.Conclusion：CF-6 may be involved in the process of pathophysiology in patients with coronary disease and may be one of the protective mechanisms to the stabilization of organism internal environment.
　　Key words：CoMitochondrial coupling factor-6 (CF-6); Coronary circulation
　　线粒体偶联因子-6(mitochondrial coupling factor6， CF6)， 为近年发现的一种由76个氨基酸组成的缩血管活性肽，是体内唯一的内源性血管舒张因子---前列环素(prostacyclin， PGI2)的合成抑制因子[1]。它在体内存在于心、肝、肾等多种组织器官，但以心肌含量最高，同时，也存在于血管内皮细胞膜上[2]。冠心病患者冠脉循环中是否存在CF-6浓度的变化，国内尚无报到。本研究通过术中直接冠状动脉窦取血的方法观察CF-6的变化，以探讨其在冠心病发病及病理生理改变中的意义。
　　1　资料与方法
　　1.1　一般资料
　　冠心病患者64例，其中男40例，女24例，年龄46～78岁(平均62岁)。分为四组：稳定型心绞痛(SA)组28 例，不稳定型心绞痛(UA)组20例， 急性心肌梗死(AMI)组16例，对照组20 例。 各组间年龄、性别、高血压、糖尿病、血脂、吸烟均无明显差别。分组标准：依据1979年WHO诊断标准，经选择性冠脉造影确诊为冠心病：(1)稳定型心绞痛组：均有典型的劳力诱发心绞痛，其性质在1～3个月内无改变，即每日和每周疼痛发作次数大致相同，诱发疼痛的劳累和情绪激动程度相同，每次发作疼痛的性质和疼痛部位无改变，疼痛时限相仿(3～5分钟)，无超过10～20分钟以上者，含化硝酸甘油后也基本在相同时间内发生疗效。疼痛发作时心电图可呈典型的缺血性ST段压低的改变;(2)不稳定型心绞痛组：包括初发型、恶化劳累性心绞痛、各型自发性心绞痛(卧位型心绞痛、变异型心绞痛、中间综合征、梗死后心绞痛)在内，发作持续时间1～30分钟，入院前1天内至少发作1次;发作时可伴有心电图至少相邻两个导联缺血型可逆性ST段抬高或压低>0.5mm，疼痛缓解后心电图恢复至发作前状态，且无新的Q波出现，心肌酶无明显变化;(3)急性心肌梗死组：典型胸痛持续时间>30分钟，心电图至少相邻两个导联ST段抬高lmm，且符合AMI心电图动态演变规律，血清心肌肌酸激酶同功酶(CKMB)高于2倍正常上限值或肌钙蛋白测定阳性。(4)正常对照组：20例为临床表现或心电图变化怀疑冠心病，为排除冠心病行冠状动脉造影，冠状动脉造影结果显示正常或狭窄低于50%，运动平板实验结果为阴性患者。
　　1.2　方法
　　1.2.1　手术方法：冠状动脉造影按常规方法进行。
　　1.2.2　样本采集在X线指导下，从右股静脉将7F右冠脉导管插至冠状静脉窦中部或深部。将冠状静脉窦血开始2毫升弃取，留取4毫升，同时经右股动脉插管至主动脉根部用同样方法留取主动脉根部血样4ml，在右心导管退出时，采集外周血4ml。
　　1.2.3　将血样用EDTA-Na2抗凝，抑肽酶抑制肽酶活性，混匀全血后40℃，3500rpm离心15分钟，分离血浆，取2ml加0.1%三氟乙酸(TFA)6ml振荡混匀离心，上清液过Sep-pakc18柱，先以0.1%TFA洗脱，再用75%甲醇3ml洗脱并搜集，洗脱液干燥后，-60℃保存，测定时用缓冲液复溶。
　　1.2.4　放射免疫测定： CF-6的放射免疫测定方法：按美国Pheonix phaxmacentical公司提供的放免试剂剂盒要求来进行测定。
　　1.3　统计学处理
　　实验数据用均数&标准差(x-&s)表示，两组数据间的差异分析用t检验，多组数据间用方差分析用q检验。
　　2　结　果
　　2.1　不同类型心绞痛患者冠脉循环及主动脉根部动脉血中CF-6的浓度较对照组明显增高，差异均有显著统计学意义(P<0.01)，且冠状静脉窦血浆CF-6水平明显高于主动脉根部动脉血(P<0.01)。表1　冠脉循环(心脏局部)产生CF-6水平的比较
　　2.2　冠心病不同类型心绞痛患者各组间CF-6浓度的变化
　　冠心病各组间比有较大差异(见表2)：AMI组外周和主动脉根部CF-6浓度比对照组、SA及UA组显著增高(P<0.01);UA组外周和主动脉根部CF-6浓度比SA组显著增高(P0.05);AMI组冠状窦CF-6浓度比对照组、SA及UA组增高尤为显著(P<0.01)，UA组冠状窦CF-6浓度与SA组比差别也有显著差异(P<0.01)，SA组冠状窦CF-6浓度与对照组比差异也有显著意义(P<0.01)。表2　冠心病各组及对照组CF-6浓度比较
　　3　讨　论
　　CF6是线粒体内H+-ATP 合酶的一个亚单位，是基本的能量转导物质，并参与ATP的合成。1998年日本学者Osanai等首次从自发性高血压大鼠(SHR)组织中提取纯化。2001年Osanai等实验证实：在体外培养的人脐静脉血管内皮细胞表面，发现CF6，并认为血管内皮细胞是循环CF6的重要来源。研究表明：心肌组织的H+-ATP合酶亚单位的mRNA水平最高，说明心肌细胞中CF6含量丰富。近年发现冠心病患者血浆CF6水平明显增加(1-5)。本文结果显示冠心病患者血浆中CF-6浓度有明显变化： UA组、AMI组外周血浆CF-6浓度明显高于对照组，AMI组外周血浆中CF-6浓度明显高于UA组，SA组外周血浆中CF-6浓度较对照组相比无显著差异，AMI组、UA组冠状窦血浆中CF-6浓度也明显高于对照组，AMI组冠状窦血浆中CF-6浓度也高于UA组，SA组冠状窦血浆中CF-6浓度较对照组相比差异有显著统计学意义，以上结果提示CF-6可能是能够反映心肌缺血的指标。本研究显示：1)SA组外周血与冠状窦血浆中CF-6浓度与对照组比较结果的不同可能与外周血液经过体循环后被稀释以及各器官对其的降解有关，可能提示冠状静脉窦中CF-6浓度较外周更能准确反映出是否存在心肌缺血。2)冠心病组(AMI组、UA组、SA组)患者冠状静脉窦血浆CF-6浓度较外周和主动脉根部血浆中CF-6浓度均明显升高，但外周与主动脉根部血浆中CF-6浓度之间无显著差异，对照组外周、主动脉根部及冠状静脉窦血浆CF-6浓度差异均无统计学意义，提示冠心病患者心血管组织分泌并释放一定量的CF-6到冠脉循环中，故冠状静脉窦血浆中的CF-6浓度包括了经冠脉循环后心脏局部产生的CF-6量，冠状静脉窦-主动脉根部只可以部分反映心脏局部产生的CF-6浓度[5-9]。我们认为，心脏局部产生入冠脉循环的CF6主要来源有两个：一为冠脉循环血管内皮细胞产生，二为心肌细胞产生。本实验结果显示冠心病组(AMI组、UA组、SA组)心脏局部产生的CF-6浓度均明显高于正常对照组，提示CF-6可能参与了冠心病的病理生理过程。
　　近年研究发现，内皮细胞功能失调是冠心病的始动因素，血管内皮细胞可释放多种血管活性物质，包括缩血管因子以及舒血管因子。AMI、UA为冠心病的两种类型，其发病机制为在上述病理改变基础上，形成不稳定的动脉粥样硬化斑块，发生血管痉挛或斑块破裂、出血及血栓形成，导致冠脉血流流速急剧变化，血管内皮细胞切应力改变，刺激血管内皮细胞产生并释放CF6入冠脉循环[2]，另外，AMI时血管内皮细胞损伤，可直接产生并释放CF6进入循环[9]。
　　国外以往研究表明：当心肌细胞损伤，发生坏死或凋亡时，心肌细胞的H+-ATP 合酶亚单位CF6的mRNA基因表达显著增高[9]。心肌细胞内的CF6主要聚集在线粒体内，AMI时，冠脉血管急性闭塞，部分心肌细胞坏死或凋亡，CF6从线粒体漏出进入冠脉循环。致使冠脉循环血清CF6含量升高，我们的研究证实了这一点。
　　因此，我们认为：CF6在冠心病的发病中具有一定的病理生理意义，在冠心病发病的启动阶段，CF6作为一种PGI2抑制因子，参与了AMI的发生、发展，这主要是由血管内皮细胞产生的CF6完成的;随着冠心病的进展，心肌细胞严重损伤、坏死后，细胞内的CF6漏出进入冠脉循环，这部分CF6代表了已经发生心肌细胞的严重损伤及坏死。
　　总之，本实验比较了冠心病组以及对照组间心脏局部产生的CF-6量，以及不同类型心绞痛组之间血浆CF-6浓度的变化，结果显示冠心病组冠脉循环CF6浓度升高，提示心脏局部有CF6的产生，此变化在一定程度上反映了心肌细胞损伤或坏死的程度，说明CF6在冠心病的病理生理改变中具有一定意义。但冠脉循环CF6的产生是以血管内皮细胞释放为主，还是以心肌细胞严重损伤后漏出为主，以及CF6与其他血管活性物质的关系尚不清楚，有待进一步研究。
【参考文献】
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解析质量好中差
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