在TCID50中细胞培养换液 英文用不用换液啊，还是...

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-22 06:11 标签： tcid50
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多细胞生物体内实现各个细胞间的功能协调依赖于A．细胞间的物质和能量交换　　　　# B. K2 ]0 A$ U B．细胞间的信息交流: U- D, W4 \. j1 F
e C．细胞间的物质交换5 [$ S, @+ N# b. a( V2 E/ @ D．A和B两项5 _: U* T8 T# R# L
解析试题分析：在多细胞生物体内，各个细胞之间必须保持功能的协调，这种协调性的实现不仅依赖于物质和能量的交换，也有赖于信息的交流。故D项正确。考点：本题考查细胞膜的功能相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。|/|/|/|/|/|
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【学术讨论】卵巢颗粒细胞不贴壁，急求帮助
师兄师姐们好，我养得老鼠卵巢颗粒细胞，老是不贴壁，文献说24小时贴壁时换液，我到了24小时一换液，细胞就快没有了怎么让卵巢颗粒细胞贴壁啊求助啊很急啊谁能帮帮我啊无助得人24小时是可以帖壁的。有可能你分下的细胞太少了，或者不全是细胞的成份，所以24小时帖不了壁。如果真的不行也不一定非要24小时换液，可以到36小时再试试。我在养人的颗粒细胞,属于非常难进行原代培养的贴壁细胞之一,摸索了一段时间, 我想,现在有几点成功的经验,失败的教训及一点点思考可以和你分享:1 首先是培养液的选择:最好选择进口原装的(价格较贵),自己滤的培养液细胞生长状态很差,也难帖壁.我开始 是 自己滤的 DMEM高糖低糖都用过,高糖效果 好一些,但也 不如 后来 买的原装的 GIBICO 的M199 培养基(ABOUT 276RMB/500ML). 记住要加 20%的 FBS(最好也用 进口的,国产的要相应多加一些), 同时,我也用人输卵管液(HTF)培养观察了一段时间,觉得效果也不如GIBICO 的M199 +20%FBS2 培养瓶 和培养板的选择:最好用塑料的培养瓶 和培养板, 因为玻璃的培养瓶和培养板对于难养的贴壁细胞来说就更不容易贴壁(本人已经尝试了), 而且细胞少时一定用培养板先养, 建议开始使用24孔板, 我用的是COSTER的板子(ABOUT 12RM,效果很好,价格又不贵. 同时尽量避免使用旧板,旧板贴壁性很查.3 换液时间的选择:关于贴壁时间,除了和上面的因素有关,和铺板的细胞数量也有很大关系. 细胞数量少,贴壁时间可能会延长, 同时细胞数量少,也不用很勤换液,因为细胞代谢较慢,培养基中的营养成分消耗少, 可以观察培养基的颜色,并在显微镜下观察细胞形态,待70-80%的细胞贴壁后,再换液也不迟. 换液可以选择半量换液后2/3换液,因为细胞已经适应了原来培养基的环境,且培养过程中细胞自身也能释放一些促进其生长的因子,全部换液后由于生长环境完全改变,细胞可能会表现很差, MAKE YOU
DISAPPOINTED!4 抗生素的思考:就是有关培养基中加用抗生素是否会影响较难培养的原代细胞贴壁的问题,我的实验中加用抗生素的培养基细胞贴壁较差,细胞状态也稍差一些,目前本人尚没用足够的证据证明这一点,只是经验而已. 5 胰酶的思考:我以前读过一篇文章提示,对于贴壁细胞,当每次细胞重新铺板时,若残留过多胰酶,胰酶会改变细胞的性状,最终可能使贴壁细胞变成悬浮细胞, 所以 我每次无论是取材还是重新铺板时,都很注意胰酶的问题,建议你回想以下你对细胞的处理过程.6 饲养细胞的思考:我养细胞时因为实验室有一个师姐正在做单抗杂交瘤, 她用了饲养细胞有利于自己培养的细胞的生长, 饲养细胞使培养的细胞有了一定的密度, 且能释放一些有利于细胞生长的因子, 我养人的颗粒细胞时,由于取材有限,每次得到的细胞数量少得可怜, 因此当时很有加点饲养细胞的冲动(虽然明明知道这样不可行, 因为师姐用的是鼠源的饲养细胞, 我养的是人源的颗粒细胞, 加到一起很快我的少得可怜的细胞就会被吞噬掉了 ), 现在想想你养老鼠的颗粒细胞,是不是可以考虑制备点饲养细胞, 加在一起养啊------谨供THINKING... ...总之,原代培养细胞需要具备很扎实的CELL CULTURE 理论基础,同时细心和耐心一样都不能少,而且需要你在整个过程中都不断的思考.希望我的几点经验和教训能对你的实验有所帮助,希望你以后的实验顺利.我做的是人颗粒细胞的培养。24小时可以贴壁。细胞分离的一步很重要，当时用的是自配的M199，未加抗生素，效果很好。我认为你的问题可能在这两个方面：1.细胞分离的不纯，得到的颗粒细胞很少。2.胰酶对细胞的损伤。颗粒细胞培养不是很难，我用的是进口的培养液，胎牛血清加的10%，常规加入青链霉素。建议：1.如果是养细胞的新手，可以用其他人养的细胞试一下，看能否帖壁，排除基本技术或其他方面的问题。2.如果已经很熟练的养过其他细胞。建议你用50%的percoll分离颗粒细胞后再培养，我们这边无论是分人的还是鼠的颗粒细胞都是这样做的。3.多收集一点细胞，先用六孔板或二十四孔板养，不要一下子用大的培养瓶。不要着急，找到原因后就不难了。你可以将Email或QQ留下，我将相关的文献发给你做参考。谢谢emplum 笑尔飞的回答还有denglian的回答非常感谢你们的经验我的email：QQ:如果有空帮我的话万分感激
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病毒感染力的滴定（TCID50的测定）
一、实验目的
了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法
半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测
半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测
半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞
蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测
1、长满单层的细胞1瓶
2、胰酶、吸球、吸管、生长液
3、96孔细胞培养板
4、加样器、枪头
5、病毒液（PRV）
四、TCID50的操作步骤
1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100ul。
3、在每孔加入细胞悬液100ul，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100ul生长液+100ul细胞悬液）
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