基因敲除原理小鼠模型建立哪个单位做得比较专业呢?

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GPS2基因敲除小鼠模型建立及表型分析
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全基因敲除是将目标基因用一段外源DNA序列(多数情况下是用于药物筛选的新霉素(Neomycin)抗性基因)来取代,从而达到使目的基因失活的目的。用于Conventional Knockout的基因打靶质粒构建相对简单。一般有一个阳性筛选基因(比如NeoR, Hygromycin Resistant Gene)和一个阴性筛选基因(如TK)。阳性筛选基因位于两个同源臂的中间,阴性筛选基因一般位于一个同源臂的外侧。阳性筛选基因类似于分子生物学实验中质粒上的氨苄等抗性基因。在转染小鼠胚胎干细胞之前,一般要对打靶载体进行线状化,然后利用电转仪通过电转的方式将打靶载体导入小鼠胚胎干细胞内。线状打靶载体会整合到染色体上。在(比如G418)存在的情况下,只有染色体上重组了打靶载体的胚胎干细胞才能成活并增殖。如果是同源重组,阴性筛选基因会丢失,导致不能表达。如果是随机插入,一般会保留同源臂外的阴性筛选基因。传统上阴性筛选基因一般是用来自于HSV的胸苷基因,这种会将Gancyclovir转变成一个核苷类似物,并在基因组复制的过程中整合到新合成的DNA链上,造成DNA复制停止。所以,Gancyclovir能够抑制打靶载体随机插入的胚胎干细胞增殖。由于Gancyclovir经常会影响得到嵌合体小鼠后的种系传递,所以现在打靶载体很少再用TK基因做为阴性筛选基因了。目前最常用的是DTA(Diphtheria Toxin Subinit A, 白喉毒素A亚基)。在随机插入的情况下,如果有DTA表达,DTA可以直接杀死细胞,不需要再通过加入Gancyclovirs的方式进行阴性筛选。
如果不知道一个基因被敲除后会不会致死,最好是做条件性基因敲除。条件性基因敲除通过跟 Cre Deletor 小鼠交配,可以获得全敲除小鼠。而如果直接制备全敲除小鼠,一旦是致死基因,可能就需要重新开始做条件性敲除,造成时间和资金上的双重损失。
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【求助】基因敲除小鼠
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这个帖子发布于4年零77天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问有做过基因敲除小鼠的么?你们找的哪些公司做的小鼠模型啊?推荐一下靠谱的公司及其联系方式,谢谢分享!
不知道邀请谁?试试他们
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最好查看文献看看那些人用的哪里的基因敲除小鼠,可以联系下那些文章作者,基因敲除后要做鉴定的,所以最好买权威的,不然给后续实验带来麻烦...
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还是那棵橄榄树 最好查看文献看看那些人用的哪里的基因敲除小鼠,可以联系下那些文章作者,基因敲除后要做鉴定的,所以最好买权威的,不然给后续实验带来麻烦...联系了一部分呢,没回应。您做过么?有没有推荐的
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偶做过,不过是国外一家实验室友情相赠的所以帮不上忙呢。。。投稿的时候杂志对基因敲除的鉴定还是要求的。
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您可以联系我们上海利堃贸易有限公司服务热线:400-021-9266或者拨打直线 021-我们刚拿下国内某权威动物中心的代理权,可满足您建立基因敲除小鼠模型的需求
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国内做的最早和最好的公司应该是赛业,口碑挺好的,你可以看看优酷上的介绍
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nicholaslhy 国内做的最早和最好的公司应该是赛业,口碑挺好的,你可以看看优酷上的介绍真的不敢认同,最早就绝对不是的啦,国内应该是南京与上海的模式生物研究中心,不过赛业的广告做得最好倒是真的
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fuyulin 我做过你好,请问您做的小鼠是从哪里买的呀?最近我的实验也需要用ApoE敲除的小鼠做动脉粥样硬化的模型,真的很是挠头啊,希望能帮助我下,谢谢谢谢啦!!
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联系南京大学模式动物研究所吧。
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