小鼠的最大心率的计算公式比较快,如何计算小鼠的射血分数呢?

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分子生物学服务
ACE2基因敲除小鼠
1.&ACE2(血管紧张素转换酶2,angiotensin&converting&enzyme&(peptidyl-dipeptidase&A)&2)基因&
血管紧张素转换酶(ACE)由805个氨基酸组成,其中包括一个N末端信号序列,一个单活性位点催化区和一个C末端疏水的膜锚定区,对肾素&血管紧张素系统(RAS)&有关键调控作用。ACE2在啮齿类动物和人类中主要分布在心脏、肾脏和睾丸。ACE2&能水解血管紧张素(Ang),产生Ang2(129),还能水解RAS&中的主要物质AngⅡ,产生具有血管扩张作用的Ang2(127)&。另外,ACE2&可能在RAS&中扮演与ACE&相反的角色,以达到血管收缩和舒张的平衡,并与高血压的发生关系密切。糖尿病肾病小鼠肾小管的ACE2&水平明显下降,提高ACE2&水平则可能预防糖尿病肾病的疾病进程。
&&&人类ACE2基因位于Xp22,由18个外显子和20个内含子组成。迄今已知该基因的单核苷酸多态性(single&oligonucleotide&polymorphism,SNP)位点有140个。ACE和ACE2的金属蛋白酶催化区有42%是一致的,而对二者基因结构的对比分析更发现ACE2基因所包含的18个外显子与ACE基因的头17个外显子的结构具有相当大的类似性。
2.&ACE2的表达及基本功能
(1)&ACE2是一种膜联羧肽酶,高度表达于心脏、肾脏、睾丸以及胃肠道,被认为是RAS系统的负向调节因子。最近对于ACE2的研究认为,ACE2主要作用是通过水解AngII产生扩血管作用的Ang-(1-7)而与ACE的作用抗衡&。另外,研究发现ACE2基因敲除鼠出现心室扩大和严重的心肌收缩功能不良&,说明ACE2在调节心血管功能方面也具有重要性。
(2)ACE2目前已知功能主要包括改善心肌收缩力、&缓解心肌梗塞和心力衰竭;调节血压、血流;改善肾功能,与糖尿病性肾病相关以及作为SARS冠状病毒的功能性受体等。它的发现为心血管疾病,糖尿病综合征以及SARS的研究和治疗提供了新型有效的治疗手段。ACE2作为刚刚发现的一种物质,其强大的生物学效应越来越多的得到证实,并且其作用还不仅局限于心血管系统,作为SARS&的功能性受体,ACE2将很有可能成为其治疗的新途径,为这一疾病的治疗带来了希望。由于ACE2不仅能阻止AngII的形成,同时还可以通过产生Ang-(1-7)作为血压调节的手段,因此成为高血压疾病的新型、强大的基因治疗靶点,必将在今后心血管疾病的研究及治疗中发挥重要的作用。
3.&ACE2&基因敲除(&ACE2&-/-)&小鼠的表型&&
ACE2&基因敲除(&ACE2-/-)&小鼠的功能受到损害,具有心室扩大和严重的心肌收缩功能不良症状。
&&&&&ACE2&基因敲除的Ang&Ⅱ水解明显减少,Ang&Ⅱ水平增高,但不足以引起血压升高。研究发现,6&月龄ACE2&基因敲除雄性小鼠收缩压与平均动脉压均下降,心肌收缩力减弱。6&月龄的雌性小鼠心肌收缩力减弱,但血压并未下降。二者AngⅡ水平均增高。可能有其他的多肽物质调节ACE2-/-小鼠的血压,从而拮抗Ang&Ⅱ水平增高引起的高血压。ACE2&缺失导致Ang&Ⅰ水平增高,后者则在中性肽链内切酶(NEP)&作用下转化成Ang2(127)。而Ang2(127)&可能会拮抗Ang&Ⅱ的血压增高作用,并加强缓激肽的扩血管作用。
&&&&&ACE2&基因敲除小鼠的心肌收缩力减弱,射血分数(&EF)&下降40%&,心室轻度增大,左心室壁轻度变薄,但未发现心肌间质纤维化和心肌细胞肥大。在ACE2&基因敲除小鼠中还发现大量冬眠心肌和抑顿心肌,提示ACE2&可能防止心肌缺血。另一研究也发现,ACE2&基因敲除小鼠的低血氧基因BNIP23(诱导细胞死亡的线粒体蛋白)&和纤溶酶原激活物抑制剂21&(PAI21)&上调,这表明ACE2&基因敲除小鼠有慢性心肌缺氧。
参考文献:
Crackower&MA&,&Sarao&R&,&Oudit&GY,&et&al&.&Angiotensin&converting&enzyme&2&is&an&essential&regulator&of&heart&function.&Nature&,&:822-&828.
Qudit&GY,&Crackower&MA&,Backx&PH&,et&al&.&The&role&of&ACE2&in&cardiovascular&physiology.&Trends&Cardiovasc&Med&,&2101
&&&&&ACE2(血管紧张素转换酶2,angiotensin&-&converting&enzyme2)是一种与ACE相似的酶,在肺、心脏、肾脏和胃肠等组织器官的血管内皮细胞中表达,是肾素-血管紧张素系统(rennin-&agiotensin&system,&RAS)&的重要组成部分,通过调节血管紧张素I&和血管紧张素II&的转换来调节血压,在生理状态及高血压、慢性心力衰竭、糖尿病等病理生理过程中与&ACE互相拮抗,其作用主要是通过ACE2的催化产物Ang(1-7)实现的。ACE2不仅代谢AngI、AngII,还代谢其他肽类系统,是心血管功能的重要调节器。同时,ACE2又是SARS-CoV的功能性受体。ACE2基因小鼠没有明显的血压改变,但左心室壁轻度变薄,心肌收缩力严重下降,没有心肌间质纤维化和心肌细胞肥大,提示ACE2可能介导心肌缺血。可用于心脏血压调控的研究,也可作为SARS动物模型。
ApoE基因敲除小鼠
&品系描述:
&&&&&ApoE基因敲除小鼠是除LDL以外的所有脂蛋白的结构组成,在维持血脂代谢的平衡中起关键作用。ApoE功能缺失会导致胆固醇清除途径受限,胆固醇残粒在血浆中沉积。ApoE基因敲除严重高胆固醇血症小鼠是首个自发性动脉硬化基因工程小鼠模型,是目前在AS研究领域中应用最多的基因工程动物。ApoE基因敲除小鼠的血浆胆固醇浓度升高5倍,甘油三酯升高68%。血浆LDL和VLDL水平显著高于正常对照组,HDL水平则低于正常小鼠。3月龄ApoE基因敲除小鼠可在临近大动脉附近发现脂肪纹,它们会对机体造成损害,并且这种损害随年龄增长及脂质减少而增加,8月龄时可见严重的冠状动脉堵塞,&17月龄以上ApoE基因敲除小鼠脑部可见晶状胆固醇裂隙和脂质滴,泡沫细胞中有黄瘤的损害,小的黄瘤在脉络丛和腹侧穹中也能看到。病变形态、位置及发展过程均与人类相似,另外在行为上,ApoE基因敲除小鼠对应激反应减弱、学习与记忆功能改变,可用于研究apoE缺失在乙酰胆碱神经损害所致认知障碍过程中发挥的作用。
应用领域:
(1)&糖尿病和肥胖研究:非糖尿病型肥胖(饮食诱导的);
(2)&神经生物学研究:阿耳茨海默氏病,行为和听力缺陷,神经变性;
(3)&心血管研究:动脉粥样硬化,血胆固醇过高;
(4)&鼠/人的同源基因:阿耳茨海默氏病,高脂蛋白血症。
ApoE转基因小鼠
&&&&ApoE基因有三个等位基因,即E2、E3和E4,共构成六种不同的基因型:3种纯合型(E2/E2、E3/E3、E4/E4)和三种杂合型(E2/E3、E2/E4、E3/FA)。各种基因分型与心血管疾病、脑中风以及阿尔茨海默症的发生有一定程度的关系,其中又以E3/E4、E4/E4这两种基因分型最具罹患这类疾病的风险。利用CMV启动子系统表达ApoE2、ApoE3和ApoE4基因的转基因小鼠是研究ApoE基因与冠心病、高脂血症、脑栓塞等疾病相关性和发病机制的重要模型。
&APP/PS1(PAP)双转基因痴呆症小鼠
&品系描述:
双转基因的小鼠可表达突变的人类早老素(DeltaE9)和人鼠淀粉样前蛋白(APPswe)融合体,这两个基因的表达都由小鼠朊病毒蛋白启动子启动。人类早老素基因的DeltaE9突变是该基因的第九个外显子缺失产生的,此突变会导致早发性老年痴呆症。对小鼠脑蛋白匀浆进行免疫检测发现,人类早老素蛋白高水平地替代了可检测到的小鼠内源性蛋白,并且,在脑匀浆中还检测到了人源淀粉样前蛋白。据研究者报道,6-7月龄的小鼠脑内会形成beta淀粉状蛋白沉淀。
&&&&1)&老年痴呆症的人/鼠基因同系物研究
&&&&2)&老年痴呆症和神经退行性变化的神经生物学研究
&&&&基因敲出小鼠是利用基因打靶技术产生转基因动物的程序,基因敲出小鼠程序一般为:(1)构建基因打靶载体;&(2)将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源的胚胎干细胞中,使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组,将打靶载体中的DNA序列整合到内源基因组中从而得以表达;&(3)筛选发生同源重组的阳性克隆,基因敲出小鼠构建通过或者胚胎凝集的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体内制作嵌合体小鼠,在生物活体中研究特定基因的功能。基因敲除小鼠使得研究者们能够观察到某一特定基因完全失活后小鼠表型的改变,从而推断出特定基因的作用。基因敲出小鼠基因打靶的原则是,&外源DNA&片段含有与目的基因的某一段核酸序列相同或接近的同源序列,&同源重组就发生在这两个序列之间。外源DNA&序列的定位整合有两种方式,&即插入型(又称O&型)&和置换型(又称8&型)。与此相对应,&基因敲出小鼠打靶载体可分为两类:&插入型载体和置换型载体。
基因敲除小鼠第一步,胚泡时期发育胚胎的分离。此胚胎来源于灰色品系的小鼠。
基因敲除小鼠第二步,从灰色小鼠胚泡中分离胚胎干细胞,在体外进行培养。
基因敲除小鼠第三步,用同源重组载体转染胚胎干细胞,用含有新霉素和更昔韦洛的培养基筛选发生了同源重组的细胞。
基因敲除小鼠第四步,将筛选得到的胚胎干细胞植入白色小鼠的早期胚胎(胚泡时期)中。
基因敲除小鼠第五步,将上述胚胎植入假孕母鼠(白色)子宫中。
基因敲除小鼠第六步,在母鼠所产的小鼠中,有一些是正常的白色,另一些则是嵌合体灰白相间的小鼠。这些嵌合体小鼠的细胞一部分起源于白色皮毛的胚泡细胞,另一部分则起源于重组的胚胎干细胞。起源于重组胚胎干细胞的皮毛显示出灰色斑块,很好辨认。
基因敲出小鼠第七步,嵌合体小鼠与野生型白色小鼠进行杂交,如果嵌合体小鼠的生殖细胞恰好是起源于重组胚胎干细胞,那么其子代小鼠就都应该呈现灰色。而这些灰色小鼠的所有细胞都是杂合体。
基因敲除小鼠第八步,杂合体灰色小鼠(+/H)之间进行杂交,得到灰色和白色的子代。从灰色子代中筛选出纯合小鼠(H/H),其一对同源染色体上的等位基因都失活,此纯合小鼠即为&&基因敲除小鼠&。
我们有开发的基因敲除小鼠APOE(动脉硬化研究),
PEPT(白内障研究)
Shh+/-&基因敲除小鼠等小鼠:&Shh(Sonic&hedgehog)基因在脊椎动物胚胎组织形成中起着重要的作用,包括大脑、脊椎、中轴骨骼和四肢的形成。基因敲除小鼠基因缺失的胚胎早期可以观察到中间结构如脊索和地板的形成和维持的影响,晚期可以观察到远肢结构的缺失以及独眼,腹部细胞包括神经管的缺失、脊柱和许多肋骨的缺失。Shh蛋白被证实是脊椎动物发育过程中组织形成所必须的胞外信号。
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本站在线QQ客服【求助】小鼠取血
请问小鼠取血该怎么取最好?最多能取多少血啊?摘眼球取血,大约能取1ml左右眼底插管取血不太适合小鼠,摘眼球取一般在1ml左右,如果残忍点可以双眼球都摘取,好的时候可以到2mlpipixiong1982 wrote:眼底插管取血不太适合小鼠,摘眼球取一般在1ml左右,如果残忍点可以双眼球都摘取,好的时候可以到2ml我最受不了的就是这种实验,决定了我离开。其实瑞典的实验室,他们都是先给动物麻醉再处理,中国实验技术人员(所谓的国外硕士博士)去之后直接颈椎处死,他们睁大眼睛说:怎么可以这样残忍?太恐怖了吧!我反正受不了,唉。眼眶取血比较适用,断尾血比较少楼上的朋友,人类是最残忍的动物,无论哪个行业都残忍,只是表现形式而已,呵呵小鼠眼球框静脉插管取血,用毛细点样管,直径0.5mm,至少能取一毫升,肯定有效,而且取血不易受到污染恩,断头和挖眼太容易溶血了,还是毛细管好摘眼球吧,注意取血时不要污染到血液,不然会溶血,本人取过好多次了,小心点动作快的话成功率很大。断头取血,一般20克左右的小鼠可以取到1.0-1.5ml血,要点是伤口不要太大、往深了剪而不要往打了剪。残忍也是没有办法。。。。亲手做过,简直受不了摘雪球,毛细管都作过,实在太恶心了,有时候对于自己的良心是一种考验,我最终承认自己的失败,这种事情我做不来,所以研究生课题阶段,我对课题始终有抵触情绪,毕业找工作也一直不想搞动物实验的。有同感国内的试验条件都是这样采血的。如果你觉得残忍,当初怎么会选药理这个专业??chenjie1981 wrote:国内的试验条件都是这样采血的。如果你觉得残忍,当初怎么会选药理这个专业??国内的生活状况都是这样进行的。如果你觉得残忍,当初怎么会选结婚这个坟墓??3ml用7号针头取血比较好,可取到0.3ml,比较人道的方法摘眼球取血,是大家常用的方法,简单、易操作,取血量大,当然缺点就是过于残忍
还有就是心脏采,用1毫升的针管,也能采到将近1毫升,当然需要练练
第三,可以麻醉了以后(用乙醚就可以),腹主动脉取,也用1毫升的针管子,采血量也很大。看了才明白,原来采血也有那么多的讲究眼球采血 ,真是好残忍啊!我看同学做过,自己实在是不敢.....为了做试验,我们有的选择吗?做吧,老兄!!采眶血的方法专业书籍记载有2种,即眼眶后静脉丛采血法和摘眼球法,最终目的都是为了能够获得高效、适速、足量和无污染的采样方法。1 方法1.1 传统方法 目前临床最常用的是摘眼球法,此方法是用左手抓取动物颈部皮肤,取侧卧位将其轻压在实验台上,左手拇、食指尽量将动物眼部皮肤向颈后压,使动物眼部充血突出,以弯头镊夹去眼球,并将鼠倒置,头向下,使血液流出。此方法取血量少,取血速度无法控制,血液易浸入眼部周围毛发造成污染。1.2 改进方法 我们在摘除小鼠眼球过程中,对传统的摘眼球法进行了改进,收到了很好的效果。即左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤,小指固定尾部,如摘取外侧眼球,中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位,无名指按在腹部。通过观察可见,向右侧捻动拇指,压左侧眼部皮肤,会使左侧眼球充血突出;如摘取右侧眼球,向左侧捻动食指可使右侧眼球充血突出。此时术侧眼部向下,用弯头镊夹取眼球,根据需要捻动拇指与食指的方向,使血液从眼眶内以不同速度垂直流出,必要时还可用左手中指轻按小鼠心脏部位,以加快心脏泵血速度。用此方法摘除眼球,不但操作简单,取样量足,取样速度可控,样品纯净,而且成功率可达99%以上。2 讨论应用传统摘眼球法,20g左右小鼠采血量只是在0.8~1ml之间,而采用改进方法,取血量能达1.2~1.6ml以上,这可为实验需要提供充足的血液样品。左手拇、食指和中指力度的控制,可以使眶动脉、眶静脉受到不同的压力,这可通过眼球充血量的大小观察到,使血液流出速度可控,而血液又不易过快凝固。术侧眼部向下使血液从眶内垂直流出,避免了血液向周围毛发的浸润,保证了血液样品的纯净,使得实验结果更加准确。左手中指给小鼠心脏适度的压力,会增加血液的流出,为实验提供充足的血液样品。另外,在按压心脏时,用力一定要适度,若用力过度,一是会造成动物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血现象发生,影响实验结果,这些均应该引起注意。谢谢***henlx的宝贵经验!!pooq wrote:我最受不了的就是这种实验,决定了我离开。其实瑞典的实验室,他们都是先给动物麻醉再处理,中国实验技术人员(所谓的国外硕士博士)去之后直接颈椎处死,他们睁大眼睛说:怎么可以这样残忍?太恐怖了吧!我反正受不了,唉。断颈处死个人认为和断头,过量麻醉一样,属安乐死,只不过尸首异处,让人觉得残忍而已。实验做多了,确实觉得自己有些残忍了,摘眼球取血真的很不“人道”,虽然我也是这么做的。若要减少动物痛苦,我建议用乙醚麻醉后在摘眼球取血。我们刚开始的时候是这么干的,后来嫌麻烦,不麻醉了。showshow_lee wrote:断颈处死个人认为和断头,过量麻醉一样,属安乐死,只不过尸首异处,让人觉得残忍而已。记得还在学校的时候,导师带我去听一个学生的答辩。其中有个指标,是把大鼠头砍下,落入滚烫的沸水中,具体什么指标不清楚了,反正查查,绝对有这个方法学,好像那是个生理学的硕士导师作为评委,一脸诧异和难过,一连说这个实验太残忍了……我本来看了很多书是用摘眼球和去头取血,但是手续比较繁琐,并且容易污染,况且也比较残忍,我后来采用的是心脏采血的方法,关键点就是取血的进针不能太深,太深扎在心肌里面,要看到小鼠心尖拨动最明显得位置进针,边进针边回抽,有回血了不要再进针了,可以麻醉后进行,防止小鼠的躁动.并且由于小鼠的血小板相对较多.要注意抗凝,我实验室隔壁正好是做血流变的科室,我用他们的稀释肝素润滑1ml的一次性注射器抗凝,一般小鼠都能取到大概1ml左右的血,但是能够分离到的血清和血浆就相对较少了(200~350ul),毕竟小鼠的红细胞的含量相对也较高.以上意见仅供参考.如果是麻醉后取血,也可以下腔静脉之间取血我试过摘眼球取血,场面残忍,而且有时取血也不多,后来试过像大鼠一样,麻醉后,下腔静脉取血,能取1ml左右,比较稳定,而且自己能接受。实验动物采血 采血方法的选择,决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定,血液涂片以及酶活性微量分析法等,可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时,若需反复多次,应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉。例如,研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱,需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、CI-离子浓度,必须采取动脉血液。 采血时要注意:⑴采血场所有充足的光线;室温夏季最好保持在25-28℃,冬季,15-20℃为宜;⑵采血用具有采用部位一般需要进行消毒;⑶采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥;⑷若需抗凝全血,在注射器或试管内需预先加入抗凝剂. 1.取少量血 a.尾静脉   大鼠、小鼠 b.耳静脉   兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊 c.眼底静脉丛  兔、大鼠、小鼠 d.舌下静脉   兔 e.腹壁静脉   青蛙、蟾蜍 f.冠、脚蹼皮下静脉  鸡、鸭、鹅 2.取中量血 a.后肢外侧皮下小隐静脉   狗、猴、猫  b.前肢内侧皮下头静脉     狗、猴、猫 c.耳中央动脉     兔 d.颈静脉    狗、猫、兔 e.心脏    豚鼠、大鼠、小鼠 f.断头    大鼠、小鼠 g.翼下静脉   鸡、鸭、鸽、鹅 h.颈动脉    鸡、鸭、鸽、鹅 3.取大量血 a.股动脉、颈动脉   狗、猴、猫、兔 b.心脏        狗、猴、猫、兔   c.颈静脉    马、牛、山羊、绵羊 d.摘眼球    大鼠、小鼠 采动物品种  最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml) 小 鼠         0.2        0.3 大 鼠          1         2 豚 鼠          5        10 兔           10         40 狼 狗          100        500 猎 狗          50         200 猴           15         601.割(剪)尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒,然后浸在45℃左右的温水中数分钟,使尾部血管充盈。再将尾擦干,用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm,让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取,采血结束,伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口,割破尾动脉或静脉,收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.3~0.5ml。 2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查),可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭,再用酒精消毒和擦拭,使鼠尾充血。用7号或8号注射针头,刺入鼠尾静脉,拔出针头时即有血滴出,一次可采集10~50mm3。如果长期反复取血,应先靠近鼠尾末端穿刺,以后再逐渐向近心端穿刺。 3.眼眶静脉丛采血 采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套),应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧,使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3~4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm),使采血器与鼠面成45℃的夹角,由眼内角刺入,针头斜面先向眼球,刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度,小鼠约2~3mm,大鼠约4~5mm。当感到有阻力时即停止推进,同时,将针退出约0.1-0.5mm,边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中,当得到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时,将采血器拔出,以防止术后穿刺孔出血。 若技术熟练,用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml;体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml,可适用于某些生物化学项目的检验。 4.断头取血 采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤,并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈,约1/2-4/5的颈部前剪断,让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8~1.2大鼠约5-10ml。 5.心脏采血 鼠类的心脏较小,且心率较快,心脏采血比较困难,故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血,先将动物作深麻醉,打开胸腔,暴露心脏,用针头刺入右心室,吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml;大鼠约0.8-1.2ml。 6.颈动静脉采血 先将动物仰位固定,切开颈部皮肤,分离皮下结缔组织,使颈静脉充分暴露,可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉,离心端结扎,向心端剪口将血滴入试管内。 7.腹主动脉采血 最好先将动物麻醉,仰卧固定在手术架上,从腹正中线皮肤切开腹腔,使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液,防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织,夹住动脉近心端,用尖头手术剪刀,剪断动脉,使血液喷入盛器。 8.股动(静)脉采血 先由助手握住动物,采血者左手拉直动物下肢,使静脉充盈。或者以搏动为指标,右手用注射器刺入血管。体重15-20g 小鼠采血约0.2-0.8ml,大鼠约0.4-0.6ml。1。最大安全采血量:小鼠循环血量占体重的6%,或50-70mi/kg采血占全血量的10%不会对机体造成严重的不良影响。3-4周后可以重新采集一次。特别注意的是:老年小鼠血量降低。疾病会加重不良反应,所以必须考虑这些影响因素。采血后应补充响应体积的液体如果需要很短时间反复采血,比如每天一次,每次的采血量不应超过全血的1%。30g*6%=血量1.8mls1.8mls*10%=0.18mls(最大安全采血量)2。隐静脉采血法隐静脉采血法是小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是不用麻醉3。颈静脉采血法隐静脉采血法也是小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是需要麻醉4。心脏穿刺采血法。麻醉动物将动物仰放局部酒精消毒用塑料注射器,从动物的左侧胸部,肋沿下,心尖部向右侧15-30度角刺入心脏,给小负压,小心操作1.剪尾采血左手拇指和食指从背部抓住小鼠颈部皮肤,将小鼠头朝下,小鼠保定后将其尾巴置于50°热水中浸泡数分钟,使尾部血管充盈。擦干尾部,再用剪刀或刀片剪去尾尖1-2mm,用试管接流出的血液,同时自尾根部向尾尖按摩。取血后用棉球压迫止血并用6%液体火棉胶涂在伤口处止血。每次采血量0.1mL。2.摘除眼球采血左手抓住小鼠颈部皮肤,轻压在实验台上,取侧卧位,左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压,使眼球突出。用眼科弯镊迅速夹去眼球,将鼠倒立,用器皿接住流出的血液。采血完毕立即用纱布压迫止血。每次采血量0.6-0.1mL。3.心脏采血小鼠仰卧位固定,剪去胸前区被毛,皮肤消毒后,用左手食指在左侧第3-4肋间触摸到心搏处,右手持带有4-5号针头的注射器,选择心搏最强处穿刺,当刺中心脏时,血液会自动进入注射器。每次采血量0.5-0.6mL。4.断头采血右手用剪刀剪断小鼠颈部约1/2-4/5,让血液流入试管。此法可采血0.8-1.2mL。――摘自《中医实验动物学》
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