解决时间: 11:52
(共有<span
style="color:#FF位秀友关注过此问题)
IPTG的诱导原理是什么啊?
回答者： [] [] []
一级 一星助者
最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵 子，由 启动子Plac + 操纵基因lacO + 结 构基因组成。其转录受CAP正调控和lacI负
调控。lacUV5突变能够在没有CAP的存在下 更有效地起始转录，该启动子在转录水平 上只受lacI的调控，因而随后得到了更广
泛采用。lacI产物是一种阻遏蛋白，能结 合在操纵基因lacO 上从而阻遏转录起始.
&&&& 乳糖的类似物IPTG可以和lacI产物结合，
使其构象改变离开lacO，从而激活转录.
&&&& 这种可诱导的转录调控成为了大肠杆菌表 达系统载体构建的常用元件。tac启动子是
trp启动子和lacUV5的拼接杂合启动子，且 转录水平更高，比lacUV5更优越。trc启动 子是trp启动子和lac启动子的拼合启动子
，同样具有比trp更高的转录效率和受lacI 阻遏蛋白调控的强启动子特性。在常规的 大肠杆菌中，lacI阻遏蛋白表达量不高，
仅能满足细胞自身的lac操纵子，无法应付 多拷贝的质粒的需求，导致非诱导条件下 较高的本底表达，为了让表达系统严谨调 控产物表达，能过量表达lacI阻遏蛋白的
lacIq 突变菌株常被选为Lac/Tac/trc表达 系统的表达菌株。现在的Lac/Tac/trc载体 上通常还带有lacIq 基因，以表达更多
lacI阻遏蛋白实现严谨的诱导调控。IPTG 广泛用于诱导表达系统，但是IPTG有一定 毒性，有人认为在制备医疗目的的重组蛋
白并不合适，因而也有用乳糖代替IPTG作 为诱导物的研究。另外一种研究方向是用 lacI的温度敏感突变体，30度下抑制转录
，42度开发。热诱导不用添加外来的诱导 物，成本低，但是由于发酵过程中加热升 温比较慢而影响诱导效果，而且热诱导本 身会导致大肠杆菌的热休克蛋白激活，一
些蛋白酶会影响产物稳定.
&&&& 以&噬菌体再起转录启动子PL、PR 构 建的载体也为大家所熟悉。这两个强启动 子受控于&噬菌体cI基因产物。cI基因的
温度敏感突变体cI857(ts)常常被用于调控 PL、PR 启动子的转录。同样也是30度下 阻遏启动子转录，42度下解除抑制开发转 录。同样的，PL、PR
表达载体需要携带 cI857(ts)菌株作为表达载体，现在更常见 的做法是在载体上携带cI857(ts)基因，所 以可以有更大的宿主选择范围。另外一种
思路是通过严谨调控cI产物来间接调控PL 、PR 启动子的转录。比如Invitrogen的 PL 表达系统，就是将受trp启动子严谨调
控的cI基因溶源化到宿主菌染色体上，通 过加入酪氨酸诱导抑制trp启动子，抑制cI 基因的表达，从而解除强大的PL 启动子的 抑制.
T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的 主流，这个功能强大兼专一性高的启动子 经过巧妙的设计而成为原核表达的首选， 尤其以Novagen公司的pET系统为杰出代表
。强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA 聚合酶，而高活性的T7 RNA 聚合酶合成 mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍&
&当二者同时存在时，宿主本身基因的转 录竞争不过T7表达系统，几乎所有的细胞 资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅 几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋
白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶，需要将外源的T7 RNA 聚合酶 引入宿主菌，因而T7 RNA 聚合酶的调控模
式就决定了T7系统的调控模式&&非诱导 条件下，可以使目的基因完全处于沉默状 态而不转录，从而避免目的基因毒性对宿 主细胞以及质粒稳定性的影响；通过控制
诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量，就可以 控制产物表达量，某些情况下可以提高产 物的可溶性部分。有何高招？且看生物通 为你一一道来：
有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶 的合成，从而调控T7表达系统.
&&&&1.噬菌体DE3是lambda噬菌体的衍生株，含
有lacI抑制基因和位于lacUV5启动子下的 T7 RNA 聚合酶基因。DE3溶源化的菌株如 BL21(DE3)就是最常用的表达菌株，构建好
的表达载体可以直接转入表达菌株中，诱 导调控方式和lac一样都是IPTG诱导.
&&&& 2.另一种策略是用不含T7 RNA聚合酶的宿
主菌克隆目的基因，即可完全避免因目的 蛋白对宿主细胞的潜在毒性而造成的质粒 不稳定。然后用&CE6噬菌体侵染宿主细胞
&&CE6是lambda噬菌体含温度敏感突变 (cI857ts)和pL/pR启动子控制T7 RNA 聚合 酶的衍生株，在热诱导条件下可以激活T7 RNA
聚合酶的合成.
&&&& 此了噬菌体之外，还可以通过共转化 质粒提供T7 RNA 聚合酶。比如有人用受溶 氧浓度控制的启动子调控T7 RNA 聚合酶合
成，据说这比较适合工业化发酵的条件控 制.
&&&& 由于T7 RNA 聚合酶的调控方式仍有可 能有痕量的本底表达，控制基础表达的手
段之一是培养基外加葡萄糖，有助于控制 本底表达水平。2.是采用带有T7lac 启动 子的载体&&在紧邻T7 启动子的下游有一 段lacI操纵子序列编码表达lac
阻遏蛋白 (lacI)，lac 阻遏蛋白可以作用于宿主染 色体上T7 RNA 聚合酶前的lacUV5 启动子 并抑制其表达，也作用于载体T7 lac 启动
子，以阻断任何T7 RNA聚合酶导致的目的 基因转录。pLacI工转化也是同样的原理.
&&&& 如果这还不够，更为严谨调控手段还
有&&在宿主菌中表达另一个可以结合并 抑制T7 RNA 聚合酶的基因&&T7融菌酶， 降低本底。常用的带溶菌酶质粒有pLysS和
pLysE，相容的ori都不会影响后继的表达 质粒转化，前者表达的溶菌酶的水平要比 后者低得多，对细胞生长影响小，而pLysE
会明显降低宿主菌的生长水平，容易出现 过度调节，增加蛋白表达的滞后时间，从 而降低表达水平.
&&&& 通过几种不同方法来巧妙调控T7聚合
酶合成，T7启动子发展出了史上功能最强 大，最丰富的表达系统。生物通在下面首 先进行主流表达系统介绍：了解各种产品 的特色，是选择合适的表达系统的关键哦 。
另外可参考下如下精品课程网站的相关内容：
欢迎对最佳答案进行评论或补充，发表您的不同见解！
其他回答 (2)
如图所示。
可以上网下一个pET工作手册，这上面详细介绍了这一机制。
回答者： 一级 一星助者
回答字数在10000字以内
找到"IPTG的诱导原理是什么啊?"相关问题约122篇，用时0.093751秒
生物秀旗下专业的学术问答社区，为生命科学和医药领域的专业人员提供互帮互助的交流平台。秉承“人人为我，我为人人”的互助理念，让给予成为一种生活方式！
联系我们[Contact Us]：E-mail：
电话：021-
关于我们 [About Us]
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT(Biology Technology)的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和相关企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
生物秀旗下 [Website]星级专家为您解答难题！
800-820-5114
您尚未登录，请先
遇到问题怎么办？赶快来提问！研发平台专家为您解答！
问题解决中
问题提出时间： 15:25:21
什么是CMV启动子？什么是T7启动子？有什么区别？
在网上搜索不到完整的概念，特别想知道，谢谢大家！
行业分类：生物、医药
回答时间： 11:01:58
质粒设计时都需要加入启动子序列，以保证目的基因的表达。启动子可分为诱导型启动子和组成型启动子两大类，后者包括CMV，SV40，T7, pMC1，PGK启动子等。对CMV和T7的来源做了介绍。
共0条评论&
回答时间： 06:34:26
启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。启动子（Promoters）就像“开关”，决定基因的活动。既然基因是成序列的核苷酸（nucleotides），那么启动子也应由DNA组成。启动子本身并不控制基因活动，而是通过与称为转录（transcription）因子的这种蛋白质（proteins）结合而控制基因活动的。转录因子就像一面“旗子”，指挥着酶（enzymes）(RNA聚合酶polymerases) 的活动。这种酶制造着基因的RNA复制本。基因的启动子部分发生改变（突变），则导致基因表达的调节障碍。
T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流，这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选，尤其以Novagen公司的pET系统为杰出代表。强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA聚合酶，而高活性的T7 RNA 聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍——当二者同时存在时，宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶，需要将外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌，因而T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式——非诱导条件下，可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录，从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响；通过控制诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量，就可以控制产物表达量，某些情况下可以提高产物的可溶性部分。有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶的合成，从而调控T7表达系统。1.噬菌体DE3是lambda噬菌体的衍生株，含有lacI抑制基因和位于lacUV5启动子下的T7 RNA 聚合酶基因。DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)就是最常用的表达菌株，构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中，诱导调控方式和lac一样都是IPTG诱导。2.另一种策略是用不含T7 RNA聚合酶的宿主菌克隆目的基因，即可完全避免因目的蛋白对宿主细胞的潜在毒性而造成的质粒不稳定。然后用λCE6噬菌体侵染宿主细胞——CE6是lambda噬菌体含温度敏感突变(cI857ts)和pL/pR启动子控制T7 RNA 聚合酶表达的衍生株，在热诱导条件下可以激活T7 RNA 聚合酶的合成。此了噬菌体之外，还可以通过共转化质粒提供T7 RNA 聚合酶。比如有人用受溶氧浓度控制的启动子调控T7 RNA 聚合酶合成，据说这比较适合工业化发酵的条件控制。由于T7 RNA 聚合酶的调控方式仍有可能有痕量的本底表达，控制基础表达的手段之一是培养基外加葡萄糖，有助于控制本底表达水平；之二是采用带有T7 lac 启动子的载体——在紧邻T7 启动子的下游有一段lacI操纵子序列编码表达lac 阻遏蛋白(lacI)，lac 阻遏蛋白可以作用于宿主染色体上T7 RNA 聚合酶前的lacUV5 启动子并抑制其表达，也作用于载体T7 lac 启动子，以阻断任何T7 RNA聚合酶导致的目的基因转录。pLacI转化也是同样的原理。如果这还不够，更为严谨调控手段还有——在宿主菌中表达另一个可以结合并抑制T7 RNA 聚合酶的基因——T7溶菌酶基因，降低本底。常用的带溶菌酶质粒有pLysS和pLysE，相容的ori都不会影响后继的表达质粒转化，前者表达的溶菌酶的水平要比后者低得多，对细胞生长影响小，而pLysE会明显降低宿主菌的生长水平，容易出现过度调节，增加蛋白表达的滞后时间，从而降低表达水平。通过几种不同方法来巧妙调控T7聚合酶合成，T7启动子发展出了史上功能最强大，最丰富的表达系统。
CMV：CMV基因组有229kb，属疱疹病毒亚β科。CMV DNA只有一个单向性的IE启动子复合体，可指导多个基因的表达[1]。在IE94基因上游存在一个强启动子，IE94的上游区比SV40病毒的72bp重复序列具有更高的增强子功能。IE94基因启动子区序列分析证明这一区段内有多个回文结构，并相间着保守的序列。在这一区段的-50～-580bp之间至少有4套13～18bp的重复序列。IE1和IE2蛋白的表达受增强子的调控，此增强子也称为主要增强子立即早期启动了一增强子、IE1/IE2增强子或CMV增强子，是上游调节区复合体的一部分。因集中了细胞转录因子结合位点而具有异常高的活性，并且在多种类型的细胞的影响条件下均有活性。根据对基因表达的影响可将此增强子分为3个区。在CMV感染中，增强子调控的表达先激活后抑制。在CMV复制早期可诱导NF-κB、AP-1和CREB/ATF等细胞转录因子与增强子中多位点结合。感染后可诱导产生NF-kB和 aP-1。在感染晚期，ATF的结合受影响，其活性受病毒基因产物的调节。
　　CMV启动子/增强子被广泛应用于构建高效真核表达载体，用于基因工程、基因治疗和DNA免疫[9]。用基因小鼠分析CMV增强子活性，其主要立即早期启动子（MIEP）的转录活性可能部分决定病毒在子宫内特异性感染胎儿组织的能力[10]。MIEP不是广泛特异性的启动子，因在转基因小鼠中，表达由MIEP调控的报告基因的组织和CMV自然感染的组织一致的
共0条评论&
回答时间： 09:00:14
没听说过这个概念，学习了
共0条评论&
回答时间： 11:37:55
CMV启动子/增强子被广泛应用于构建高效真核表达载体，用于基因工程、基因治疗和DNA免疫[9]。用基因小鼠分析CMV增强子活性，其主要立即早期启动子（MIEP）的转录活性可能部分决定病毒在子宫内特异性感染胎儿组织的能力[10]。MIEP不是广泛特异性的启动子，因在转基因小鼠中，表达由MIEP调控的报告基因的组织和CMV自然感染的组织一致的
共0条评论&
回答时间： 13:39:44
CMV启动子/增强子被广泛应用于构建高效真核表达载体，用于基因工程、基因治疗和DNA免疫[9]。用基因小鼠分析CMV增强子活性，其主要立即早期启动子（MIEP）的转录活性可能部分决定病毒在子宫内特异性感染胎儿组织的能力[10]。MIEP不是广泛特异性的启动子，因在转基因小鼠中，表达由MIEP调控的报告基因的组织和CMV自然感染的组织一致的
共0条评论&
回答时间： 11:00:16
基因工程/基因操作书籍，由复旦/上海生科院研究所专家人员编写，仔细研究。
共0条评论&
回答时间： 12:23:57
进来长长见识
共0条评论&
这个问题已提出一个月以上，回答功能关闭，如需求助可重新使用T7启动子，BL21（DE3)菌株，加入的IPTG的终浓度要到多大才能起到诱导的作用_百度知道
使用T7启动子，BL21（DE3)菌株，加入的IPTG的终浓度要到多大才能起到诱导的作用
提问者采纳
效果不错，不过大多数时候我们需要蛋白的可溶性表达.1mM，所以这个浓度也需要摸索。如果包涵体可以用的话，但是这样非常容易形成包涵体，，比如做抗体，当然这也需要你延长诱导的时间。如还有问题请加QQ，那么当然是蛋白越多越好。如果你的蛋白必须是可溶性表达的话，我用过最低浓度是0，那么建议你用较低浓度的IPTG最佳浓度是1mM
其他类似问题
为您推荐：
其他3条回答
就是你导入后目的蛋白在未诱导情况下也会表达，这可能是大肠杆菌产生了类似IPTG的物质，这个在原核表达中是很常见的另外一个是叫做本底表达
这个本底表达可以抑制吗
在细菌OD600值为1时加终浓度100ug/ml的IPTG.
减低本底表达一是别用LB，换没有乳糖残存的培养基。二是换个更严谨的启动子……
您可能关注的推广回答者：
iptg的相关知识
等待您来回答
下载知道APP
随时随地咨询
出门在外也不愁查看: 8045|回复: 8
求教关于T7,T3，SP6启动子的问题
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
大家好 载体中经常会出现T7 T3 SP6启动子，有时两个启动子在外源基因插入出方向相对出现。
我只知道如pET系列的原核表达载体用的就是T7启动子，BL21（DE3）可以表达T7RNA聚合酶，两个配合使用。
请问 T3，SP6启动子什么时候使用， 有专门的宿主菌吗。我看有买专门的聚合酶，难道只有在做体外实验才用到这两种启动子吗？ 谢谢！
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
大家好 载体中经常会出现T7 T3 SP6启动子，有时两个启动子在外源基因插入出方向相对出现。
我只知道如pET系列的原核表达载体用的就是T7启动子，BL21（DE3）可以表达T7RNA聚合酶，两个配合使用。
请问 T3，SP6启动子什么时候使用， 有专门的宿主菌吗。我看有买专门的聚合酶，难道只有在做体外实验才用到这两种启动子吗？ 谢谢！
T7, T3, SP6是分别从T7, T3, SP6噬菌体里面分离出来的启动子，这些启动子特异性非常高，这些噬菌体侵入细菌时，进行相关蛋白质转录时只被T7, T3, SP6聚合酶识别，而不被细菌的RNA聚合酶识别，这就是pET系列原核表达载体诱导控制表达蛋白的原因，将外源基因插入T7的下游(T7不被细菌RNA聚合酶识别)，然后控制诱导T7 RNA聚合酶的表达来控制T7的活力，启动下游基因的表达，实现诱导控制。这类启动子可以在体外启动RNA转录获得RNA，比如你要做原位杂交想获得cRNA是你就可以将你的探针装在含有上述3种启动子的载体上，买专门的聚合酶就可以，不需要额外的因子参与转录过程，还有比如你要做RNA干扰时，你没有钱合成siRNA，你可以合成DNA，回来自己转录纯化，运用还是蛮多的，
回答的比较乱，帮楼主入门
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
学习了，很有用，在网上找了半天，都是些支离破碎的东西。谢谢啦，有不懂的还会向你请教。
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
学习ing，充电
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
谢谢！受益匪浅哪！
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
请问，我现在有个表达载体只带有SP6启动子，将其导入细胞后，想要得到目的蛋白，应该怎样诱导其表达呢？
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
注册时间 最后登录
秀基因 个 秀蛋白 个
回复 amber314 的帖子
大家好 载体中经常会出现T7 T3 SP6启动子，有时两个启动子在外源基因插入出方向相对 ...
学习了！！
生物秀精品推荐 /1
生物秀论坛手机版全新改版，更快速度，更好体验！拿起手机在浏览器输入，立刻访问体验，或者关注生物秀微信公众号“shengwuxiu”,在下拉菜单里点击链接访问。请问，真核表达载体中T7启动子的作用(启动子,真核表达载体,原核表达)
05:23:41&&&来源：&&&评论：&&
[请问，真核表达载体中T7启动子的作用(启动子,真核表达载体,原核表达)] 请教一下各位前辈，真核表达载体中（比如PCI,PCDNa)T7启动子有什么作用？小弟弱弱问一句，可以用来做原核表达吗？ 关键词:[启动子 真核表达载体 原核表达]…
请教一下各位前辈，中（比如PCI,PCDNa)T7启动子有什么作用？小弟弱弱问一句，可以用来做原核表达吗？
回复T7 sequences could be used for sequencing primer sites in pCI and pc vectors.回复T7 promoters in the pCI and pc two vectors can drive transcription of the downstream coding sequences in the presence of T7 RNA polymerase. This can be done in most in vitro transcription/translation reactions. The transgene in pCI or pcDNA could be expressed If T7 RNA polymerase is coexpressed along with the vector in bacterial host cells. The Ribosome recognition site and LacZ inducible system, however, may be required for high levels of expression.回复非常感谢楼上的解答回复问问如何用T7启动子体外转录呢？也想请教下如何设计带有T7启动子的某序列的引物？T7引物和T7启动子是相同还是互补序列呢？另如何检测转录是否成功？ O(∩_∩)O谢谢
将本文分享到下面的网站：
相关热词搜索：
[请问，真核表达载体中T7启动子的作用(启动子,真核表达载体,原核表达)]延伸阅读：
频道总排行
频道本月排行