谁能详细解释一下共表达和蛋白质融合表达达？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-12-28 08:10 标签： 蛋白质融合表达
（2012o湖州）2012年4月以来，某地病毒性脑炎发病数较以往明显增加．后经查阅，了解到以下信息：
①专家认为这是由埃克30型为主的肠道病毒引起的，主要通过食物和密切接触传播．
②每年均有儿童因感染发病，发现幼儿有发热、头疼．呕吐等症状，要及时到医院救治．
③抗生素是抗菌剂，主要通过阻碍细菌细胞壁的合成起抑菌或杀菌作用．
（1）病毒没有细胞结构，但属于生物的原因是．（选填“能致病”、“能新陈代谢”）
（2）对于病毒性脑炎的患儿，下列叙述正确的是．
A．给患儿注射抗生素
B．散热少于产热导致患儿体温升高
C．患儿应带病坚持上学
D．对患儿进行治疗在控制传染病流行中属于保护易感者
（3）图中能正确解释“患者痊愈后在一段时间内不会再患此病”现象的曲线（①表示首次感染，②表示再次感染）的是．
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开平方公式 语言表达强的亲帮忙解释一下 要脑残能看懂的
我是说把一个实数开平方的公式。。。比如说4725的开平方怎么算
提问者采纳
一般来说就是用配方 比如 aX*X+bX+c 要将它开平方c不管它，把a提出
a(x^2+b/ax)+c完全平方公式后面减掉b^2/4a就可以配方为 a（X+b/2a)^2-b^2/4a+c
4725开平方怎么算……
一个两位数拆成10a+b，(10a+b)^2=100a^2+20ab+b^2,再上去就是三位数(100a+10b+c)^2不难发现两位数的平方肯定是先第一位算和最后一位算最方便，中间不用算，如625，600左右肯定20^2=400,30^2=900,个位是5，所以一定是5。就得到25。1^2=1 2^2=4 3^2=9,4^2=16,5^2=25,6^2=36,7^2=49,8^2=64,9^2=81,平方数的个位数对应的开平方数只有两种可能，好猜，这样的算法是捷径，10000以内方便做但正规方法是一个两位数拆成10a+b，(10a+b)^2=100a^2+20ab+b^2，从高位向低位拆，4725，还不是完全平方数，有小数点，按步骤1.
4000最接近且小于那只有60^2=3600，对应的是100a^2，2.减掉后20ab+b^2=1125,
b^2+20x6xb-1125=0,算b的值，这种算法肯定一正一副取正，算得出小数3.比10000大的数，按第一步，先凑首位，后个位，中间只能凑，用公式算不一定会比凑的方法管用。所以推荐法二法二：笨办法，不一定管用，在一开始看不清这个数时使用，首先去因数，不用每个因数都除，只除，4,9,16这些数，因为完全平方数的因子也一定是完全平方数，那数值一下子小了，但事实上想很多47x47,51x51,就不能用，但照第一个方法很简单就做出来了，所以这只是在数字很大的情况下用就4725而言，得出结果不是完全平方数时，第二步算一下，根号4225=65，根号，纯算开根号，用计算机就可以了，重要的还是公式
提问者评价
恩恩挺详细的
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任意实数开方不是任何人都能计算出来的除非你是计算器，但是把一个正整数开方，有一个简单的方法，就是找到数的所有约数，两个相同的取一个，他们的积就是结果了。例如*3*3*3*7所以√
A+B的平方 等于 A的平方+B的平方+A与B乘积的2倍
我是说。。。比如说4725的开平方怎么算，请让脑残懂，脑残会给分的
按照你上面提供的4725，就一直除以5，知道不能除了为止，再把所有的除数试图相乘成两个一样的数。所以，所有的数，就是找一个最小的除数除下去（中间可以变换除数，让原数尽可能小下去）然后除到实在不能再除了为止，把所有除数相乘为两个一样的数，这个数就是开放后的结果。
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出门在外也不愁HIS融合蛋白表达 出现无法解释现象 请高人帮忙
05:50:17&&&来源：&&&评论：&&
[HIS融合蛋白表达 出现无法解释现象 请高人帮忙] 我用的是pet-20b(+)载体，构建了一个融合蛋白SCFV-OVA，这个载体上有6HIS标签，这样就会形成SCFV-OVA-HIS的融合蛋白 构建成功后，进行了测序，序列完全正确，结果在BL21(DE3)PLYSs里表达，用了各种条件 都出现一个相同现象，就是我用anti-ova抗体检测 在75KD左右就会出现一个特异性条带，正好和预测的SCFV-OVA-HIS融合蛋白分子量相当，但用 anti 关键词:[蛋白表达 抗体 融合蛋白 融合 序列 载体 降解]…
我用的是pet-20b(+)载体，构建了一个融合蛋白SCFV-OVA，这个载体上有6HIS标签，这样就会形成SCFV-OVA-HIS的融合蛋白 构建成功后，进行了测序，序列完全正确，结果在BL21(DE3)PLYSs里表达，用了各种条件 都出现一个相同现象，就是我用anti-ova抗体检测 在75KD左右就会出现一个特异性条带，正好和预测的SCFV-OVA-HIS融合蛋白分子量相当，但用 anti-his抗体检测 什么都检测不到（这个抗体我已经用其他的his融合蛋白测试过，没问题）原因是什么呢 为什么用anti-his抗体检测不到呢，我看序列了 这三个蛋白是完全融合的 中间没有终止密码子呀 经过这段时间摸索，基本可以确定，表达的大部分的蛋白被细菌产生的蛋白酶降解成两个片段SCFV和OVA-HIS 两个片段，不知道该如何避免呀 请高人指教 我裂解时加了(protease inhibitor) 难道是过期了 或者是蛋白表达过程中就已经被降解了吗
不要轻易相信你这个抗体和之前的HIS 标签反应。那只是你之前做出结果了，不代表你这次做的一定正确。你看是不是这样：你把之前表达的融合HIS标签的蛋白和这次的蛋白一起电泳，一起用抗HIS的抗体做WB，保证条件都一样，如果还是之前那个出条带，这次表达的蛋白不出条带，那有可能是蛋白的问题了。但有可能两个都不出条带，那就证明WB过程出问题或者抗体出问题了。
恭喜你！我觉得你的蛋白质是没有问题的，可以接着往下面做原因： 1、anti-his抗体检测 什么都检测不到----不一定是说你的融合蛋白里面没有his，这是因为蛋白质在折叠的时候很可能把his折叠到里面去了，没有暴漏在蛋白质表面。所以会出现你遇到的怪事！2、我遇到过这种情况。在纯化的时候可能会遇到挂不上NI柱的情况。我不知道你的用途如何，如果你要纯化该蛋白质的话，可能会出现挂柱不好，可以换载体，让his在N端，你现在貌似在C端。3、反正his对你的实验结果没什么用，只是可能用它来纯化。所以纯化应该还可以用，但是效果应该不是很好，就看你的要求了。4、纯化可以用其他的方法，比如DEAE,分子筛等等，可以避开his挂住不好。当然不一定挂的不好哈。5、如有疑问，欢迎继续交流！
恭喜你！我觉得你的蛋白质是没有问题的，可以接着往下面做原因： 1、anti-his抗体检测 什么都检测不到----不一定是说你的融合蛋白里面没有his，这是因为蛋白质在折叠的时候很可能把his折叠到里面去了，没有暴漏在蛋白质表面。所以会出现你遇到的怪事！2、我遇到过这种情况。在纯化的时候可能会遇到挂不上NI柱的情况。我不知道你的用途如何，如果你要纯化该蛋白质的话，可能会出现挂柱不好，可以换载体，让his在N端，你现在貌似在C端。3、反正his对你的实验结果没什么用，只是可能用它来纯化。所以纯化应该还可以用，但是效果应该不是很好，就看你的要求了。4、纯化可以用其他的方法，比如DEAE,分子筛等等，可以避开his挂住不好。当然不一定挂的不好哈。5、如有疑问，欢迎继续交流！其他说法基本是认可的，但是第一条有些疑问。做WB的时候，不会应为你的蛋白构象型还是折叠型而有差异。我们知道，在-PAGE的时候，蛋白都是变性了的，也就是说，所有蛋白都呈现一级结构。何来折叠到里面这一说法？WB和ELISA不一样，要区别。仅供参考。
其他说法基本是认可的，但是第一条有些疑问。做WB的时候，不会应为你的蛋白构象型还是折叠型而有差异。我们知道，在-PAGE的时候，蛋白都是变性了的，也就是说，所有蛋白都呈现一级结构。何来折叠到里面这一说法？WB和ELISA不一样，要区别。仅供参考。[/quote这种情况经常有，原因不明，有可能是翻译不完全。你可以用Ni试一下能不能挂上。
其他说法基本是认可的，但是第一条有些疑问。做WB的时候，不会应为你的蛋白构象型还是折叠型而有差异。我们知道，在SDS-PAGE的时候，蛋白都是变性了的，也就是说，所有蛋白都呈现一级结构。何来折叠到里面这一说法？WB和ELISA不一样，要区别。仅供参考。[/quote这种情况经常有，原因不明，有可能是翻译不完全。你可以用Ni试一下能不能挂上。你是说histag在完全变性的条件下还不能暴露出来从而用检测出来吗？ 其实楼主做antihis的检测时的确应该拿个你以前做过的蛋白做对照，这样才能排除出问题的因素。另外做表达纯化一般测序之后没问题，表达出来的分子量也对，而且你用蛋白序列的抗体也检测出来了，要是能挂Ni柱根本没必要再去检测histag吧
谢谢 我今天已经用以前蛋白作对照 和这次诱导的细菌一起跑电泳，明天出结果，看看会是什么现象。我也在想会不会蛋白质在折叠的时候很可能把his折叠到里面去了，没有暴漏在蛋白质表面，但也确实如sanping88所说，蛋白都是变性了的，应该把抗原都暴露出来了 真是搞不清楚呀，我今天又仔细比对了序列 完全正确，序列上也是融合的 ，唉 真是见鬼了 我用HIS标签确实是想纯化的 不过因为用anti-his抗体没做出来 还没敢去纯化，今天也决定准备摇200ml菌 去纯化一下试试
开始 我一直想是细菌的问题 ，换了好几种细菌 都是这个问题 诱导的时候 我看到这个蛋白的表达也不高 但我想WESTERN总能做出来吧 结果用 ANTI-HIS抗体就是做不出来 同样的细菌 我换其他蛋白，这些蛋白也是构建在同样载体
同样诱导条件 就能诱导大量表达，唉 蛋白本身会不会有问题呢？
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