生物问题，谢谢 生物股长。。。。。。。。。。。

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2013-01-02 16:25 标签： 谢谢 生物股长
解决时间: 22:17
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我是初学者中的初学者，从手中的书和文献中并没有看到，IP实验为什么要用IgG做阴性对照。
IP的方法是，如果测B是否和A有相互BINDING，那么固定细胞、裂解细胞、离心并提取蛋白后，加入抗A的一抗，然后加入抗一抗的珠子，然后离心，然后测蛋白浓度，然后western，然后在膜上加抗B的一抗，然后加抗这个一抗的二抗，然后显影。
问题一，我上述方法是否表述正确？
问题二，如果上述所有一抗均为来源于兔的，那么对照用的IgG是否必须是正常兔的？是否是直接从公司买的？
问题三，IgG在哪一步加入，替代了什么？
谢谢！我会持续关注此贴.
提问者： [] [] []
回答者： [] [] []
一级 一星助者
1.方法表述的顺序基本正确，但细节要注意：不用固定细胞，只是收集细胞并裂解，暂时不做的，细胞保存在-80度。全过程要尽量在4度进行，样品要在冰上。测蛋白浓度应在裂解完细胞收集了含蛋白上清后测定，而不是在IP后测定，严格讲，IP本身不是定量的实验。
2. 对照所用抗体来源必须和IP用抗体一致，如果用的是抗血清，也要用相同来源的免疫前血清。如果一抗是纯化的商品抗体，也可以买商品的纯化IgG。
3. IgG是作为IP时一抗的非特异对照，替代的是IP时的一抗，要在往裂解上清中加一抗时在对照管平行加入。
欢迎对最佳答案进行评论或补充，发表您的不同见解！
请问下为什么不要固定细胞呢》我现在正在做，甲醛固定了的细胞裂解后做出的，IP用的兔IgG阴性对照都被WB羊抗鼠二抗给拉下了条带，而input什么条带都没有，样品也只有和IgG一样的条带。而之前没固定的做出的片子很漂亮。
作者：青后 时间： &共0人支持此评论
找到"【求助】IP为什么要加IgG做阴性对照？（我已搜索论坛和GOOGLE，无满意答案，谢谢）"相关问题约14145篇，用时0.271578秒
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生物秀旗下 [Website]这是生物题,希望大家帮忙解决一下!!!谢谢各位!问题是:当人体患了病毒性感冒,此时感冒病毒已突破了人体的几道防线?A一道B两道C三道D四道
这是生物题,希望大家帮忙解决一下!!!谢谢各位!问题是:当人体患了病毒性感冒,此时感冒病毒已突破了人体的几道防线?A一道B两道C三道D四道
问题是:当人体患了病毒性感冒,此时感冒病毒已突破了人体的几道防线?
希望各位能给出明确的解释!谢谢啦!
B 因为第一道是黏膜之类的
第二道是血液中的杀菌物质，如吞噬细胞等
第三道防线启动，也就是特异性免疫开始
其他回答 (2)
四道！１肺部　　２血液　　３气管　　４头部
我是一名中医，这是我给你的建议，请你斟酌参考：
首先是预防：
1 冬季的气候比较干燥，尤其是现在暖冬，所以一定要多补充水分，
可以考虑喝水（淡盐水最好）；
吃含丰富Vc的水果。
这样就会让自己更适应干燥的冬季。
2 冬季不要睡懒觉，应该早期锻炼一下（大雾天免了），这样会大幅提高抵抗力。
早起锻炼，一天精神倍儿爽。
3 冬季一切工作都到了结尾，很容易疲劳战术，然后是大大的放松，更有的会通宵达旦的玩。
这些都是不利因素。
一个原则，应该有充足的睡眠。
4 过年的时候更要注意休息的基础上，还要注意饮食，吃个七分饱。
下面说一下得了感冒应该注意的：
1 坚持上面的1，3，4。身体恢复差不多了，接着补上上面第二条。
2 分清得的感冒的性质。
按中医有热性和凉性。
热性的表现是：流黄浊鼻涕，发热，不想盖被子和多穿衣物；
凉性的则相反。
热性的要吃去热的感冒药：银翘片等。
凉性的要吃祛风祛寒的药：比如速效伤风感冒胶囊。
3 非常的发烧，则应点滴，会比较快。
上了40°就应该立马看医生。不能自己吃药看病。
4 持续低烧，则建议你：吃治疗温热病的药。
比如：玄麦甘桔冲剂，板蓝根冲剂。
低热很多天，一定要注意补液，千万别脱水。
不要激烈运动等。
5 一些比较管用的小方法：
喉咙疼，指尖放血，立马见效；
低热很多天，建议放血或者刮痧疗法，效果不错；
6 最后是注意心情愉快！这也很关键！
这就是我给你的建议，虽然有点啰嗦，但尽力了。
希望能给你带来些许帮助。
如果有很急的事情，建议找医生。方便的话可以找我（QQ联系）
祝福你：身体安康，万事顺心！！
同意，四道！！
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招生考试领域专家请问用Clustal、Mega 4对细菌鉴定时遇到的问题谢谢(细菌,序列,菌株,比对)
14:25:24&&&来源：&&&评论：&&
[请问用Clustal、Mega 4对细菌鉴定时遇到的问题谢谢(细菌,序列,菌株,比对)] 小弟有一株细菌，生化鉴定后采用16S rDNA对其进行了分子。由于对分子方面的知识有限，因此想请教各位战友，希望能得到大家的帮助，谢谢了！
首先用试剂盒提取了细菌的DNA，之后16S rDNA的PCR扩增及测序全部让公司完成的。扩增引物为通用引物，27f及1492R。之后公司给我一个拼接好的序列，共有1448个碱基。
之后我按照别人的方法，讲此序列粘贴到NCBI中进行BLAST比 关键词:[序列 菌株 细菌 比对 系统进化树 剪切 测序]…
小弟有一株细菌，生化鉴定后采用16S rDNA对其进行了分子。由于对分子方面的知识有限，因此想请教各位朋友，希望能得到大家的帮助，谢谢了！
首先用盒提取了细菌的，之后16S r的PCR扩增及测序全部让公司完成的。扩增引物为通用引物，27f及1492R。之后公司给我一个拼接好的序列，共有1448个碱基。
之后我按照别人的方法，讲此序列粘贴到NCBI中进行BLAST比对，发现与1000个以提交的菌株的序列达到98％以上的同源性；其中绝大数是气单胞菌属种类。
虽然有1000多个菌株，但是很多都是没有种名的，因此我就选择了十几株有种名的，并复制了它们的序列，采用Clustal X1.83对这些序列进行了比对，然后采用Mega4按照比对后的结果做了系统进化树。在这个过程中，我有一些不明白的地方，想请大家解答一下，看看***作的过程有没有错误。
（1）在BLAST比对时，能否可以得到全部是ATCC标准菌株的序列，而不要显示没有鉴定到种的菌株，因为下个阶段做进化树时应该选择知道种名的菌株，这样才能知道需鉴定的菌株是什么种。
（2）用clustal进行多序列比对时，对比对结果保存时，有的人说要对结果序列进行首尾剪切，如果要剪切的话，应该以什么为准呢？
（3）用Mega4做系统进化树时，进化关系怎么看？谢谢！
回复下面为比对后序列的首尾部分，在采用Mega做进化树前，要不要进行剪切，如果需要剪切，是否从这些菌株全部匹配的地方开始剪切，如图从第50、1412个碱基处剪切（椭圆表示）？谢谢！回复序列比较图的尾部！回复下面是采用Mega4 做的系统进化树，M3(椭圆标记)为需鉴定的菌株，其应该与哪个的进化关系最近，是如何看进化关系的？进化树上的数字表示什么，是同源性吗，怎么这样低？谢谢！回复我又重新选择了20株细菌，进行多序列比较后，分别采用没有剪切和剪切后的进行了Mega做进化树，发现结果还是有区别的！下图为未剪切的比对序列！回复下图为剪切后的多序列作图：回复自己顶一下！回复大家帮帮忙啊！谢谢了！回复下面为比对后序列的首尾部分，在采用Mega做进化树前，要不要进行剪切，如果需要剪切，是否从这些菌株全部匹配的地方开始剪切，如图从第50、1412个碱基处剪切（椭圆表示）？谢谢！请问怎么除头去尾呢？怎么我的无法除？
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提问者采纳
可很抱歉看不清楚啊
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