marker跑不开是什么原因(跑胶,缓冲液,琼脂糖,硼酸)
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[marker跑不开是什么原因(跑胶,缓冲液,琼脂糖,硼酸)] 各位老师：
我用的是HindIII，1%的琼脂糖，缓冲液用的是(1*)TBE,110V，40min跑胶，结果老是跑不开，60度处理了15分钟出现条带，但是还是分不开。增大胶浓度至1.5%还是不行，高手给指点一下是什么原因啊！！急急！！！我用的（10*）TBE配方：tris 27硼酸 13.75o.5M EDTA(PH8.0) 10ML 关键词:[琼脂糖 缓冲液 硼酸 跑胶 胶浓度 条带]…
各位老师：
我用的是HindIII，1%的糖，缓冲液用的是(1*)TBE,110V，40min跑胶，结果老是跑不开，60度处理了15分钟出现条带，但是还是分不开。增大胶浓度至1.5%还是不行，高手给指点一下是什么原因啊！！急急！！！我用的（10*）TBE配方：tris 27硼酸 13.75o.5M (PH8.0) 10ML
回复你的跑不开指的是大片段分不开?如果是大片段分不开不应该增大胶浓度.应该是降低才对.另外不明白你60度处理为的是什么,我们实验室还没这样用过,还望指教回复我们用的是TAE，也是1x的，我配1.5%的胶，150V，30min，可以看到marker跑的开。昨天新换的marker，用1.5%的跑不开，今天用2.0%的就跑开了，具体的你的bp多长我就不知道了，我附上胶浓度和bp的线性关系（最佳分辨范围）供你参考。
1000------30000bp
800-------12000
500-------10000
400-------7000
200-------3000
50-------2000回复浓度适当降低有利于marker分开。回复你的跑不开指的是大片段分不开?如果是大片段分不开不应该增大胶浓度.应该是降低才对.另外不明白你60度处理为的是什么,我们实验室还没这样用过,还望指教首先谢谢你!我是指大小片段都分不开。能看到带，但是分不开。看她marker的说明说是它的原始末端经常由cos末端结合在一起，60度处理能使电泳图像更清晰。回复谢谢另外两位朋友! 我试试两位给的建议！回复我的胶是2%的，跑了两个小时只跑了一半，不知怎么回事，请各位大虾帮帮忙！回复BUFFER量不够也会使MARKER跑不开。换新的BUFFER，液面高于刻度。
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唱多的都是联合基因公司的人他们把股价拉高然后套现了他们公司的人自己都跑掉了,股价肯定还要跌!
作者： 220.248.54.* 的［原帖］
11:00:15又开始跌了，唉支持
又开始跌了，唉
江苏苏州股友
楼上的是八婆啊，这么烦。&
湖北荆门股友
警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示：00399股价可能要下到0。4元 警示...
早该醒了，没有业绩怎么可能拉升。
感觉的确如此今天上涨没有量的支撑，明显今天的涨是庄诱多。
广东深圳股友
在这里唱多唱空的都是联合基因的加盟商,要不谁有空来这里遛达啊唱多的无非是对公司的发展前景认可而唱空的都是先认可现在又不认可了而已.你敢说你不是联合基因的加盟商吗?■■■麋鹿-深圳加盟商
广东深圳股友
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意见反馈回到顶部总DNA电泳拖尾严重是什么原因！！？？ - 分子生物 - 小木虫 - 学术 科研 第一站
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总DNA电泳拖尾严重是什么原因！！？？
如图，提完DNA后跑的1％琼脂糖电泳，TBE缓冲液。
最近跑的DNA电泳都拖尾很严重，这次直接整条泳道布满了，连条带都没了，你们出现过这种情况吗？是什么原因呢。
降解了，机械切割了？抽提总DNA时即便是tips都可以把DNA切割断的。 : Originally posted by ssssllllnnnn at
降解了，机械切割了？抽提总DNA时即便是tips都可以把DNA切割断的。 机械切割一般都有什么？？我DNA是用试剂盒提的，以前都挺好的。降解的话还有什么别的原因呢？谢谢 不一定的DNA降解。总DNA想跑i琼脂糖电泳有时候是会拖尾的。因为你的胶浓度高了，条带太多，分不开。跑的时间也不够，你试试用脉冲场电泳跑下看看呢，应该会好很多。如果想跑的好看，用PAGE跑把，查查文献再看看。 : Originally posted by snoopytbw at
不一定的DNA降解。总DNA想跑i琼脂糖电泳有时候是会拖尾的。因为你的胶浓度高了，条带太多，分不开。跑的时间也不够，你试试用脉冲场电泳跑下看看呢，应该会好很多。如果想跑的好看，用PAGE跑把，查查文献再看看。 另外，为了提高胶的分辨率，你可以跑完后再用核酸染料染，加1M 氯化钠到染液里面，染大概半小时拿出来直接拍。试试看，效果会好很多哦 : Originally posted by snoopytbw at
另外，为了提高胶的分辨率，你可以跑完后再用核酸染料染，加1M 氯化钠到染液里面，染大概半小时拿出来直接拍。试试看，效果会好很多哦... 跑之前，胶里面别加任何染料哦 : Originally posted by snoopytbw at
不一定的DNA降解。总DNA想跑i琼脂糖电泳有时候是会拖尾的。因为你的胶浓度高了，条带太多，分不开。跑的时间也不够，你试试用脉冲场电泳跑下看看呢，应该会好很多。如果想跑的好看，用PAGE跑把，查查文献再看看。 看maker就不像是胶浓度太高了吧，maker跑的那么好，原因是maker非常纯，那其他基因拖尾的原因主要可能是提取的不够纯，含有蛋白质，或提取过程中有碎裂的片段。 : Originally posted by snoopytbw at
另外，为了提高胶的分辨率，你可以跑完后再用核酸染料染，加1M 氯化钠到染液里面，染大概半小时拿出来直接拍。试试看，效果会好很多哦... 你们核算染料用的啥？ : Originally posted by 考拉003 at
看maker就不像是胶浓度太高了吧，maker跑的那么好，原因是maker非常纯，那其他基因拖尾的原因主要可能是提取的不够纯，含有蛋白质，或提取过程中有碎裂的片段。... 他跑的全基因组DNA。不是pcr产物。。。。 : Originally posted by 考拉003 at
你们核算染料用的啥？... gelred DNA电泳拖尾的可能原因和解决方法：
1.电压过大，根据电泳槽设置合适的电压；
2.缓冲溶液离子浓度过高，调整盐浓度在0.1mol/L以下；
3.梳子插得过深，样品从胶板下部通过，梳子底部与胶槽应隔1-2mm（限于水平电泳）；
4.上样量过多，稀释DNA样品浓度或者减少上样量；
5.酶切不完全，使用活性酶重新酶切；
6.DNA发生了降解，重新提取DNA，并且加入DNase的抑制剂或者足够量的蛋白质的变性剂。 楼主的DNA是总DNA，所以与酶切无关，取消上贴的第五条。 : Originally posted by 凌波丽 at
DNA电泳拖尾的可能原因和解决方法：
1.电压过大，根据电泳槽设置合适的电压；
2.缓冲溶液离子浓度过高，调整盐浓度在0.1mol/L以下；
3.梳子插得过深，样品从胶板下部通过，梳子底部与胶槽应隔1-2mm（限于水平电泳 ... 非常感谢你的回复，前三点都没什么问题，
4我是用5+1微升上样跑的电泳，量应该合适我会试试稀释后再跑跑看。
6我是用试剂盒提取总DNA的，提完就跑电泳了结果就如图那样，这样降解的可能性大吗？
因为以前一直都是同样的方法条件做过没有问题，现在是换了个实验室做的，应该跟这个无关吧。。。 : Originally posted by snoopytbw at
不一定的DNA降解。总DNA想跑i琼脂糖电泳有时候是会拖尾的。因为你的胶浓度高了，条带太多，分不开。跑的时间也不够，你试试用脉冲场电泳跑下看看呢，应该会好很多。如果想跑的好看，用PAGE跑把，查查文献再看看。 谢谢回复。
现在也只跑过琼脂糖的，接触这方面不久，脉冲场和PAGE我回去查查文献啥的看看 : Originally posted by 考拉003 at
看maker就不像是胶浓度太高了吧，maker跑的那么好，原因是maker非常纯，那其他基因拖尾的原因主要可能是提取的不够纯，含有蛋白质，或提取过程中有碎裂的片段。... 如你所说maker挺好的就是DNA不行，但这是用试剂盒提取的，一直也没啥问题。如果有蛋白或者破碎片段，有什么办法处理吗，纯化会不会好点？ 以我的经验，你的样品(DNA提取前)没保存好。 : Originally posted by liuizhe at
以我的经验，你的样品(DNA提取前)没保存好。 我是做堆肥方面的，样品就是一些有机肥料，而且一直是负二十度保存，中间也就DNA的时候取出来过。这个保存对DNA提取影响很大是吗？请指教 : Originally posted by 梦梦神 at
我是做堆肥方面的，样品就是一些有机肥料，而且一直是负二十度保存，中间也就DNA的时候取出来过。这个保存对DNA提取影响很大是吗？请指教... 比如，我采鱼的样，如果小鱼直接投酒精中，或者采后-20能带回实验室，提DNA没问题，如果常温直接运回，时间长点（比如过夜），常会出现类似你的结果。 : Originally posted by 梦梦神 at
我是做堆肥方面的，样品就是一些有机肥料，而且一直是负二十度保存，中间也就DNA的时候取出来过。这个保存对DNA提取影响很大是吗？请指教... 我觉得你的样品应该采取合适的方法处理一下，使微生物不要作用，以防腐变。 : Originally posted by liuizhe at
我觉得你的样品应该采取合适的方法处理一下，使微生物不要作用，以防腐变。... 目前也就采集完样品直接保存，不过这个问题确实值得考虑
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