免疫组化笔中一抗孵育的时间，温度怎么确定

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-02-02 07:26 标签： 免疫组化结果怎么看
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免疫组化组织细胞的固定 脱水 透明 脱蜡
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免疫组化组织细胞的固定
& & 凡需进行病理研究的标本均需进行固定。将组织置于某些化学中，使细胞内的物质免疫组织化学实验技术及应用尽量接近于其生活状态时的形态结构和位置称为固定。而用于免疫组化研究标本的固定不仅是使细胞内的蛋白质凝固，终止或减少外源性和内源性细胞内分解酶的反应，防止组织细胞自溶，更重要的是保存组织或细胞内的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散。
& & 不同的抗原，其抗原稳定性不同，依抗原耐受固定液的程度可分为：①不稳定性抗原，如T淋巴细胞表面抗原属此类抗原，一般以冰冻切片进行免疫组化染色；②半稳定性抗原，如B淋巴细胞的胞浆免疫球蛋白等；③较稳定抗原，例如HBsAg、HBcAg、AFP、CEA、S—100、Keratin和部分多肽类激素等，其抗原性受固定剂种类、固定时间、温度等影响不大。
& & 固定剂的种类很多，性能不一，因此固定不同的组织应选择合适的固定剂，特别是标记半稳定抗原时，更要选择合适的固定剂和固定条件。
& & 一、固定液的种类
& & 较好的固定液应具有强渗透力，能迅速渗入至组织内部；其次不会使组织发生过度收缩变形，并能使组织内易观察的成分得以凝固为不溶性物质；还要使组织达到一定硬度，有较好的折光率。固定液分为简单固定液和混合固定液。 因目前大多数固定液都是有毒有机溶剂组成，欧美国家已不再使用，基本由环保组织固定液替代。西奈山环保组织固定液由植物多糖、乙醇、醋组成，固定效果明显优于常规甲醛。
& & 二、固定的方法
& & 1．浸泡法
这是最常用的固定法，将取好的组织直接浸泡在固定液中，固定的时间一般在2～24h它适用于动物标本、尸检标本及临床活检标本等。
& & 2．蒸气法
& & 比较小而薄的标本可用锇酸或甲醛蒸气固定。主要用于血液、细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。具体方法：在一有盖培养皿内滴人1％一2％锇酸水溶液3滴，将涂片放人其中，固定30s至lmin左右，立即水洗后进行染色。
& & 3.注射、灌注固定法
& & 主要适用于动物实验标本的固定。将固定液注入血管，以达到充分的固定。经血管分支到达整个组织或全身
(1)局部灌注固定 固定肺组织可将固定液从气管或支气管注入，注入速度不要太快，用力均匀，注入量适当，以免胀破肺泡。固定眼球组织可从眼后房注人固定液。固定肝、肾组织则可从肝、肾动脉注入固定液，同时切断其静脉使得血液排出。脑组织的固定，必须先麻醉动物，分离颈动脉，注射器的针尖向着头部的方向注入固定液。
(2)全身灌注固定 较大的动物往往采取输液方法，将固定液从一侧颈总动脉或股动脉输入，将另一侧相应的静脉切开放血。固定液的输入量因动物而异，兔、猫约500～1000ml，猴、狗约ml。
& & 4．微波固定法
近几年来微波固定法一直可见报道。经微波固定的组织具有收缩较小、核膜清晰、染色质均匀、分辨清晰等特点，但必须严格控制微波固定的时间和温度。
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tissueclearing 发表于
免疫组化组织细胞固定过程常见问题与原因
1、问题：组织固定不佳.
原因:(1)固定的容器过小或标本数量过多 ...
脱水这一步目的说错了吧，脱水是因为水不能和石蜡混合，才脱水，而不是不能和笨混合
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谢谢分享~~
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好东东，再次关注推荐下
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新学期，前来维护，多谢支持
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新春到，支持环保，多用环保试剂，少放鞭炮
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很好~给了我一点灵感哈哈，谢谢楼主
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环保组织透明液，是什么东东
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