平板计数琼脂使用方法稀释法有哪些优点?

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-03-05 21:37 标签： 琼脂糖平皿法
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实验中标准溶液的配制采取逐步稀释的方法,有何优点?
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具有准确和方便的优点.如分析室配制10ppm的氧化钾标准溶液,首先用1000毫升的容量瓶配制1000毫升1000ppm的标准溶液,再用10毫升的移液管吸出10毫升1000ppm的标准溶液,用1000毫升的容量瓶稀释100倍定溶,配制成10ppm的标准溶液.配制1000毫升1000ppm的氧化钾标准溶液需称取基准试剂氯化钾1.5829克,如果分析天平的称量误差是0.0001克,称量的相对误差是0.006%；如果直接配制1000毫升10ppm的标准溶液,需称取氯化钾0.0158克,称量的相对误差是0.63%,误差较大.采用两步配置法,10ppm的标准溶液用完后,可用剩余的1000ppm的标准溶液直接配制,省去烘干基准试剂的麻烦,比较方便.
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【求助】为什么微量肉汤稀释法MIC测定低于琼脂稀释法MIC？
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这个帖子发布于3年零195天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近做MIC测定，革兰氏阳性球菌，采用微量肉汤稀释法(BMD)测定MIC发现比琼脂稀释法(AD)低1倍。BMD的接种菌量是用0.5麦氏单位菌稀释1000倍，菌和药物分别加100μL测定，菌的终浓度为5x10^4 CFU/ml；AD的接种菌终浓度是1x^4 CFU/ml 。如果用AD，板子上要求完全无菌生长；如果用BMD，肉眼判断无菌生长，或测定OD600辅助判断。我的AD方法MIC是16mg/L，用BMD测MIC是8mg/L，之后用BMD8和16浓度孔里的菌液接种MH平板，发现即使抗生素浓度为16mg/ml的时候，MH板子上依然有菌生长。看结果整个人都风中凌乱掉了，求各位大侠答疑，谢谢！
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首先，微量肉汤稀释法做MIC的标准接种菌量应该是5x10^5 CFU/ml，你用的菌量少了10倍，这可能是造成你MIC差两倍的一个重要原因。至于后来你用BMD8和16浓度孔里的菌液接种MH平板，发现即使抗生素浓度为16mg/ml的时候，MH板子上依然有菌生长。这就牵涉到耐药突变的问题。由于有药物选择压力，细菌产生耐药突变导致细菌在16mg/ml的MH板子上有生长。
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1.这个不是菌浓的问题，即使是同一种方法，你也不能保证每次得到同样的值，所以解释标准里面质控菌株都是一个范围。2.参见MIC和MBC的区别
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yunhuaxubruce 首先，微量肉汤稀释法做MIC的标准接种菌量应该是5x10^5 CFU/ml，你用的菌量少了10倍，这可能是造成你MIC差两倍的一个重要原因。至于后来你用BMD8和16浓度孔里的菌液接种MH平板，发现即使抗生素浓度为16mg/ml的时候，MH板子上依然有菌生长。这就牵涉到耐药突变的问题。由于有药物选择压力，细菌产生耐药突变导致细菌在16mg/ml的MH板子上有生长。 首先感谢回复，接种菌量我查了CLSI的M07-A9，上面确实说明微量稀释法是5x10^4CFU/孔，即0.5麦氏浊度稀释1000倍，然后对倍稀释就行。然后是MIC16，因为在最初接种时会有原始菌量，即使药物抑制细菌生长，但并没有杀死，肉汤微量稀释法只需要肉眼判断即可，如果菌被生长被抑制，按初始接种菌量，肉眼是无法判断生长的，但画板子一定能长。我提问的时候忽略了原始菌量。而BMD为什么MIC比AD低是刚开始是真心不明白，但参见楼下的大神回复，确实是范围问题，比如CLSI规定稀释法细菌对抗生素敏感一般用小于等于多少。依然感谢你的回复，有讨论真好~
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关于丁香园度壮观霉素的琼脂培养基采用琼脂稀释法[_百度文库
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你可能喜欢目前常用的稀释法药敏试验有几种，各有哪些优缺点？
全部答案（共1个回答）
稀释法药敏试验因其采用的介质不同可分为液体稀释法和琼脂稀释法，又可因采
用的容器不一样分为试管稀释法和微量稀释法，或称常量法和微量。前者使用无菌的 13 mm × 100 mm试管，每一浓度抗菌药的量至少为1后者使用8 × 12的U形底小孔 的微量稀释板，小孔内装有0.1 ml肉汤。琼脂稀释法又因在平皿中进行而称为平皿稀释 法。微量稀释法的优点为试剂材料较节省，而且微量板中可预先配制好抗菌药和培养基，
冷藏后一定时期内使用，较为方便。与试管稀释法相比，琼脂稀释法配合多点接种器使 用，可同时进行大量菌株的药敏试验，实验结果重复性好，缺点是不能进行最低杀菌浓度 (mnmal actecdal concentaton, MBC)的测定。肉汤稀释法包括常量法和微量法。
试管稀释法和微量稀释法细菌的最终接种菌量均为105 CFU/琼脂稀释法时 细菌的最终接种菌量为104 CFU/点。
肉汤微量稀释法使用强化布鲁肉汤培养基，在布鲁肉汤中加人氯化血红素 (5m/ml)、维生素K (lm/ml)和5%溶解马血。
厌氧菌体外药敏试验的方法分为扩散法和稀释法两大类。厌氧菌的扩散法药敏试验因影响因素较多，一般不用作药敏分析之用，仅用于菌种鉴定。故厌氧菌的体外药敏试验多采用稀释...
操作步骤如下：
菌悬液的制备：配制与0.5号麦氏比浊管相当浓度的菌悬液，最理想的是，在 15 mn内用水或生理盐水稀释，调整接种液，使其接种后达到每孔...
你是实习医生吗？我告诉你：慢性心衰的病人，在常规服用地高辛的过程中，如果病人心悸、气促加重，在用氨茶碱的同时，可以追加西地兰混于50%葡萄糖中，缓慢静注，但用量...
答: 传统的观念认为汤是很有营养的，昕以当人需要进补的时候。一般
都会选用汤来进行。不过，如果你想要用汤来补充维生素，那么，就很
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有这样一组试验，分别...
答: 不要吃辛辣的刺激性食物。。。。。。。。。。。。。。
答: 那就看你护理不护理了？你要是平时注意护理的话是不会再严重的，但是你要是不治的话也不好看啊？我脸上原来也有，后来就用祛红&搭档治好了！呵呵，要不你也试试这个吧！效...
答: 前列腺炎主要有下列5组症状。
（1）疼痛：主要表现为会阴部、肛门部、后尿道坠胀不适或疼痛，或耻骨上、腹股沟部、腰骶部、睾丸、阴茎等处不适或隐痛，或股以下膝以上有...
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