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【求助】血清 microRNA的 提取方法？ qRT-PCR Ct值为什么这么高？
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这个帖子发布于6年零140天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位做过miRNA实验的达人请进，我最近看了一些miRNA的文献，产生一些疑问；经过做预实验，碰到一些问题：1.miRNA在血清中很稳定，在组织中也是一样稳定吗，没有了血清中蛋白的保护，提取得到的溶于水的RNA是否会容易降解？（注：因为我看文献，提到血清miRNA定量不好选内参，做组织RNA可以用U6，但是血清中好像不行；PNAS有篇文章用3种线虫miRNA作为内参，推荐在血清里加入trizol后再掺入这几种miRNA，防止降解；我不知道是因为它们是外源miRNA，还是因为所有miRNA脱离蛋白保护都会容易被降解）。2.我用TRIZOL法提取血清的总RNA，最后是用水溶解，中间异丙醇沉淀是否会损失大量小分子RNA，离心时小分子RNA能否完全离下来？3.200微升血清提取miRNA，最后用30微升水溶解，测紫外吸收OD260值为0。我选了miR-let7a，miR-16，都是丰度较高的作为目的miRNA进行检测。后来做qRT-PCR得到的Ct值太高，30到35之间（文献做的23左右），做了几次都是这样。4.文献中还提到用简单的酸酚/氯仿抽提3次，获得的上清就可以做qRT-PCR,我做的时候，发现离心后上清的水相体积很少甚至没有，每次需要离心1个小时才行，吸那么少的上清还容易污染DNA和蛋白。用200微升血清，3次离心后只有35微升。用紫外吸收法测量浓度竟然是几十微克/微升，明显不正常，而且OD260/OD280较低，1.5-1.6。 我用收到的上清做qRT-PCR，没有Ct值。可能出现问题的环节：酚未饱和？（新买的水饱和酚，应该没问题）希望各位有经验的大大们多多提出宝贵意见，先在此谢过了！
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能请教一下你从血清中提取总RNA，然后分离miRNA的具体步骤嘛？？？
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200ul的血清，你用了多少量的Trizol?
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OD260/280在1.5以上已经不错了啊，我从血清中提的都在1.2左右，CT值跑出来是34左右，太大。可以跑个电泳看看
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提取血清RNA和提取组织RNA步骤基本一样，就是第一步trizol和血清3:1到5:1左右。
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请问楼主在血清microRNA反转录以及后续PCR所用的试剂是哪个公司的？做的效果如何？本人现在也在做这块，但是对于试剂的选择有点搞不清楚，不知道该怎么选择。能否详细讲一下，谢谢！！！
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北京RNAmisi microRNA快速提取试剂盒多少钱
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产品编号：RN0501
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产品介绍：
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4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RNAi，RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
本产品能有效提取核苷酸大小为15~30bp的RNA(包括siRNA和miRNA）。其独特的裂解液在迅速裂解细胞的同时灭活细胞RNA酶；稳定性极佳的进口RNase-free吸附柱可选择性的吸附RNA包括微RNA；配方独特的漂洗液去除杂质以确保获得高纯度的RNA，操作简单快捷；产量高。每次可处理约107悬浮细胞或者25~300mg动物组织，可用于RNAi/RT-PCR/Northern blot和调节小RNA的研究。
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RNAmisi microRNA快速提取试剂盒质量稳定、价格合理，以下是我公司推出的优势产品，希望广大客户来电咨询：
117-82-8邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯/邻苯二甲酸二甲氧乙酯/1,2-苯二甲酸二(2-甲氧乙基)酯/邻苯二甲酸二(2-甲氧乙基)酯/邻酞酸二甲氧基乙酯/氟氯菌酯/邻苯二甲酸二甲氧基乙酯/Bis(methylglycol) phthalate
DEAE纤维素DE-32/二乙氨基乙基纤维素32/DEAE-cellulose DE-32
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植酸酶/肌醇六磷酸酶/Phytase from wheat
单宁酶/鞣酸酶/丹宁酶/单宁酯酰水解酶/Tannase
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140-10-3肉桂酸/桂皮酸/苯丙烯酸/亚苄基乙酸/桂酸/&-苯基丙烯酸/苯基丙烯酸/Cinnamic acid
CAS：99-11-6柠嗪酸/2,6-二羟基异烟酸/2,6-二羟基吡啶-4-羧酸/二羟氮苯甲酸/二缩一酰胺柠檬酸/Citrazinic acid
108-80-5三聚氰酸/氰尿酸/对称三羟基三氮杂苯/2,4,6-三羟基-1,3,5-三嗪酸/1,3,5-三嗪-2,4,6-(1H,3H,5H)三酮/异氰脲酸/ Tricyanic acid
537-98-4阿魏酸/反式阿魏酸/反式4-羟基-3-甲氧基肉桂酸/4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸/咖啡酸-3-甲醚/trans-Ferulic acid
506-12-7十七酸/珠光脂酸/十七烷酸/十七碳酸/Heptadecanoic acid
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【求助】用TRIzol提取血尿中的microRNA的具体方法
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最近准备用TRIzol提取血尿中的microRNA,求操作的具体方法
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糯米丸子0205 最近准备用TRIzol提取血尿中的microRNA,求操作的具体方法按照TRIZOL试剂说明书的步骤就可以，提取过程一定要用无RNA酶的耗材及试剂。
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提尿中的microRNA也跟血的一样吗，新手，求大师指点指点。
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我也想知道，我老板也让我做这一方面，但是提取尿沉渣之后并没有提出总RNA，想请教。。
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用专门针对体液的trizol ls
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老博，新手，也来关注下，
泌尿外科(医学生)
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